RESUMO
INTRODUCCIÓN: el virus del dengue es responsable de un creciente problema de salud pública, sin que se haya dilucidado aún el papel de algunos atributos biológicos en la virulencia y(o) patogenicidad de los serotipos virales. OBJETIVO: evaluar propiedades biológicas in vitro e in vivo de 4 cepas venezolanas de DENV2 (LAR1693, LAR19094, LAR2303, INH35262) causantes de fiebre de dengue y fiebre hemorrßgica del dengue y la cepa (16681) aislada de un paciente con fiebre hemorrágica del dengue /síndrome de choque del dengue. MÉTODOS: las cepas evaluadas fueron aisladas de sueros de pacientes virémicos con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue. La titulación se realizó mediante el ensayo de titulación en placas en la línea celular BHK-21, esta metodología permitió determinar el tamaño de placa y la cinética de multiplicación viral. Se determinó el tiempo y la intensidad del efecto citopático e inmunofluorescencia específica en la línea celular C6/36-HT mediante las técnicas de microscopia óptica y de fluorescencia, respectivamente. De manera adicional, se emplearon las metodologías de citometría de flujo para cuantificar la replicación viral en las células C6/36-HT y la inoculación en ratones lactantes para la determinación de neurovirulencia. RESULTADOS: las cepas, excepto 16681, produjeron placas pequeñas (m.o.i.: 0,01). La replicación viral en C6/36-HT fue mayor para 16681. El efecto citopático permitió clasificar las cepas en baja (LAR19094 y LAR2303), moderada (INH35262 y 16681) y alta citopatogenicidad (LAR1693). El primer día posinoculación se detectó inmunofluorescencia entre 5 y 50 por ciento, excepto para 16681. La neurovirulencia en ratones lactantes inoculados con 10(4) ufp/mL causó 77,5 por ciento (INH35262) a 100 por ciento (LAR1693 y 16681) de mortalidad, con variabilidad en los días de supervivencia. La replicación viral (24, 36 y 48 h posinoculación) mediante citometría de flujo fue desde 3,33 por ciento hasta ...(AU)
INTRODUCTION: the dengue virus causes a growing public health problem, but it has not been possible yet to determine the role of some biological attributes in the virulence and /or pathogeneity of viral serotypes. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro and in vivo biological properties of 4 Venezuelan DENV-2 strains (LAR1693, LAR19094, LAR2303, IHN35262) responsible for dengue fever and dengue hemorrhagic fever and the reference strain (16681) isolated from a patient suffering dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome. METHODS: the evaluated strains were isolated from sera of viremic patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever. They were then subjected to the plaque titration assay in BHK-21 cell line in order to determine the plaque size and kinetics of viral replication. The length of time and intensity of cytopathic effect and specific immunofluorescence on the C6/36-HT cell line was evaluated by optical microscopy and fluorescence respectively. Additionally, the flow cytometry to quantify viral replication in C6/36-HT cells and the intracerebral inoculation in newborn mice to find out neurovirulence were both used. RESULTS: all strains, except for 16681, showed small plaques at 0.01 m.o.i. The viral replication in C6/36-HT was higher for 16681 strain. Through cytophatic effect observations the strains were classified with low (LAR19094 and LAR2303), mild (INH35262 y 16681) and high (LAR1693) cytophatogeneity. The specific immunofluoresce ranged 5 to 50 percent in the first day post inoculation, except for 16681 strain. The neurovirulence in newborn mices inoculated with 10(4) pfu/mL yielded 77.5 (INH35262) to 100 percent (LAR1693 y 16681) mortality rate and variability during survival days. The viral replication at 24.36 and 48 hours after inoculation was assessed by flow cytometry, ranging from 3.33 to 90.3 percent CONCLUSIONS: the results led to the conclusion that viral strain behaviors were not sound evidence ...(AU)
Assuntos
Dengue Grave/epidemiologia , Vírus da Dengue , Replicação Viral , Vírus da Dengue/patogenicidadeRESUMO
INTRODUCCIÓN: el virus del dengue es responsable de un creciente problema de salud pública, sin que se haya dilucidado aún el papel de algunos atributos biológicos en la virulencia y(o) patogenicidad de los serotipos virales. OBJETIVO: evaluar propiedades biológicas in vitro e in vivo de 4 cepas venezolanas de DENV2 (LAR1693, LAR19094, LAR2303, INH35262) causantes de fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue y la cepa (16681) aislada de un paciente con fiebre hemorrágica del dengue /síndrome de choque del dengue. MÉTODOS: las cepas evaluadas fueron aisladas de sueros de pacientes virémicos con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica del dengue. La titulación se realizó mediante el ensayo de titulación en placas en la línea celular BHK-21, esta metodología permitió determinar el