Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into the recipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.(AU)

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotérios brasileiros e assim incentivar a distribuição de modelos mais adequados para a nossa comunidade científica.(AU)

Decontamination of genetically modified mice strains by embryo transfer for obtaining SPF colonies in a Brazilian animal facility / Descontaminação de linhagens de camundongos geneticamente modificadas por transferência embrionária para obtenção de colônias SPF em um biotério brasileiro (São Paulo, SP)

The introduction of new strains of mice in specific pathogen-free (SPF) animal facilities should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers. To meet this need, animals should be rederived to reduce infection risk and thus avoid research interference caused by loss of animal health status and welfare. The objective of this study was to implement mice embryo transfer in the laboratory mouse facility of the Department of Immunology at the Institute of Biomedical Sciences/University of São Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive genetically modified mouse strains with undefined sanitary status, received from different research and educational institutions. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by natural means and transferred into the oviducts of SPF pseudo-pregnant female mice. All surgical procedures were performed under aseptic conditions. A total of 625 embryos were transferred into therecipients. 148 pups were born, of which 140 were reared. Viruses, bacteria and intestinal protozoa were eliminated using this technique. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility. With these results, we can stimulate the use of embryo transfer technique between rodent facilities in Brazil and thus encourage the distribution of better models to our scientific community.

A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios livres de patógenos específicos (SPF) deve ser realizada com critérios para evitar a quebra das barreiras sanitárias. Dessa forma, os animais devem ser rederivados para reduzir os riscos de infecção e evitar as interferências provocadas pela perda do status sanitário e do bem-estar dos animais. O objetivo deste estudo foi implementar a transferência de embriões murinos no Biotério do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, Brasil. As transferências embrionárias foram realizadas para rederivar linhagens de camundongos geneticamente modificadas com status sanitário não conhecido, recebidas de diferentes instituições de pesquisa e de ensino. Os embriões em duas células foram obtidos pelos métodos naturais e transferidos para os ovidutos de fêmeas de camundongos SPF pseudoprenhas. Todos os procedimentos cirúrgicos foramrealizados sob condições assépticas. Um total de 625 embriões foram transferidos para as receptoras. Foram obtidos 148 filhotes nascidos vivos, destes 140 foram desmamados. Por meio desta técnica, foram eliminados vírus, bactérias e protozoários intestinais. A melhora no status microbiológico dos camundongos permitiu a expansão destes em nossa colônia SPF. Com esses resultados, podemos promover o uso da técnica de transferência de embriões entre os biotéri

Núcleo de desenvolvimento em fertilização in vitro I. Estudo da resposta à superovulação e viabilidade embrionária / / Genter for development in vitro fertilization. I.Study of response to super ovulation and embryo viability

Este trabalho tem como objetivo implantar novas tecnologias na área de bioterismo, com a formação de um núcleo de desenvolvimento de Fertilização In Vitro (FIV) para criação de um banco de embriões de camundongos isogênicos, transgênicos ou "nocautes", estudando inicialmente a superovulação e viabilidade embrionária de diferentes linhagens de camundongos. As fêmeas com oito semanas foram estimuladas com os hormônios PMSG e HCG, em seguida, eutanasiadas para obtenção dos oócitos e os machos, das respectivas linhagens, foram também eutanasiados para obtenção dos espermatozóides. Após a fertilização in vitro, os embriões em duas células foram coletados e transferidos para fêmeas pseudográvidas. Os resultados da FIV mostraram que as linhagens 129sv ABR, CPA, C5BL/10 e ALOX apresentaram maior número de oócitos em relação às demais linhagens testadas: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/6 TLR2, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c CARECA, C57BL/6 IL-4 e C57BL/6 TLR4. Com relação ao - nº de oócitos/ nº de embriões em duas células - as linhagens A/J (42/30) e CBA (20/14), apesar de apresentarem um número de oócitos inferior quando comparamos com os animais da linhagem 129 (165/53), apresentaram um maior número de embriões em duas células. Com a linhagem C57BL/10.A, o número de oócitos (119) foi maior em comparação com a linhagem A/J e CBA, no entanto, o número de embriões em duas células obtidos pela linhagem C57BL/10.A (22) foi menor em comparação com os animais da linhagem A/J e CBA. A linhagem XPA, apresentou grande número de oócitos e também de embriões em duas células (116/76). A eficiência da FIV foi validada pelos primeiros nascimentos de embriões, obtidos com animais das linhagens C57BL/6 IL4, C57BL/6 TLR2 e da linhagem 129sv ABR. Em conjunto, os nossos resultados mostram que a resposta à superovulação é um fenômeno linhagem específico, além disso, dentro da particularidade de cada linhagem, os embriões que se diferenciaram em duas células são capazes de ser gerados em fêmeas receptoras e se desenvolveram até o nascimento. Com essa ferramenta, abrimos novas possibilidades de avanços tecnológicos na área de bioterismo. Certificado CEUA nº 098/11 HCFMUSP.

