Evaluation of a bovine pregnancy-associated glycoprotein enzyme-linked immunosorbent assay kit for serological diagnosis of pregnancy in sheep

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.

Evaluation of a bovine pregnancy-associated glycoprotein enzyme-linked immunosorbent assay kit for serological diagnosis of pregnancy in sheep

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.

Detecção de ácidos nucleicos em tecidos de gerbils submetidos à infecção aguda por Neospora caninum

Neospora caninum is a protozoan of great importance for livestock, mainly by causing reproductive diseases in cattle. Gerbils (Meriones unguiculatus) may be a model to reproduce experimental acute neosporosis of cattle. In this study two groups of gerbils were formed (n=10) and gerbils were inoculated with N. caninum tachyzoites (NC-1 strain) at two different doses appropriate to cause acute neosporosis: 5x10(6) tachyzoites ml-1 (G1) or 5x10(5) tachyzoites ml-1 (G2). Brain, spinal cord, heart, lung, liver, kidneys and spleen were collected and PCR was performed using samples of these tissues and organs. DNA of N. caninum was detected in at least five tissues for most animals (12/20; 60%) considering both groups. In group 1, the frequency of DNA detection, evaluating all samples, was higher (52/70; 74.28%) compared to group 2 (38/70; 54.28%). These results showed that the protozoan replicated efficiently after inoculation spreading by several tissues. Also, was demonstrated that gerbils can be used as model for acute infection with N. caninum showing clinical signs of neosporosis.

Neospora caninum é um protozoário de grande importância na pecuária, por determinar problemas reprodutivos principalmente em bovinos. Os gerbils (Meriones unguiculatus) podem atuar como modelos experimentais para reproduzir a neosporose aguda de bovinos. Neste trabalho, foram formados dois grupos de gerbils (n=10), inoculados com taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) nas doses de 5x10(6) taquizoítos ml-1 (G1) ou de 5x10(5) taquizoítos ml-1 (G2), doses capazes de induzir infecção aguda. Cérebro, medula espinhal, coração, pulmão, fígado, rins e baço foram coletados e a técnica de PCR foi realizada a partir das amostras de tecidos e órgãos. Na maioria dos animais, o DNA do N. caninum foi detectado pelo menos em cinco tecidos, considerando ambos os grupos (12/20; 60%). No grupo 1, a frequência de detecção de DNA, na totalidade das amostras, foi maior (52/70; 74,28%) quando comparada ao grupo 2 (38/70; 54,28%). A partir desses resultados, pode-se afirmar que o protozoário replicou eficientemente após inoculação e se disseminou pelos tecidos. Além disso, demonstrou-se que gerbils podem ser utilizados como modelo de infecção aguda pelo N. caninum, apresentando sinais clínicos da neosporose.

Detecção de ácidos nucleicos em tecidos de gerbils submetidos à infecção aguda por Neospora caninum

Neospora caninum is a protozoan of great importance for livestock, mainly by causing reproductive diseases in cattle. Gerbils (Meriones unguiculatus) may be a model to reproduce experimental acute neosporosis of cattle. In this study two groups of gerbils were formed (n=10) and gerbils were inoculated with N. caninum tachyzoites (NC-1 strain) at two different doses appropriate to cause acute neosporosis: 5x10(6) tachyzoites ml-1 (G1) or 5x10(5) tachyzoites ml-1 (G2). Brain, spinal cord, heart, lung, liver, kidneys and spleen were collected and PCR was performed using samples of these tissues and organs. DNA of N. caninum was detected in at least five tissues for most animals (12/20; 60%) considering both groups. In group 1, the frequency of DNA detection, evaluating all samples, was higher (52/70; 74.28%) compared to group 2 (38/70; 54.28%). These results showed that the protozoan replicated efficiently after inoculation spreading by several tissues. Also, was demonstrated that gerbils can be used as model for acute infection with N. caninum showing clinical signs of neosporosis.

Neospora caninum é um protozoário de grande importância na pecuária, por determinar problemas reprodutivos principalmente em bovinos. Os gerbils (Meriones unguiculatus) podem atuar como modelos experimentais para reproduzir a neosporose aguda de bovinos. Neste trabalho, foram formados dois grupos de gerbils (n=10), inoculados com taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) nas doses de 5x10(6) taquizoítos ml-1 (G1) ou de 5x10(5) taquizoítos ml-1 (G2), doses capazes de induzir infecção aguda. Cérebro, medula espinhal, coração, pulmão, fígado, rins e baço foram coletados e a técnica de PCR foi realizada a partir das amostras de tecidos e órgãos. Na maioria dos animais, o DNA do N. caninum foi detectado pelo menos em cinco tecidos, considerando ambos os grupos (12/20; 60%). No grupo 1, a frequência de detecção de DNA, na totalidade das amostras, foi maior (52/70; 74,28%) quando comparada ao grupo 2 (38/70; 54,28%). A partir desses resultados, pode-se afirmar que o protozoário replicou eficientemente após inoculação e se disseminou pelos tecidos. Além disso, demonstrou-se que gerbils podem ser utilizados como modelo de infecção aguda pelo N. caninum, apresentando sinais clínicos da neosporose.

