RESUMO
Unripe bananas have a high content of starch (almost 20%) that is metabolized during fruit ripening with a concomitant synthesis of soluble sugars. Since starch granules are composed of amylose and amylopectin, several enzymes have to be involved in its mobilization during banana ripening, with a necessary participation of one starch-debranching enzyme (DBE) to hydrolyze the alpha-1,6-branches of amylopectin. Banana DBE seems to be an isoamylase-type enzyme, as indicated by substrate specificity and the cloning of a 1575 bp cDNA, similar to the isoamylase sequences from potato, Arabdopsis, and maize. The assays for DBE indicated only minor changes in activity during ripening, and the results of the northern and western blots with antiserum against the recombinant banana isoamylase were in agreement with the steady-state level of activity, since no significant changes in gene expression were observed. The high activity on beta-limit dextrin and the similarity to the potato isoform 3 suggest that during banana ripening the hydrolysis of alpha-1,6-linkage of amylopectin results from the activity of a pre-existing isoamylase-type debranching enzyme in coordination with other amylolitic enzymes. To the best of our knowledge, this is the first evaluation of activity and expression of a DBE from a fruit.
Assuntos
Clonagem Molecular , Frutas/enzimologia , Expressão Gênica , Isoamilase/genética , Isoamilase/metabolismo , Musa/enzimologia , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Isoamilase/química , Dados de Sequência Molecular , Alinhamento de Sequência , Amido/metabolismo , Especificidade por SubstratoRESUMO
As enzimas desramificadoras (DBE) são indispensáveis para a hidrólise das ligações `alfaï(1-6) do amido. Uma DBE tipo-isoamilase foi detectada durante o amadurecimento de banana, apresentando maior afinidade por ß-dextrina limite, seguida por glicogênio, com tamanho de subunidade estimado em 80 kDa. O sequenciamento de parte do gene da enzima de banana mostrou alta homologia com isoamilase de outros vegetais, confirmando sua identidade. A isoamilase de banana apresentou atividade, transcrição e expressão constantes durante o amadurecimento. Quando amostras de banana foram tratadas com 10 ppm de etileno, foi observada uma diminuição no nível de transcrito de isoamilase, porém sem alterações no perfil de atividade e quantidade de proteína expressa, sugerindo que a isoamilase de banana não é regulada por etileno
