Utilization of horse plasma in coagulase test for Staphylococci isolated from raw milk / Utilização de plasma de cavalo no teste de coagulase em Estafilococos isolados de leite cru

Staphylococci are frequently related to food poisoning outbreaks that are caused by their enterotoxins. The enterotoxins production is highly correlated to coagulase production, which one is detected in identification of pathogenic strains. Usually the coagulase test is conducted using lyophilized rabbit plasma, or even fresh rabbit blood, separated by sedimentation. The lyophilized plasma has high costs and the fresh material is obtained in small volumes from the animals, what made it unpractical. The objective of this work was evaluating the utilization of an alternative material to rabbit plasma, in this case the horse plasma, in coagulase test for staphylococci isolated from raw milk. So, 410 typical and atypical staphylococci colonies were tested for coagulase production using both plasmas. The results showed 284 (69.26%) positives for coagulase production and 126 (30.73%) negatives, with 100% of concordance between both plasmas. These results indicate the viability in using horse plasma in coagulase test for staphylococci isolated from raw milk, and complementary studies are necessary with strains from different types of food.

Estafilococos têm grande importância na indústria de alimentos por serem associados a surtos de intoxicação alimentar, pela ação de suas enterotoxinas. A produção dessas substâncias tem alta correlação com a produção da enzima coagulase, que é detectada na identificação de cepas potencialmente patogênicas. Esse teste é tradicionalmente realizado com plasma de coelho liofilizado ou pela sua separação de sangue coletado de coelhos. O plasma liofilizado tem alto custo e a punção cardíaca, além de ser bastante cruenta, permite a obtenção apenas de pequenos volumes de material. Este trabalho tem como objetivo verificar a viabilidade da utilização de um material alternativo ao plasma de coelho, neste caso o plasma de cavalo, no teste de coagulase para estafilococos isolados de leite cru. Assim, 410 colônias típicas e atípicas de estafilococos isoladas de leite cru foram submetidas ao teste de coagulase utilizandose os dois plasmas. Os resultados identificaram 284 (69,26%) colônias coagulase positivas e 126 (30,73%) coagulase negativas, com concordância de 100% entre os dois plasmas. Os resultados obtidos indicam que a utilização do plasma de cavalo pode ser uma alternativa viável na pesquisa de estafilococos coagulase positivos em leite cru.

Milk contamination in different points of the dairy process. ii) mesophilic, psychrotrophic and proteolytic microorganisms / Contaminação do leite em diferentes pontos da produção leiteira: ii) microrganismos mesófilos, psicrotróficos e proteolíticos

Psychrotrophics microorganisms are able to multiply under refrigeration temperatures. They can produce heat-resistant extracellular enzymes that cause organoleptic and structural changes in milk and dairy products. With the objective of determining the frequency of microorganisms in the dairy process, four farms were evaluated in Londrina city Brazil and different points were assessed. Mesophilic (48hs at 35oC), psychrotrophic (25hs at 21oC) and proteolytic (72hs at 22oC) microorganisms were researched, and the proteolytic predominant microflora were determined by using the Gram stain technique. The main psychrotrophic contamination points were the residual water on milk cans, on bulk tank and bad cleaned teats, and milk cans and teats were the most important sources of proteolytics. Gram negative bacilli represented 69% of the microorganisms in the refrigerated milk that means 45% of the total proteolytics microorganisms in the dairy process. Gram negative bacilli is most frequent on bad cleaned teats, teatcups, residual water in milk cans and bulk tank. The psychrotroph count in the refrigerated milk was more than the mesophilic count, showing that that psychrotrophics are the best indicatator for refrigerated milk contamination. The psycrotrophics count at all points assessed were greater than the ideal limit (10% of the mesophilic count). Thus as refrigeration at 4oC is n