This study aimed to deploy new technologies in the Laboratory Animal Science, with the formation of a core development in vitro fertilization (IVF) to create an embryo bank of inbred mice, transgenic or “knockout”, initially studying the super ovulation and embryo viability of different strains of mice. Females 8 weeks, were stimulated with PMSG and HCG hormones then euthanized to obtain the oocytes and males, their lines were also euthanized to obtain sperm. After in vitro fertilization, the embryo into two cells were collected and transferred to pseudo-pregnant females. The IVF results showed that strains 129sv ABR, XPA, and C57BL/10.A ALOX had a higher number of oocytes compared with other tested strains: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/TLR2 6, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c BALD, C57BL/6 IL -4 and C57BL/6 TLR4. With respect to -n oocyte/embryo -n into two cells - the strains A/J (42/30) and CBA (20/14), although with a lower number of oocytes when compared with the strain 129 (165/53), showed a higher number of embryos in two cells. With the line C57BL/10.A, the number of oocytes (119) was higher in comparison with strain A/J and CBA, however, the number of two-cell embryos obtained by C57BL/10.A (22) was lower compared with animals from the strain A/J and CBA. The strain XPA, showed a large number of oocytes and embryos also two cells (116/76). The efficiency of IVF, has been validated by the first births of embryos obtained from animals of the strains C57BL/6 IL4, C57BL/6 and TLR2 strain 129sv ABR. Together, our results showed that the response to ovulation is a super strain-specific phenomenon, moreover, within the particularity of each strain, the embryos which differentiated into two cells are able to be generated in recipient females and develop to the birth. With this tool, we have opened new possibilities for technological advances in the Laboratory Animal Science. Certified CEUA Nº 098/11 HCFMUSP.

Núcleo de desenvolvimento em fertilização in vitro I. Estudo da resposta à superovulação e viabilidade embrionária / / Genter for development in vitro fertilization. I.Study of response to super ovulation and embryo viability

Este trabalho tem como objetivo implantar novas tecnologias na área de bioterismo, com a formação de um núcleo de desenvolvimento de Fertilização In Vitro (FIV) para criação de um banco de embriões de camundongos isogênicos, transgênicos ou "nocautes", estudando inicialmente a superovulação e viabilidade embrionária de diferentes linhagens de camundongos. As fêmeas com oito semanas foram estimuladas com os hormônios PMSG e HCG, em seguida, eutanasiadas para obtenção dos oócitos e os machos, das respectivas linhagens, foram também eutanasiados para obtenção dos espermatozóides. Após a fertilização in vitro, os embriões em duas células foram coletados e transferidos para fêmeas pseudográvidas. Os resultados da FIV mostraram que as linhagens 129sv ABR, CPA, C5BL/10 e ALOX apresentaram maior número de oócitos em relação às demais linhagens testadas: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/6 TLR2, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c CARECA, C57BL/6 IL-4 e C57BL/6 TLR4. Com relação ao - nº de oócitos/ nº de embriões em duas células - as linhagens A/J (42/30) e CBA (20/14), apesar de apresentarem um número de oócitos inferior quando comparamos com os animais da linhagem 129 (165/53), apresentaram um maior número de embriões em duas células. Com a linhagem C57BL/10.A, o número de oócitos (119) foi maior em comparação com a linhagem A/J e CBA, no entanto, o número de embriões em duas células obtidos pela linhagem C57BL/10.A (22) foi menor em comparação com os animais da linhagem A/J e CBA. A linhagem XPA, apresentou grande número de oócitos e também de embriões em duas células (116/76). A eficiência da FIV foi validada pelos primeiros nascimentos de embriões, obtidos com animais das linhagens C57BL/6 IL4, C57BL/6 TLR2 e da linhagem 129sv ABR. Em conjunto, os nossos resultados mostram que a resposta à superovulação é um fenômeno linhagem específico, além disso, dentro da particularidade de cada linhagem, os embriões que se diferenciaram em duas células são capazes de ser gerados em fêmeas receptoras e se desenvolveram até o nascimento. Com essa ferramenta, abrimos novas possibilidades de avanços tecnológicos na área de bioterismo. Certificado CEUA nº 098/11 HCFMUSP.(AU)

This study aimed to deploy new technologies in the Laboratory Animal Science, with the formation of a core development in vitro fertilization (IVF) to create an embryo bank of inbred mice, transgenic or “knockout”, initially studying the super ovulation and embryo viability of different strains of mice. Females 8 weeks, were stimulated with PMSG and HCG hormones then euthanized to obtain the oocytes and males, their lines were also euthanized to obtain sperm. After in vitro fertilization, the embryo into two cells were collected and transferred to pseudo-pregnant females. The IVF results showed that strains 129sv ABR, XPA, and C57BL/10.A ALOX had a higher number of oocytes compared with other tested strains: A/J, BALB/c IL-4, BALB/c SCID, C57BL/TLR2 6, CBA, C57BL/6 CD1, BALB/c BALD, C57BL/6 IL -4 and C57BL/6 TLR4. With respect to -n oocyte/embryo -n into two cells - the strains A/J (42/30) and CBA (20/14), although with a lower number of oocytes when compared with the strain 129 (165/53), showed a higher number of embryos in two cells. With the line C57BL/10.A, the number of oocytes (119) was higher in comparison with strain A/J and CBA, however, the number of two-cell embryos obtained by C57BL/10.A (22) was lower compared with animals from the strain A/J and CBA. The strain XPA, showed a large number of oocytes and embryos also two cells (116/76). The efficiency of IVF, has been validated by the first births of embryos obtained from animals of the strains C57BL/6 IL4, C57BL/6 and TLR2 strain 129sv ABR. Together, our results showed that the response to ovulation is a super strain-specific phenomenon, moreover, within the particularity of each strain, the embryos which differentiated into two cells are able to be generated in recipient females and develop to the birth. With this tool, we have opened new possibilities for technological advances in the Laboratory Animal Science. Certified CEUA Nº 098/11 HCFMUSP.(AU)