Detecção de ácidos nucleicos em tecidos de gerbils submetidos à infecção aguda por Neospora caninum

Neospora caninum is a protozoan of great importance for livestock, mainly by causing reproductive diseases in cattle. Gerbils (Meriones unguiculatus) may be a model to reproduce experimental acute neosporosis of cattle. In this study two groups of gerbils were formed (n=10) and gerbils were inoculated with N. caninum tachyzoites (NC-1 strain) at two different doses appropriate to cause acute neosporosis: 5x10(6) tachyzoites ml-1 (G1) or 5x10(5) tachyzoites ml-1 (G2). Brain, spinal cord, heart, lung, liver, kidneys and spleen were collected and PCR was performed using samples of these tissues and organs. DNA of N. caninum was detected in at least five tissues for most animals (12/20; 60%) considering both groups. In group 1, the frequency of DNA detection, evaluating all samples, was higher (52/70; 74.28%) compared to group 2 (38/70; 54.28%). These results showed that the protozoan replicated efficiently after inoculation spreading by several tissues. Also, was demonstrated that gerbils can be used as model for acute infection with N. caninum showing clinical signs of neosporosis.

Neospora caninum é um protozoário de grande importância na pecuária, por determinar problemas reprodutivos principalmente em bovinos. Os gerbils (Meriones unguiculatus) podem atuar como modelos experimentais para reproduzir a neosporose aguda de bovinos. Neste trabalho, foram formados dois grupos de gerbils (n=10), inoculados com taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) nas doses de 5x10(6) taquizoítos ml-1 (G1) ou de 5x10(5) taquizoítos ml-1 (G2), doses capazes de induzir infecção aguda. Cérebro, medula espinhal, coração, pulmão, fígado, rins e baço foram coletados e a técnica de PCR foi realizada a partir das amostras de tecidos e órgãos. Na maioria dos animais, o DNA do N. caninum foi detectado pelo menos em cinco tecidos, considerando ambos os grupos (12/20; 60%). No grupo 1, a frequência de detecção de DNA, na totalidade das amostras, foi maior (52/70; 74,28%) quando comparada ao grupo 2 (38/70; 54,28%). A partir desses resultados, pode-se afirmar que o protozoário replicou eficientemente após inoculação e se disseminou pelos tecidos. Além disso, demonstrou-se que gerbils podem ser utilizados como modelo de infecção aguda pelo N. caninum, apresentando sinais clínicos da neosporose.

Reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite

The aim of this study was to determine the presence of anti-N. caninum in the bulk milk samples by indirect immunofluorescence assay (IFAT). For this, it was collected samples of milk from refrigerated tanks from 36 herds, of which 14 were selected for sampling of individual blood serum and milk of cows. It was found concordance for 12 of the 14 herds selected for samples of individual animals, compared to the detection of antibodies in the bulk milk samples. Concordance was of 76% when comparing the results of the pooled sample with the results of individual milk. It was observed low antibody titers (50) in the serum of animals positive whose results in IFA of bulk milk and blood were discordant. Thus, with the results of this study, it can be concluded that the use of serological tests for detection of anti-N. caninum in the bulk milk samples from the IFAT could be an alternative diagnosis for the screening of positive herds as well as for epidemiological studies.

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para isso, foram coletadas amostras do leite dos tanques refrigerados de 36 rebanhos, das quais foram selecionadas 14 para coletas de amostras individuais de soro sanguíneo e de leite das vacas. Encontrou-se correlação em 12 dos 14 rebanhos selecionados para a amostragem individual dos animais, em comparação à detecção de anticorpos nas amostras coletivas de leite. Foi observada uma concordância de 76% comparando-se o resultado das amostras coletivas com os resultados individuais de leite. Observaram-se baixos títulos de anticorpos (50) no soro sanguíneo dos animais soropositivos, cujos resultados da RIFI no leite coletivo e no sangue foram discordantes. Assim, a partir dos resultados deste estudo, pode-se concluir que a utilização de testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite através da RIFI pode ser uma opção ao diagnóstico para a triagem de rebanhos positivos bem como para estudos epidemiológicos.

Reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite

The aim of this study was to determine the presence of anti-N. caninum in the bulk milk samples by indirect immunofluorescence assay (IFAT). For this, it was collected samples of milk from refrigerated tanks from 36 herds, of which 14 were selected for sampling of individual blood serum and milk of cows. It was found concordance for 12 of the 14 herds selected for samples of individual animals, compared to the detection of antibodies in the bulk milk samples. Concordance was of 76% when comparing the results of the pooled sample with the results of individual milk. It was observed low antibody titers (50) in the serum of animals positive whose results in IFA of bulk milk and blood were discordant. Thus, with the results of this study, it can be concluded that the use of serological tests for detection of anti-N. caninum in the bulk milk samples from the IFAT could be an alternative diagnosis for the screening of positive herds as well as for epidemiological studies.

