Hyperthermia inhibits platelet hemostatic functions and selectively regulates the release of alpha-granule proteins.

BACKGROUND: Hyperthermia is one of the main disturbances of homeostasis occurring during sepsis or hypermetabolic states such as cancer. Platelets are important mediators of the inflammation that accompanies these processes, but very little is known about the changes in platelet function that occur at different temperatures. OBJECTIVES: To explore the effect of higher temperatures on platelet physiology. METHODS: Platelet responses including adhesion, spreading (fluorescence microscopy), α(IIb)ß(3) activation (flow cytometry), aggregation (turbidimetry), ATP release (luminescence), thromboxane A(2) generation, alpha-granule protein secretion (ELISA) and protein phosphorylation from different signaling pathways (immunoblotting) were studied. RESULTS: Preincubation of platelets at temperatures higher than 37 °C (38.5-42 °C) inhibited thrombin-induced hemostasis, including platelet adhesion, aggregation, ATP release and thromboxane A(2) generation. The expression of P-selectin and CD63, as well as vascular endothelial growth factor (VEGF) release, was completely inhibited by hyperthermia, whereas von Willebrand factor (VWF) and endostatin levels remained substantially increased at high temperatures. This suggested that release of proteins from platelet granules is modulated not only by classical platelet agonists but also by microenvironmental factors. The observed gradation of response involved not only antiangiogenesis regulators, but also other cargo proteins. Some signaling pathways were more stable than others. While ERK1/2 and AKT phosphorylation were resistant to changes in temperature, Src, Syk, p38 phosphorylation and IkappaB degradation were decreased in a temperature-dependent fashion. CONCLUSIONS: Higher temperatures, such as those observed with fever or tissue invasion, inhibit the hemostatic functions of platelets and selectively regulate the release of alpha-granule proteins.

NF-kappaB inhibitors impair platelet activation responses.

BACKGROUND: Although platelets are anucleated cells, they express several transcription factors that exert non-genomic functions, including the positive and negative regulation of platelet activation. NF-kappaB is a major transcriptional regulator of genes involved in survival, proliferation and inflammation. OBJECTIVE: Because platelets play a critical role not only in hemostasis, but also in inflammation and tumor progression, we evaluated the role of NF-kappaB in platelet physiology. RESULTS: Immunofluorescence, Western blotting and ELISA studies revealed that platelets express IkappaBalpha and NF-kappaB, and that stimulation with thrombin triggers IkappaBalpha phosphorylation and degradation and the binding of platelet NF-kappaB p65 subunit to synthetic oligonucleotides containing the consensus sequence for NF-kappaB. Two specific unrelated inhibitors of NF-kappaB activation, BAY 11-7082 and Ro 106-9920, reduced PAC-1 and fibrinogen binding to integrin alpha(IIb)beta3 and restricted platelet spreading on immobilized fibrinogen. Both inhibitors impaired aggregation mediated by ADP, epinephrine, collagen or thrombin, but not arachidonic acid. ATP release, TXB2 formation, P-selectin expression, ERK phosphorylation and cPLA2 activity stimulated by thrombin were reduced in BAY 11-7082- or Ro 106-9920-treated platelets. Although bleeding time was not affected, ADP-induced platelet aggregation was impaired in mice treated with BAY 11-7082. CONCLUSIONS: Our results suggest that NF-kappaB may be a novel mediator of platelet responses. The blockade of platelet function by NF-kappaB inhibitors might be relevant in those clinical situations where these drugs are being considered for anti-tumor and/or anti-inflammatory therapy.

Nuevo uso de un medio de preservación de eritrocitos para la prueba inversa / New use of preservation medium for erythrocytes to perfom inverse test

Fundamento: los medios actuales de preservación de eritrocitos humanos (MPE) artesanales son eficaces por cortos períodos. Objetivo: obtener un MPE útil por un período prolongado, para efectuar la prueba inversa del grupo sanguíneo ABO en donantes de sangre y receptores transfusionales. Material y método: la técnica se basó en utilizar el MPE de la OMS para controles de calidad de contadores hematológicos (glutaraldehído 0,37 por ciento, formaldehído 2,7 por ciento, citrato trisódico 26 por ciento, y antibióticos). Se prepararon distintos lotes al 3 y 5 por ciento de glóbulos preservados a partir de sangre de bolsa de donantes con serología no reactiva. Se ensayaron 1.080 muestras. Se evaluaron reacciones en platina y en tubo. Se comparó la reactividad de los glóbulos en MPE y en solución salina. Se evaluó el grado de discrepancia con respecto a la prueba directa ABO dentro de los 40 días de preparados los reactivos. Resultados: los resultados obtenidos en platina dentro de las 2 semanas mostraron una discrepancia total del 2,3 por ciento, siendo en todos los casos, aglutinación débil. Las discrepancias fueron resueltas al pasar a soporte tubo. De las 1030 muestras evaluadas en soporte tubo con MPE se obtuvo una discrepancia del 0,7 por ciento dentro de los 40 días de preparación. El grado de discrepancia en función del tiempo de preparación reactivo se incrementó del 0,2 al 0,7 por ciento entre la tercera y la cuarta semanas. Estos porcentajes no difieren con los descriptos en la bibliografía con otros reactivos. Fijando el límite de discrepancia en 0,2 por ciento y en soporte tubo, el reactivo es estable hasta los 21 días. Conclusiones: el presente trabajo se considera un aporte a la sección de inmunohematología para evitar la preparación diaria de suspensiones y economizar en la compra de reactivo comercial. A futuro también podría utilizarse como MPE en los paneles para anticuerpos irregulares. (AU)