Os psicrotróficos são microrganismos que têm capacidade de multiplicação em temperaturas de refrigeração. Produzem enzimas termorresistentes como proteases e lipases que promovem alterações organolépticas no leite e comprometem a produção de derivados. Com o objetivo de determinar a freqüência desses microrganismos a produção do leite, foram estudadas 04 propriedades da região de Londrina, PR, analisando diversos pontos do processo. Determinou-se a contagem de microrganismos aeróbios mesófilos (48hs a 35ºC), psicrotróficos (25hs a 21ºC), psicrotróficos proteolíticos (72 hs a 22ºC) e as características morfotintoriais da microbiota psicrotrófica proteolítica predominante. Os principais pontos de contaminação por psicrotróficos foram a água residual de latões, tanques de expansão e tetos higienizados inadequadamente, sendo que os psicrotróficos proteolíticos predominam nos latões e tetos. Bacilos Gram negativos representaram 45% da microbiota proteolítica de todo o processo de produção, no leite refrigerado corresponderam a 69% dos psicrotróficos proteolíticos encontrados e ainda predominaram nos tetos higienizados, teteiras, água residual de latões e tanques de expansão. As contagens de psicrotróficos superaram as de mesófilos em leite refrigerado, mostrando que a pesquisa de psicrotróficos é ideal para avaliar a real carga microbiana do leite refrigerado. Como a refrigeração a

Milk contamination in different points of the dairy process. ii) mesophilic, psychrotrophic and proteolytic microorganisms / Contaminação do leite em diferentes pontos da produção leiteira: ii) microrganismos mesófilos, psicrotróficos e proteolíticos

Psychrotrophics microorganisms are able to multiply under refrigeration temperatures. They can produce heat-resistant extracellular enzymes that cause organoleptic and structural changes in milk and dairy products. With the objective of determining the frequency of microorganisms in the dairy process, four farms were evaluated in Londrina city Brazil and different points were assessed. Mesophilic (48hs at 35oC), psychrotrophic (25hs at 21oC) and proteolytic (72hs at 22oC) microorganisms were researched, and the proteolytic predominant microflora were determined by using the Gram stain technique. The main psychrotrophic contamination points were the residual water on milk cans, on bulk tank and bad cleaned teats, and milk cans and teats were the most important sources of proteolytics. Gram negative bacilli represented 69% of the microorganisms in the refrigerated milk that means 45% of the total proteolytics microorganisms in the dairy process. Gram negative bacilli is most frequent on bad cleaned teats, teatcups, residual water in milk cans and bulk tank. The psychrotroph count in the refrigerated milk was more than the mesophilic count, showing that that psychrotrophics are the best indicatator for refrigerated milk contamination. The psycrotrophics count at all points assessed were greater than the ideal limit (10% of the mesophilic count). Thus as refrigeration at 4oC is n

Os psicrotróficos são microrganismos que têm capacidade de multiplicação em temperaturas de refrigeração. Produzem enzimas termorresistentes como proteases e lipases que promovem alterações organolépticas no leite e comprometem a produção de derivados. Com o objetivo de determinar a freqüência desses microrganismos a produção do leite, foram estudadas 04 propriedades da região de Londrina, PR, analisando diversos pontos do processo. Determinou-se a contagem de microrganismos aeróbios mesófilos (48hs a 35ºC), psicrotróficos (25hs a 21ºC), psicrotróficos proteolíticos (72 hs a 22ºC) e as características morfotintoriais da microbiota psicrotrófica proteolítica predominante. Os principais pontos de contaminação por psicrotróficos foram a água residual de latões, tanques de expansão e tetos higienizados inadequadamente, sendo que os psicrotróficos proteolíticos predominam nos latões e tetos. Bacilos Gram negativos representaram 45% da microbiota proteolítica de todo o processo de produção, no leite refrigerado corresponderam a 69% dos psicrotróficos proteolíticos encontrados e ainda predominaram nos tetos higienizados, teteiras, água residual de latões e tanques de expansão. As contagens de psicrotróficos superaram as de mesófilos em leite refrigerado, mostrando que a pesquisa de psicrotróficos é ideal para avaliar a real carga microbiana do leite refrigerado. Como a refrigeração a