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras coletivas de leite, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para isso, foram coletadas amostras do leite dos tanques refrigerados de 36 rebanhos, das quais foram selecionadas 14 para coletas de amostras individuais de soro sanguíneo e de leite das vacas. Encontrou-se correlação em 12 dos 14 rebanhos selecionados para a amostragem individual dos animais, em comparação à detecção de anticorpos nas amostras coletivas de leite. Foi observada uma concordância de 76% comparando-se o resultado das amostras coletivas com os resultados individuais de leite. Observaram-se baixos títulos de anticorpos (50) no soro sanguíneo dos animais soropositivos, cujos resultados da RIFI no leite coletivo e no sangue foram discordantes. Assim, a partir dos resultados deste estudo, pode-se concluir que a utilização de testes sorológicos para detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite através da RIFI pode ser uma opção ao diagnóstico para a triagem de rebanhos positivos bem como para estudos epidemiológicos.

Controle sobre GnRH durante o anestro pós-parto em bovinos

The bovine postpartum period is characterized as a moment when the ovulation is suppressed, mainly in consequence of insufficient release of gonadotropins. Concepts and regulatory mechanisms of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) had been described independently. This review covers the influence of nutrition and suckling with emphasis on GnRH regulation, and provides up to date concepts of neuroendocrine control of GnRH secretion during postpartum in cattle. Current knowledge of gonadotropin-inhibitory hormone (GnIH), leptin, estrogens and kisspeptin during this period are presented in order to provide a better understanding of the subject.

O pós-parto em bovinos é caracterizado como um momento em que as fêmeas bovinas não ovulam, principalmente devido a uma inadequada liberação de gonadotrofinas. Os conceitos e os mecanismos regulatórios do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) têm sido descritos isoladamente. Esta revisão aborda a influência da nutrição e amamentação, com enfoque na regulação do GnRH, e fornece conceitos atuais do controle neuroendocrinológico da secreção de GnRH durante o pós-parto em bovinos. Conhecimentos atuais das funções do hormônio inibitório de gonadotrofinas (GnIH), da leptina, dos estrógenos, da kisspeptina e da adiponectina, bem como suas complexas inter-relações durante este período estão detalhados para melhor entendimento do assunto.

Controle sobre GnRH durante o anestro pós-parto em bovinos

The bovine postpartum period is characterized as a moment when the ovulation is suppressed, mainly in consequence of insufficient release of gonadotropins. Concepts and regulatory mechanisms of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) had been described independently. This review covers the influence of nutrition and suckling with emphasis on GnRH regulation, and provides up to date concepts of neuroendocrine control of GnRH secretion during postpartum in cattle. Current knowledge of gonadotropin-inhibitory hormone (GnIH), leptin, estrogens and kisspeptin during this period are presented in order to provide a better understanding of the subject.

O pós-parto em bovinos é caracterizado como um momento em que as fêmeas bovinas não ovulam, principalmente devido a uma inadequada liberação de gonadotrofinas. Os conceitos e os mecanismos regulatórios do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) têm sido descritos isoladamente. Esta revisão aborda a influência da nutrição e amamentação, com enfoque na regulação do GnRH, e fornece conceitos atuais do controle neuroendocrinológico da secreção de GnRH durante o pós-parto em bovinos. Conhecimentos atuais das funções do hormônio inibitório de gonadotrofinas (GnIH), da leptina, dos estrógenos, da kisspeptina e da adiponectina, bem como suas complexas inter-relações durante este período estão detalhados para melhor entendimento do assunto.

Artificial insemination system without estrous observation in suckled beef cows

The aim was to develop a timed artificial insemination (TAI) system in suckled beef cows. Cows (n=227), 60-80 days postpartum, received estradiol benzoate (5mg) and a vaginal device containing 250µg of medroxyprogesterone acetate (MPA; day 0). On day six, cloprostenol (125µg) and eCG (400IU) were administrated and calves were weaned for 88h. The devices were removed on day seven (BioRep group) or on day eight (TAI group). All cows of TAI group and cows of BioRep group that did not exhibit standing estrus received GnRH (100µg) on day 9. In experiment I, the follicular growth was monitored daily by transrectal ultrasound exams, from day 6 to day 9. The average size of the dominant follicle on day nine was 11.1±0.99mm (BioRep, n=7) and 11.5±0.65mm (TAI, n=7) and all animals ovulated. In experiment II, the BioRep group cows (n=106) were observed for estrous behavior after withdrawal of the device, twice a day for 48h, and inseminated 12h after detection. In the TAI group (n=107), the devices were withdrawn on day eight and after 24h these cows and those from the BioRep group, which were not stand in estrus, received 100µg of GnRH and TAI 16h later. The pregnancy rates were 57.6% (BioRep) and 52.3% (TAI). In conclusion, an increase on MPA exposure time did not affect the follicular dynamics and pregnancy rates and allow TAI without estrous observation. Furthermore, the treatment for eight days provides an efficient TAI system in suckled beef cows.