Nuevo uso de un medio de preservación de eritrocitos para la prueba inversa / New use of preservation medium for erythrocytes to perfom inverse test

Fundamento: los medios actuales de preservación de eritrocitos humanos (MPE) artesanales son eficaces por cortos períodos. Objetivo: obtener un MPE útil por un período prolongado, para efectuar la prueba inversa del grupo sanguíneo ABO en donantes de sangre y receptores transfusionales. Material y método: la técnica se basó en utilizar el MPE de la OMS para controles de calidad de contadores hematológicos (glutaraldehído 0,37 por ciento, formaldehído 2,7 por ciento, citrato trisódico 26 por ciento, y antibióticos). Se prepararon distintos lotes al 3 y 5 por ciento de glóbulos preservados a partir de sangre de bolsa de donantes con serología no reactiva. Se ensayaron 1.080 muestras. Se evaluaron reacciones en platina y en tubo. Se comparó la reactividad de los glóbulos en MPE y en solución salina. Se evaluó el grado de discrepancia con respecto a la prueba directa ABO dentro de los 40 días de preparados los reactivos. Resultados: los resultados obtenidos en platina dentro de las 2 semanas mostraron una discrepancia total del 2,3 por ciento, siendo en todos los casos, aglutinación débil. Las discrepancias fueron resueltas al pasar a soporte tubo. De las 1030 muestras evaluadas en soporte tubo con MPE se obtuvo una discrepancia del 0,7 por ciento dentro de los 40 días de preparación. El grado de discrepancia en función del tiempo de preparación reactivo se incrementó del 0,2 al 0,7 por ciento entre la tercera y la cuarta semanas. Estos porcentajes no difieren con los descriptos en la bibliografía con otros reactivos. Fijando el límite de discrepancia en 0,2 por ciento y en soporte tubo, el reactivo es estable hasta los 21 días. Conclusiones: el presente trabajo se considera un aporte a la sección de inmunohematología para evitar la preparación diaria de suspensiones y economizar en la compra de reactivo comercial. A futuro también podría utilizarse como MPE en los paneles para anticuerpos irregulares.

Estudio comparativo de soluciones de baja fuerza iónica, albúmina bovina 22% y prueba de Coombs indirecta como medio de detección de anticuerpos irregulares / Comparative study of ionic low force solutions, 22% bovino albumin, and Coombs indirect test as mens of irregular antybodies detections

Con el objeto de comparar dos medios de baja fuerza iónica (LISS y LIM-P), albúmina bovina 22% (ALB) y la prueba de Coombs indirecta (PCI) en la detección de anticuerpos irregulares, se estudiaron prespectivamente 134 donantes de sangre y 11 pacientes con diversas patologías. De los 134 donantes, 6 tuvieron anticuerpos detectables por alguna de las técnicas. Del análisis estadístico en conjunto de donantes y pacientes con anticuerpos, se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los medios (P < 0,005). Para conocer si era conveniente completar las incubaciones con PCI se efectuó una comparación entre los tres medios y a éstos agregada la PCI. Se observó que no había diferencias al efectuar la PCI (P> 0,05). Estos resultados indicam que la sensibilidad no aumenta al efectuar una PCI. Esta afirmación es más válida para el medio LIM-P (P > 0,9). Cuando se compararon los métodos de ALB y LISS no se observaron diferencias entre ambos (P > 0,10); lo mismo ocurrió con ALB-PCI vs LISS-PCI (P > 0,5). En cuanto al medio LIM-P se observaron diferencias altamente significativas en detectar positividad con respecto a los medios ALB y LISS (sin PCI: P < 0,005, y PCI: P < 0,05). Concluimos que el medio LIMP-P es recomendable para la detección de anticuerpos irregulares, aunque se requieren más estudios para confirmarlo (AU)

Estudio comparativo de las técnicas de aglutinación de partículas (AP) y enzimoinmunoensayo (E1E) en la detección de anticuerpos anti-virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (V1H1) en donantes de sangre / Comparative study of the agglutinants particles (AP) technics and enzymoimmune test (AEIE) in the detection of antivirus antybodies of human immunodeficiency type 1 in blood donors