Evaluation of Petrifilm™ EC and HS for total coliforms and Escherichia coli enumeration in water

Petrifilm™ EC and HS were compared to the MPN method to determine their efficacy to enumerate total coliforms and E. coli in 145 samples of water (76 water in natura, 69 drinking water). For water in natura, Petrifilm™ HS and EC showed good correlation with MPN method. In chlorinated water ( 20 col/100 mL and negatives) the agreement was low. For E.coli enumeration, Petrifilm™ EC showed a good correlation with MPN method. The results indicated that Petrifilm™ EC and HS are accurate to enumerate coliforms and E. coli in water when the expected counts are higher than 20/100 mL.

Petrifilm™ EC e HS foram comparados ao método do Número Mais Provável (NMP) para determinar sua eficiência na enumeração de coliformes totais e E. coli em 145 amostras de água (76 de água in natura e 69 de água de abastecimento). Em água in natura, Petrifilm™ HS e EC mostraram boa correlação com o método de NMP. Em água clorada ( 20 col/100 mL e negativas) a concordância foi baixa. Para enumeração de E. coli, Petrifilm™ EC mostrou boa correlação com o método de NMP. Os resultados indicaram que Petrifilm™ EC e HS podem ser usados com segurança para enumeração de coliformes totais e E. coli em água, desde que as contagens esperadas sejam maiores que 20/100 mL.

Assessment of the efficiency of SimPlate™ total plate count color indicator (TPC CI) to quantify mesophilic aerobic microorganisms in pasteurized milk

The SimPlate™ TPC CI system is a rapid method to count mesophilic aerobic microorganisms (MAM) in foods, based on the use of resazurine to indicate bacterial growth. Its efficiency in pasteurized milk was evaluated using 142 pasteurized milk samples (38 type A, 43 type B and 61 type C) collected in Londrina, PR. The standard plating method, using Plate Count Agar (PCA) was used for comparison. The plates of both systems were incubated at 35ºC and read after 24h and 48h. The occurrence of false-positive and false-negative wells and the predominant microorganisms in them were also evaluated. The results were compared by simple correlation and mean variance analyses. The correlation (r) and mean variance values were 0.6811 and 0.7583 for the results obtained after 24h, respectively, and 0.9126 and 0.0842 for the results obtained after 48h, respectively. These results indicate that the performance of the system increases when the plates are incubated for 48h. When the three types of milk were evaluated separately, these values were 0.9285 and 0.0817 for type A milk, 0.9231 and 0.0466 for type B milk and 0.7209 and 0.1082 for type C milk. These results indicate that the better the quality of the milk the better the performance of SimPlate™ TPC CI. False-negative wells, found more frequently in samples with high MAM counts, were caused by Gram positive microorganisms, poorly detected by the SimPlate™ TPC CI system because they grew slowly and had low reduction capacity. The results indicated a higher efficiency of the SimPlate™ TPC CI system in the reading at 48h.