O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo de inseminação artificial com tempo fixo (IATF) em vacas de corte durante período de amamentação, avaliando o intervalo entre a retirada do progestágeno e a aplicação de GnRH sobre a dinâmica folicular e a prenhez. Para tanto, vacas (n=227) em pós-parto de 60 a 80 dias receberam benzoato de estradiol (5mg) e um pessário vaginal de acetato de medroxiprogesterona (250mg MAP; dia 0). No dia seis, os animais receberam cloprostenol sódico (125µg), gonadotrofina coriônica eqüina (400UI) e desmame temporário (88h). O MAP foi retirado no dia sete (Grupo BioRep) ou no dia oito (Grupo IATF). Todas as vacas do grupo TAI e aquelas que não manifestaram cio do grupo BioRep receberam GnRH (100µg) no dia nove. No experimento I, o monitoramento das estruturas ovarianas de 14 vacas foi realizado a cada 24h, desde o dia seis até 36h após a aplicação de GnRH em ambos os grupos. O tamanho médio do folículo dominante no dia nove foi de 11,1±0,99mm (BioRep n=7) e 11,5±0,65mm (IATF n=7) e todos os animais ovularam. No experimento II, no grupo BioRep (n=106), após a retirada do MAP, as fêmeas foram inseminadas com detecção de estro durante 48 horas. O restante dos animais do grupo BioRep e todos do grupo IATF (n=107) receberam 100µg de GnRH (dia nove) e IATF 16h depois. As taxas de prenhez foram de 57,6% (BioRep) e de 52,3% (IATF). O intervalo de 24h entre a retirada de MAP, mantido por oito dias, e a aplicação de GnRH não interfere na dinâmica folicular e na prenhez, permitindo inseminar vacas de corte amamentando sem observação de estro.

Artificial insemination system without estrous observation in suckled beef cows

The aim was to develop a timed artificial insemination (TAI) system in suckled beef cows. Cows (n=227), 60-80 days postpartum, received estradiol benzoate (5mg) and a vaginal device containing 250µg of medroxyprogesterone acetate (MPA; day 0). On day six, cloprostenol (125µg) and eCG (400IU) were administrated and calves were weaned for 88h. The devices were removed on day seven (BioRep group) or on day eight (TAI group). All cows of TAI group and cows of BioRep group that did not exhibit standing estrus received GnRH (100µg) on day 9. In experiment I, the follicular growth was monitored daily by transrectal ultrasound exams, from day 6 to day 9. The average size of the dominant follicle on day nine was 11.1±0.99mm (BioRep, n=7) and 11.5±0.65mm (TAI, n=7) and all animals ovulated. In experiment II, the BioRep group cows (n=106) were observed for estrous behavior after withdrawal of the device, twice a day for 48h, and inseminated 12h after detection. In the TAI group (n=107), the devices were withdrawn on day eight and after 24h these cows and those from the BioRep group, which were not stand in estrus, received 100µg of GnRH and TAI 16h later. The pregnancy rates were 57.6% (BioRep) and 52.3% (TAI). In conclusion, an increase on MPA exposure time did not affect the follicular dynamics and pregnancy rates and allow TAI without estrous observation. Furthermore, the treatment for eight days provides an efficient TAI system in suckled beef cows.

O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo de inseminação artificial com tempo fixo (IATF) em vacas de corte durante período de amamentação, avaliando o intervalo entre a retirada do progestágeno e a aplicação de GnRH sobre a dinâmica folicular e a prenhez. Para tanto, vacas (n=227) em pós-parto de 60 a 80 dias receberam benzoato de estradiol (5mg) e um pessário vaginal de acetato de medroxiprogesterona (250mg MAP; dia 0). No dia seis, os animais receberam cloprostenol sódico (125µg), gonadotrofina coriônica eqüina (400UI) e desmame temporário (88h). O MAP foi retirado no dia sete (Grupo BioRep) ou no dia oito (Grupo IATF). Todas as vacas do grupo TAI e aquelas que não manifestaram cio do grupo BioRep receberam GnRH (100µg) no dia nove. No experimento I, o monitoramento das estruturas ovarianas de 14 vacas foi realizado a cada 24h, desde o dia seis até 36h após a aplicação de GnRH em ambos os grupos. O tamanho médio do folículo dominante no dia nove foi de 11,1±0,99mm (BioRep n=7) e 11,5±0,65mm (IATF n=7) e todos os animais ovularam. No experimento II, no grupo BioRep (n=106), após a retirada do MAP, as fêmeas foram inseminadas com detecção de estro durante 48 horas. O restante dos animais do grupo BioRep e todos do grupo IATF (n=107) receberam 100µg de GnRH (dia nove) e IATF 16h depois. As taxas de prenhez foram de 57,6% (BioRep) e de 52,3% (IATF). O intervalo de 24h entre a retirada de MAP, mantido por oito dias, e a aplicação de GnRH não interfere na dinâmica folicular e na prenhez, permitindo inseminar vacas de corte amamentando sem observação de estro.

Artificial insemination system without estrous observation in suckled beef cows

The aim was to develop a timed artificial insemination (TAI) system in suckled beef cows. Cows (n=227), 60-80 days postpartum, received estradiol benzoate (5mg) and a vaginal device containing 250µg of medroxyprogesterone acetate (MPA; day 0). On day six, cloprostenol (125µg) and eCG (400IU) were administrated and calves were weaned for 88h. The devices were removed on day seven (BioRep group) or on day eight (TAI group). All cows of TAI group and cows of BioRep group that did not exhibit standing estrus received GnRH (100µg) on day 9. In experiment I, the follicular growth was monitored daily by transrectal ultrasound exams, from day 6 to day 9. The average size of the dominant follicle on day nine was 11.1±0.99mm (BioRep, n=7) and 11.5±0.65mm (TAI, n=7) and all animals ovulated. In experiment II, the BioRep group cows (n=106) were observed for estrous behavior after withdrawal of the device, twice a day for 48h, and inseminated 12h after detection. In the TAI group (n=107), the devices were withdrawn on day eight and after 24h these cows and those from the BioRep group, which were not stand in estrus, received 100µg of GnRH and TAI 16h later. The pregnancy rates were 57.6% (BioRep) and 52.3% (TAI). In conclusion, an increase on MPA exposure time did not affect the follicular dynamics and pregnancy rates and allow TAI without estrous observation. Furthermore, the treatment for eight days provides an efficient TAI system in suckled beef cows.