Con el objeto de encontrar un método de detección de anticuerpos anti-VIH1 apto para el uso rutinario en Servicios de Hemoterapia de baja o mediana complejidad, realizamos un estudio prospectivo comparando las técnicas de AP y EIE en 709 muestras de donantes voluntarios de tres Servicios de la Capital Federal. De éstos, 707 fueron negativos y 2 positivos por la técnica de EIE, hallándose 708 negativos y 1 positivo por la técnica de AP. Una muestra fue en primera instancia dudosa por EIE, resultando negativa en la segunda. Por la técnica de AP ambas muestras fueron negativas. Un segundo donante fue reactivo en dos muestras distintas por EIE y AP, realizándose métodos confirmatorios (IF y WB) que certificaron su seropositividad. En este caso se constató, además, drogadicción y positividad para el AgHBs. En un tercer donante se halló positividad en forma reiterada por el método de EIE y resultados negativos por la técnica de AP. Los estudios confirmatorios fueron negativos, siendo considerado falso positivo para EIE. La frecuencia de anticuerpos anti VIH1 en nuestro trabajo fue de 1,41 por umil, similar a la publicada por otros autores. Del análisis de nuestros resultados concluimos que la técnica de AP presenta las siguientes ventajas: 1) Sencilla en su ejecución. 2) Rápida en la obtención de resultados. 3) No requiere quipamiento sofisticado. 4) Permite realizar determinaciones individuales, así como grandes series, sin alterar los costos operativos, ya que no emplea reactivos extemporáneos. 5) Probada sensibilidad, especificidad y excelente reproducibilidad (AU) s

Estudio comparativo de soluciones de baja fuerza iónica, albúmina bovina 22% y prueba de Coombs indirecta como medio de detección de anticuerpos irregulares / Comparative study of ionic low force solutions, 22% bovino albumin, and Coombs indirect test as mens of irregular antybodies detections

Con el objeto de comparar dos medios de baja fuerza iónica (LISS y LIM-P), albúmina bovina 22% (ALB) y la prueba de Coombs indirecta (PCI) en la detección de anticuerpos irregulares, se estudiaron prespectivamente 134 donantes de sangre y 11 pacientes con diversas patologías. De los 134 donantes, 6 tuvieron anticuerpos detectables por alguna de las técnicas. Del análisis estadístico en conjunto de donantes y pacientes con anticuerpos, se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los medios (P < 0,005). Para conocer si era conveniente completar las incubaciones con PCI se efectuó una comparación entre los tres medios y a éstos agregada la PCI. Se observó que no había diferencias al efectuar la PCI (P> 0,05). Estos resultados indicam que la sensibilidad no aumenta al efectuar una PCI. Esta afirmación es más válida para el medio LIM-P (P > 0,9). Cuando se compararon los métodos de ALB y LISS no se observaron diferencias entre ambos (P > 0,10); lo mismo ocurrió con ALB-PCI vs LISS-PCI (P > 0,5). En cuanto al medio LIM-P se observaron diferencias altamente significativas en detectar positividad con respecto a los medios ALB y LISS (sin PCI: P < 0,005, y PCI: P < 0,05). Concluimos que el medio LIMP-P es recomendable para la detección de anticuerpos irregulares, aunque se requieren más estudios para confirmarlo

Estudio comparativo de las técnicas de aglutinación de partículas (AP) y enzimoinmunoensayo (E1E) en la detección de anticuerpos anti-virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (V1H1) en donantes de sangre / Comparative study of the agglutinants particles (AP) technics and enzymoimmune test (AEIE) in the detection of antivirus antybodies of human immunodeficiency type 1 in blood donors

Con el objeto de encontrar un método de detección de anticuerpos anti-VIH1 apto para el uso rutinario en Servicios de Hemoterapia de baja o mediana complejidad, realizamos un estudio prospectivo comparando las técnicas de AP y EIE en 709 muestras de donantes voluntarios de tres Servicios de la Capital Federal. De éstos, 707 fueron negativos y 2 positivos por la técnica de EIE, hallándose 708 negativos y 1 positivo por la técnica de AP. Una muestra fue en primera instancia dudosa por EIE, resultando negativa en la segunda. Por la técnica de AP ambas muestras fueron negativas. Un segundo donante fue reactivo en dos muestras distintas por EIE y AP, realizándose métodos confirmatorios (IF y WB) que certificaron su seropositividad. En este caso se constató, además, drogadicción y positividad para el AgHBs. En un tercer donante se halló positividad en forma reiterada por el método de EIE y resultados negativos por la técnica de AP. Los estudios confirmatorios fueron negativos, siendo considerado falso positivo para EIE. La frecuencia de anticuerpos anti VIH1 en nuestro trabajo fue de 1,41 por umil, similar a la publicada por otros autores. Del análisis de nuestros resultados concluimos que la técnica de AP presenta las siguientes ventajas: 1) Sencilla en su ejecución. 2) Rápida en la obtención de resultados. 3) No requiere quipamiento sofisticado. 4) Permite realizar determinaciones individuales, así como grandes series, sin alterar los costos operativos, ya que no emplea reactivos extemporáneos. 5) Probada sensibilidad, especificidad y excelente reproducibilidad (AU) s