tamaño de placa y la cinética de multiplicación viral. Se determinó el tiempo y la intensidad del efecto citopático e inmunofluorescencia específica en la línea celular C6/36-HT mediante las técnicas de microscopia óptica y de fluorescencia, respectivamente. De manera adicional, se emplearon las metodologías de citometría de flujo para cuantificar la replicación viral en las células C6/36-HT y la inoculación en ratones lactantes para la determinación de neurovirulencia. RESULTADOS: las cepas, excepto 16681, produjeron placas pequeñas (m.o.i.: 0,01). La replicación viral en C6/36-HT fue mayor para 16681. El efecto citopático permitió clasificar las cepas en baja (LAR19094 y LAR2303), moderada (INH35262 y 16681) y alta citopatogenicidad (LAR1693). El primer día posinoculación se detectó inmunofluorescencia entre 5 y 50 %, excepto para 16681. La neurovirulencia en ratones lactantes inoculados con 10(4) ufp/mL causó 77,5 % (INH35262) a 100 % (LAR1693 y 16681) de mortalidad, con variabilidad en los días de supervivencia. La replicación viral (24, 36 y 48 h posinoculación) mediante citometría de flujo fue desde 3,33 % hasta 90,3 %. CONCLUSIONES: los resultados permitieron concluir que el comportamiento de las cepas virales no fue evidencia suficiente para correlacionar estos atributos biológicos in vitro e in vivo con la severidad de los cuadros clínicos.
INTRODUCTION: the dengue virus causes a growing public health problem, but it has not been possible yet to determine the role of some biological attributes in the virulence and /or pathogeneity of viral serotypes. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro and in vivo biological properties of 4 Venezuelan DENV-2 strains (LAR1693, LAR19094, LAR2303, IHN35262) responsible for dengue fever and dengue hemorrhagic fever and the reference strain (16681) isolated from a patient suffering dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome. METHODS: the evaluated strains were isolated from sera of viremic patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever. They were then subjected to the plaque titration assay in BHK-21 cell line in order to determine the plaque size and kinetics of viral replication. The length of time and intensity of cytopathic effect and specific immunofluorescence on the C6/36-HT cell line was evaluated by optical microscopy and fluorescence respectively. Additionally, the flow cytometry to quantify viral replication in C6/36-HT cells and the intracerebral inoculation in newborn mice to find out neurovirulence were both used. RESULTS: all strains, except for 16681, showed small plaques at 0.01 m.o.i. The viral replication in C6/36-HT was higher for 16681 strain. Through cytophatic effect observations the strains were classified with low (LAR19094 and LAR2303), mild (INH35262 y 16681) and high (LAR1693) cytophatogeneity. The specific immunofluoresce ranged 5 to 50 % in the first day post inoculation, except for 16681 strain. The neurovirulence in newborn mices inoculated with 10(4) pfu/mL yielded 77.5 (INH35262) to 100% (LAR1693 y 16681) mortality rate and variability during survival days. The viral replication at 24.36 and 48 hours after inoculation was assessed by flow cytometry, ranging from 3.33 to 90.3% CONCLUSIONS: the results led to the conclusion that viral strain behaviors were not sound evidence to correlate these in vitro e in vivo biological attributes with the severity of the clinical pictures.
RESUMO
In 2001, we began a prospective longitudinal study in a cohort of schoolchildren 5-13 years of age residing in Maracay, Venezuela, to determine the cumulative incidence of dengue virus (DENV) infections by virus serotype. This report presents serological data from 710 schoolchildren who were tested during the first 2 years of the study. Serological evaluations were conducted by plaque reduction neutralization test (PRNT). At study initiation, 51% of children had PRNT antibody titers against one (30.1% = 13.4% DENV-1, 14.2% DENV-2, 0.6% DENV-3, and 2% DENV-4) or multiple DENV serotypes (20.9%). By the end of the first year, 89 of 348 (25.6%) PRNT-negative children seroconverted, and 94 of 362 (26%) who were PRNT-positive in their baseline sera tested positive for additional serotypes, for an overall cumulative incidence of DENV infections of 25.8%. By serotype, the percentages found were 1.4% DENV-1, 1.4% DENV-2, 19% DENV-3, and 1.2% DENV-4. In the second year, 37 of 259 (14.3%) PRNT-negative children seroconverted, and 83 of 451 (18.4%) who had monotypic and multitypic PRNT patterns in their baseline sera exhibited additional serotype seroconversions, for an overall cumulative incidence of DENV infections of 16.9%. By serotype, the percentages found were 0.8% DENV-1, 1.5% DENV-2, 8.5% DENV-3, and 2.3% DENV-4. Overall, these results suggest a high cumulative incidence of DENV infections among 5-13-year-old school children in Maracay, Venezuela.