O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo de inseminação artificial com tempo fixo (IATF) em vacas de corte durante período de amamentação, avaliando o intervalo entre a retirada do progestágeno e a aplicação de GnRH sobre a dinâmica folicular e a prenhez. Para tanto, vacas (n=227) em pós-parto de 60 a 80 dias receberam benzoato de estradiol (5mg) e um pessário vaginal de acetato de medroxiprogesterona (250mg MAP; dia 0). No dia seis, os animais receberam cloprostenol sódico (125µg), gonadotrofina coriônica eqüina (400UI) e desmame temporário (88h). O MAP foi retirado no dia sete (Grupo BioRep) ou no dia oito (Grupo IATF). Todas as vacas do grupo TAI e aquelas que não manifestaram cio do grupo BioRep receberam GnRH (100µg) no dia nove. No experimento I, o monitoramento das estruturas ovarianas de 14 vacas foi realizado a cada 24h, desde o dia seis até 36h após a aplicação de GnRH em ambos os grupos. O tamanho médio do folículo dominante no dia nove foi de 11,1±0,99mm (BioRep n=7) e 11,5±0,65mm (IATF n=7) e todos os animais ovularam. No experimento II, no grupo BioRep (n=106), após a retirada do MAP, as fêmeas foram inseminadas com detecção de estro durante 48 horas. O restante dos animais do grupo BioRep e todos do grupo IATF (n=107) receberam 100µg de GnRH (dia nove) e IATF 16h depois. As taxas de prenhez foram de 57,6% (BioRep) e de 52,3% (IATF). O intervalo de 24h entre a retirada de MAP, mantido por oito dias, e a aplicação de GnRH não interfere na dinâmica folicular e na prenhez, permitindo inseminar vacas de corte amamentando sem observação de estro.

Ovulation induction in beef cows with different forages allowances during post partum / Indução da ovulação em vacas de corte com diferentes ofertas forrageiras durante o período pós-parto

This experiment compared the efficiency of combined hormonal treatment and 96-hour calf removal with weaning in cows fed different forages allowances and with different weight gains. A total of 310 cows (190 Aberdeen Angus and 120 Charolais), 50 to 70 days postpartum, were sorted into 6 groups. Groups A2, A5, B2 and B5 were composed of 53, 49, 53 and 55 cows, respectively; the first two groups had higher forage availability, while the others had lower forage availability, in the postpartum period; groups A2 and B2 received 2mg estradiol benzoate (day zero) and the groups A5 and B5 5mg estradiol benzoate as well as an intra-vaginal device (CIDR) with progesterone. Six days later they received 1000UI equine chorionic gonadotropin (eCG). At day 7 the CIDR device was removed and the 96-hour calf removal period began. Groups AD and BD, with 52 and 48 cows and high and low forage availability respectively, in the postpartum period, were weaned on day 7. All cows that showed estrous were inseminated between day 7 and 17, and then were bred, up to day 67. Between days 60 and 127, ultrasounds diagnosis of pregnancy were performed. Data analysis was carried out using to the PROC CATMOD in the SAS statistical program. There were no significant differences in pregnancy (p>0.05) rates among groups submitted to different forage offers. Data was then analyzed according to whether the cow g

Este experimento teve por objetivo comparar a eficiência de um protocolo hormonal associado ao desmame por 96 horas com o desmame definitivo, em vacas em pastejo com diferentes ofertas forrageiras. Utilizaram-se 310 vacas (190 Aberdeen-Angus e 120 Charolês), entre 50 e 70 dias pós-parto, distribuídas em seis grupos. Os grupos A2, A5, B2 e B5 foram mantidos em maior (A2 e A5) e menor (B2 e B5) disponibilidade forrageira, no período parto-tratamento, e receberam (dia 0) 2mg (A2 e B2) e 5mg (A5 e B5) de benzoato de estradiol e dispositivo intravaginal com acetato de medroxiprogesterona (CIDR). Seis dias após, receberam 1.000 UI de gonadotrofina coriô­nica eqüina (eCG). No sétimo dia, foi retirado o CIDR e procedido ao desmame dos bezerros por 96 horas. Os grupos AD e BD foram constituídos por 52 e 48 vacas, permanecendo, respectivamente, em maior e menor disponibilidade forrageira, submetidas ao desmame definitivo dos bezerros (dia 7). Inseminaram-se as vacas que manifestaram estro entre os dias 7 e 17, sendo acasaladas, depois, até o 67ºdia.  Nos dias 60 e 127 realizaram-se diagnósticos ultra-sonográficos de prenhez. Para análise dos dados, utilizou-se PROC CATMOD do pacote estatístico do SAS, não se verificando diferença (P>0,05) na prenhez entre os grupos com diferentes ofertas forrageiras. Uma nova análise das vacas, conforme seus ganhos de peso, indicou que o desmame defin