O sistema SimPlate™ TPC CI é um método rápido para enumeração de microrganismos aeróbios mesófilos (MAM) em alimentos que utiliza a resazurina como substância indicadora de crescimento bacteriano. Para avaliar sua eficiência em leite pasteurizado, 142 amostras (38 de leite tipo A, 43 de leite tipo B e 61 de leite tipo C) foram colhidas em Londrina, PR, e analisadas pelo SimPlate™ TPC CI e pelo método de contagem em placas com ágar padrão de contagem (PCA). As placas de ambos os sistemas foram incubadas a 35ºC e as leituras realizadas em 24 e 48h. Também foi verificada a presença de resultados falso-positivos e falso-negativos bem como a microbiota láctea predominante nas cavidades do SimPlate™ TPC CI e a capacidade redutora dos diversos grupos de microrganismos. Os resultados foram comparados através de correlação simples e variância média. Considerando a leitura em 24h do SimPlate™ TPC CI, os resultados obtidos apresentaram uma correlação (r) de 0,6811 (var. média: 0,7583) com os resultados do método padrão; na leitura em 48h, a correlação encontrada entre os dois métodos foi de 0,9126 (var. média: 0,0842). Considerando os diferentes tipos de leite, as leituras em 48h do SimPlate™ TPC CI apresentaram as seguintes correlações com o método padrão: leite tipo A, r: 0,9285 (var. média: 0,0817); leite tipo B, r: 0,9231 (var. média: 0,0466); leite C, r: 0,7209 (var. média: 0,1082). Nas amostras com altas contagens de MAM, verificou-se uma maior freqüência de cavidades falso-negativas e uma grande participação de microrganismos Gram positivos, que são pobremente detectados pelo sistema SimPlate TPC CI por crescerem lentamente e possuírem baixa capacidade redutora. Os resultados indicaram um melhor eficiência do sistema SimPlate™ TPC CI na leitura em 48h, além da influência direta da qualidade do leite analisado, ou seja, quanto melhor a qualidade microbiológica do leite, melhor o desempenho do sistema. A alta correlação entre os métodos indica que o SimPlate™ TPC CI pode ser utilizado como uma alternativa viável ao método padrão de contagem de MAM em leite pasteurizado tipos A e B, desde que a leitura seja realizada em 48h.

Milk contamination in different points of the process: I) Aerobic mesophilics and psychrotrophics microorganisms / Contaminação do leite em diferentes pontos do processo de produção: I. Microrganismos aeróbios mesófilos e psicrotróficos

To improve the microbiology quality of the milk produced in Brazil, steps like the refrigeration have been implanted in the dairy sector but, temperatures of 4oC are selective for psycrotrophics microorganisms. These microorganisms, irrespective of their optimum growth temperature, are able to multiply in refrigeration temperature and produce heat-resistant extra celular enzymes that can cause changes, especially in dairy products and UHT milk. This work has the objective to determine the main points of milk contamination in dairy process and the effect of refrigeration on the control and multiplication of microorganisms. Five properties located in Londrina city- PR were aviated. Different points have been assessed in the dairy process and mesophilics (35oC/48hs) and psychrotrophics (21oC/25hs) microorganisms were researched. The main contamination points found were the milk cans, bulk milk tanks, residual water in the dairy equipments and teats bad cleaned. The residual water on the bulk milk tanks, on the cans, teats bad cleaned and the dairy centrifuge equipment were the main source of psychrotrophics. The quantity of psycrotrophics in all points assessed were greater than the ideal limit (10% of the mesophilic count). In the refrigerated milk, the psychrotrophics count over came the mesophilics count, showing that the mesophilics count can under estimate the real microflora

A refrigeração do leite na propriedade e o transporte a granel são medidas cuja implantação visa a melhoria da qualidade microbiológica do leite produzido no país, mas temperaturas em torno de 4ºC selecionam uma microbiota denominada psicrotrófica, que independentemente de sua temperatura ótima de crescimento, multiplica-se bem sob refrigeração e produz enzimas termorresistentes, que comprometem a qualidade principalmente de derivados lácteos e leite UAT. Este trabalho tem como objetivo determinar os principais pontos de contaminação do leite por mesófilos e psicrotróficos no processo de produção leiteira, bem como a eficiência da refrigeração no controle do crescimento destes microrganismos. Avaliou-se cinco (5) propriedades leiteiras da região de Londrina- PR, analisando-se diversos pontos do processo de produção e pesquisando-se microrganismos aeróbios mesófilos (35ºC/48hs) e psicrotróficos (21ºC/25 hs). Os principais pontos de contaminação foram os latões, tanques de expansão, água residual de equipamentos e utensílios de ordenha e tetos higienizados inadequadamente. Água residual dos tanques de expansão, de latões, tetos higienizados inadequadamente e a clarificadora foram os pontos com maior contagem de psicrotróficos. A quantidade de psicrotróficos encontrada em todos os segmentos do processo de produção pesquisados, foi superior ao que considera-se tolerável (10% da qua