OVULATION INDUCTION IN BEEF COWS WITH DIFFERENT FORAGES ALLOWANCES DURING POST PARTUM / INDUÇÃO DA OVULAÇÃO EM VACAS DE CORTE COM DIFERENTES OFERTAS FORRAGEIRAS DURANTE O PERÍODO PÓS-PARTO

This experiment compared the efficiency of combined hormonal treatment and 96-hour calf removal with weaning in cows fed different forages allowances and with different weight gains. A total of 310 cows (190 Aberdeen Angus and 120 Charolais), 50 to 70 days postpartum, were sorted into 6 groups. Groups A2, A5, B2 and B5 were composed of 53, 49, 53 and 55 cows, respectively; the first two groups had higher forage availability, while the others had lower forage availability, in the postpartum period; groups A2 and B2 received 2mg estradiol benzoate (day zero) and the groups A5 and B5 5mg estradiol benzoate as well as an intra-vaginal device (CIDR) with progesterone. Six days later they received 1000UI equine chorionic gonadotropin (eCG). At day 7 the CIDR device was removed and the 96-hour calf removal period began. Groups AD and BD, with 52 and 48 cows and high and low forage availability respectively, in the postpartum period, were weaned on day 7. All cows that showed estrous were inseminated between day 7 and 17, and then were bred, up to day 67. Between days 60 and 127, ultrasounds diagnosis of pregnancy were performed. Data analysis was carried out using to the PROC CATMOD in the SAS statistical program. There were no significant differences in pregnancy (p>0.05) rates among groups submitted to different forage offers. Data was then analyzed according to whether the cow g

Este experimento teve por objetivo comparar a eficiência de um protocolo hormonal associado ao desmame por 96 horas com o desmame definitivo, em vacas em pastejo com diferentes ofertas forrageiras. Utilizaram-se 310 vacas (190 Aberdeen-Angus e 120 Charolês), entre 50 e 70 dias pós-parto, distribuídas em seis grupos. Os grupos A2, A5, B2 e B5 foram mantidos em maior (A2 e A5) e menor (B2 e B5) disponibilidade forrageira, no período parto-tratamento, e receberam (dia 0) 2mg (A2 e B2) e 5mg (A5 e B5) de benzoato de estradiol e dispositivo intravaginal com acetato de medroxiprogesterona (CIDR). Seis dias após, receberam 1.000 UI de gonadotrofina coriô­nica eqüina (eCG). No sétimo dia, foi retirado o CIDR e procedido ao desmame dos bezerros por 96 horas. Os grupos AD e BD foram constituídos por 52 e 48 vacas, permanecendo, respectivamente, em maior e menor disponibilidade forrageira, submetidas ao desmame definitivo dos bezerros (dia 7). Inseminaram-se as vacas que manifestaram estro entre os dias 7 e 17, sendo acasaladas, depois, até o 67ºdia.  Nos dias 60 e 127 realizaram-se diagnósticos ultra-sonográficos de prenhez. Para análise dos dados, utilizou-se PROC CATMOD do pacote estatístico do SAS, não se verificando diferença (P>0,05) na prenhez entre os grupos com diferentes ofertas forrageiras. Uma nova análise das vacas, conforme seus ganhos de peso, indicou que o desmame defin

Association between molecular markers linked to the Leptin gene and weight gain in postpartum beef cows

Three short tandem repeats (STRs), BMS1074, BM1500, IDVGA-51, and three single nucleotide polymorphisms (SNPs), LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) and LEPKpn2I linked to the LEP gene were investigated to verify associations with productive performance in postpartum cows of two beef cattle breeds, Aberdeen Angus (AA, n=98) and Charolais (C, n=83). After polymerase chain reaction, STRs were analyzed by vertical electrophoresis and SNPs in agarose gel after endonucleases cleavage. In AA herd 79% of BMS1074*151 carriers had a lower average daily weight gain (ADG) when compared with the population mean daily weight gain (103g), while 62% of BMS1074*151 non-carriers presented a higher ADG (P 0.01); AA animals with at least one BMS1074*151 allele showed a ADG about 159g lower than that of other animals (P 0.01). In both herds, carriers of the BM1500*136 allele presented higher ADG (about 75g day-1 higher in AA, P 0.05, and 96g day-1 in C, P 0.10); animals with one BM1500*136 allele had about a 3-fold higher chance of having a higher ADG than non-cariers, in both populations.

Foram investigadas três repetições curtas em tandem (STRs), BMS1074, BM1500 e IDVGA-51 e três polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) e LEPKpn2I, ligados ao gene da leptina, verificando-se associações com o desempenho produtivo em vacas no pós-parto, em dois rebanhos de gado de corte, Aberdeen Angus (AA, n=98) e Charolês (C, n=83). Após a reação em cadeia da polimerase, os STRs foram analisados em géis de poliacrilamida e os SNPs em gel de agarose, após a clivagem com endonucleases. Na raça AA, 79% dos portadores do alelo BMS1074*151 apresentaram ganho médio de peso diário (ADG) menor, quando comparados com a média da população (103g), enquanto 62% dos não-portadores mostraram ADG mais alto (P 0,01); os animais AA com pelo menos um alelo BMS1074*151 possuem ADG cerca de 159g menor que os outros animais (P 0,01). Em ambos os rebanhos, portadores do alelo BM1500*136 apresentaram ADG mais alto (em torno de 75g dia-1 em AA, P 0,05 e 96g dia-1 em C, P 0,10) e animais com um alelo BM1500*136 possuem cerca de três vezes mais chance de ter um ADG maior que os não-portadores.

Association between molecular markers linked to the Leptin gene and weight gain in postpartum beef cows

Three short tandem repeats (STRs), BMS1074, BM1500, IDVGA-51, and three single nucleotide polymorphisms (SNPs), LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) and LEPKpn2I linked to the LEP gene were investigated to verify associations with productive performance in postpartum cows of two beef cattle breeds, Aberdeen Angus (AA, n=98) and Charolais (C, n=83). After polymerase chain reaction, STRs were analyzed by vertical electrophoresis and SNPs in agarose gel after endonucleases cleavage. In AA herd 79% of BMS1074*151 carriers had a lower average daily weight gain (ADG) when compared with the population mean daily weight gain (103g), while 62% of BMS1074*151 non-carriers presented a higher ADG (P 0.01); AA animals with at least one BMS1074*151 allele showed a ADG about 159g lower than that of other animals (P 0.01). In both herds, carriers of the BM1500*136 allele presented higher ADG (about 75g day-1 higher in AA, P 0.05, and 96g day-1 in C, P 0.10); animals with one BM1500*136 allele had about a 3-fold higher chance of having a higher ADG than non-cariers, in both populations.

Foram investigadas três repetições curtas em tandem (STRs), BMS1074, BM1500 e IDVGA-51 e três polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) LEPSau3AI (A/B), LEPSau3AI (+/-) e LEPKpn2I, ligados ao gene da leptina, verificando-se associações com o desempenho produtivo em vacas no pós-parto, em dois rebanhos de gado de corte, Aberdeen Angus (AA, n=98) e Charolês (C, n=83). Após a reação em cadeia da polimerase, os STRs foram analisados em géis de poliacrilamida e os SNPs em gel de agarose, após a clivagem com endonucleases. Na raça AA, 79% dos portadores do alelo BMS1074*151 apresentaram ganho médio de peso diário (ADG) menor, quando comparados com a média da população (103g), enquanto 62% dos não-portadores mostraram ADG mais alto (P 0,01); os animais AA com pelo menos um alelo BMS1074*151 possuem ADG cerca de 159g menor que os outros animais (P 0,01). Em ambos os rebanhos, portadores do alelo BM1500*136 apresentaram ADG mais alto (em torno de 75g dia-1 em AA, P 0,05 e 96g dia-1 em C, P 0,10) e animais com um alelo BM1500*136 possuem cerca de três vezes mais chance de ter um ADG maior que os não-portadores.

Meios congelados na produção de embriões in vitro em bovinos

A produção de embriões bovinos in vitro (PIV), atualmente, é laboriosa, apresenta custo relativamente elevado e alta variabilidade nos resultados. No sentido de torná-la mais simples, obter maior repetição nos resultados, diminuir custo e facilitar a sua utilização a campo, foram delineados experimentos para avaliar a eficácia de um sistema para PIV utilizando meios preservados pela congelação. Inicialmente, em 3 replicações, um total de 534 oócitos foram divididos em dois grupos. No grupo tratamento, os meios utilizados na PIV (meio de maturação, Fert-TALP, sp-TALP 1x, sp-TALP 10x e KSOM modificado) foram preservados a -19oC e no grupo controle, utilizou-se meios refrigerados a 5oC e armazenados por no máximo 15 dias. Foi, também, verificado se ocorreram interações moleculares associativas nos meios devido à congelação, para isso foram realizadas varreduras espectrais em cada meio, antes da congelação e após 15, 30, 150 dias de preservação a -19oC. A maturação, a fecundação e o cultivo embrionário foram efetuados em TCM-199 modificado, Fert-TALP e KSOM modificado, respectivamente, em estufa a 39oC com 5% de CO2 e umidade saturada. As percentagens de clivagem, de blastocistos expandidos (Bx)/oócitos e de Bx/clivados no grupo tratamento (73,5%; 17,5%; 23,9%, respectivamente) foram similares às obtidas no grupo controle (76,3%; 18,8%; 24,6%, respectivamente). Não se observaram mo

Meios congelados na produção de embriões in vitro em bovinos

A produção de embriões bovinos in vitro (PIV), atualmente, é laboriosa, apresenta custo relativamente elevado e alta variabilidade nos resultados. No sentido de torná-la mais simples, obter maior repetição nos resultados, diminuir custo e facilitar a sua utilização a campo, foram delineados experimentos para avaliar a eficácia de um sistema para PIV utilizando meios preservados pela congelação. Inicialmente, em 3 replicações, um total de 534 oócitos foram divididos em dois grupos. No grupo tratamento, os meios utilizados na PIV (meio de maturação, Fert-TALP, sp-TALP 1x, sp-TALP 10x e KSOM modificado) foram preservados a -19oC e no grupo controle, utilizou-se meios refrigerados a 5oC e armazenados por no máximo 15 dias. Foi, também, verificado se ocorreram interações moleculares associativas nos meios devido à congelação, para isso foram realizadas varreduras espectrais em cada meio, antes da congelação e após 15, 30, 150 dias de preservação a -19oC. A maturação, a fecundação e o cultivo embrionário foram efetuados em TCM-199 modificado, Fert-TALP e KSOM modificado, respectivamente, em estufa a 39oC com 5% de CO2 e umidade saturada. As percentagens de clivagem, de blastocistos expandidos (Bx)/oócitos e de Bx/clivados no grupo tratamento (73,5%; 17,5%; 23,9%, respectivamente) foram similares às obtidas no grupo controle (76,3%; 18,8%; 24,6%, respectivamente). Não se observaram mo

Meios congelados na produção de embriões in vitro em bovinos

A produção de embriões bovinos in vitro (PIV), atualmente, é laboriosa, apresenta custo relativamente elevado e alta variabilidade nos resultados. No sentido de torná-la mais simples, obter maior repetição nos resultados, diminuir custo e facilitar a sua utilização a campo, foram delineados experimentos para avaliar a eficácia de um sistema para PIV utilizando meios preservados pela congelação. Inicialmente, em 3 replicações, um total de 534 oócitos foram divididos em dois grupos. No grupo tratamento, os meios utilizados na PIV (meio de maturação, Fert-TALP, sp-TALP 1x, sp-TALP 10x e KSOM modificado) foram preservados a -19oC e no grupo controle, utilizou-se meios refrigerados a 5oC e armazenados por no máximo 15 dias. Foi, também, verificado se ocorreram interações moleculares associativas nos meios devido à congelação, para isso foram realizadas varreduras espectrais em cada meio, antes da congelação e após 15, 30, 150 dias de preservação a -19oC. A maturação, a fecundação e o cultivo embrionário foram efetuados em TCM-199 modificado, Fert-TALP e KSOM modificado, respectivamente, em estufa a 39oC com 5% de CO2 e umidade saturada. As percentagens de clivagem, de blastocistos expandidos (Bx)/oócitos e de Bx/clivados no grupo tratamento (73,5%; 17,5%; 23,9%, respectivamente) foram similares às obtidas no grupo controle (76,3%; 18,8%; 24,6%, respectivamente). Não se observaram mo

Caracterização de aspectos produtivos de vacas brangus ibagé com distintos graus de fertilidade

The aim of this study was to characterize different fertility groups and to evaluate differences of weight gain in the postpartum and maternal ability o Brangus Ibagé (5/8 Angus + 3/8 Nelore) cows. Data from 1145 calvings of 287 cows were computed, however, only 168 females with at least four calvings were considered. The cows were classified, according to the average of their calving interval records, in groups of low, medium and high fertility. Cow weight at parturition (WPAR), cow weight gain during the postpartum period (WGPP) and calf weight at weaning (W205) were evaluated. The means and respective standard errors of calving interval (CI) for the groups of high, medium and low fertility were 404.6 ± 5.44, 523.5 ± 4.77 and 711.2 ± 20.89 days, respectively. No statistical differences were observed among groups, regarding the WPAR, WGPP and W205. Heifers presented lower WPAR (P 0.001) than cows but the WGPP was similar for all groups. The year effect was significant (P 0.001) for WPAR and W205, but not for WGPP. The results suggest that the classification of the cows in different fertility groups doesn't result in differences in the beef productive traits, indicating that the differences in fertility can be a result of differential genotypes unrelated to milk production.

O presente estudo teve por objetivo caracterizar distintos grupos de fertilidade e averiguar diferenças quanto ao ganho de peso no pós-parto e habilidade materna em uma população Brangus Ibagé (3/8 Nelore + 5/8 Angus). Foram computados dados de 1145 partos de 287 vacas, sendo considerados apenas os registros de 168 fêmeas com, no mínimo, quatro partos. As fêmeas foram agrupadas de acordo com a média do intervalo de partos em grupos de alta, intermediária, e baixa fertilidade. Adicionalmente, foram levantados dados de peso ao parto (PPAR) e ganho de peso no pós-parto (GPP). A habilidade materna foi inferida a partir do peso à desmama dos terneiros (PP205). As médias e respectivos erros-padrão de intervalos de partos (IP) para os grupos de fertilidade alta, intermediária e baixa foram 404,6 ± 5,44, 523,5 ± 4,77 e 711,2 ± 20,89, respectivamente. Não foram constatadas diferenças significativas (P>0,05) entre grupos, tanto no desempenho da vaca (PPAR, GPP) como no PP205. Vacas primíparas apresentaram peso ao parto menor (P 0,001), porém a diferença quanto ao ganho de peso no período pós-parto não foi significativa (P>0,05). O efeito de ano foi significativo (P 0,001) sobre o PPAR, PP205 e GPP. O critério IP permite formar grupos de animais distintos quanto à fertilidade, que, no entanto, têm desempenho produtivo semelhante. Isso sugere que as diferenças de fertilidade entre eles podem ser decorrentes de outros mecanismos fisiológicos relativos ao restabelecimento precoce do anestro pós-parto e não simples efeitos do nível nutricional e da sua produção de leite.