Vaginal lactobacilli as potential probiotics against Candida spp

Urogenital infections affect millions of people every year worldwide. The treatment of these diseases usually requires the use of antimicrobial agents, and more recently, the use of probiotic lactic acid bacteria (LAB) cultures for the management of vaginal infections has been extensively studied. In this work, 11 vaginal lactobacilli isolates, previously obtained from healthy patients, were studied to screen microorganisms with probiotic properties against Candida spp. The LAB were tested for their ability of auto-aggregation, coaggregation with C. albicans, C. glabrata, C. krusei, and C. tropicalis, adhesion to Caco-2 epithelial cells and production of lactic acid and hydrogen peroxide (H2O2). All lactobacilli isolates tested were able to auto-aggregate (ranging from 25.3% to 75.4% assessed at 4 hours of incubation) and to co-aggregate with the four Candida species into different degrees; among them L. crispatus showed the highest scores of coaggregation. The highest amount of lactic acid was produced by L. salivarius (13.9 g/l), followed by L. johnsonii (6.5 g/l), L. acidophilus (5.5 g/l), and L. jensenii (5.4 g/l). All isolates produced H2O2 , but the highest levels (3 -10 mg/l) were observed for L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, L. johnsonii, and L. vaginalis. Only L. agilis, L. jensenii, L. johnsonii and L. ruminus were able to adhere to epithelial Caco-2 cells. Among the isolates evaluated, L agilis, L. jensenii, L. johnsonii, and L. ruminus exhibited simultaneously several desirable properties as potential probiotic strains justifying future studies to evaluate their technological properties in different pharmaceutical preparations for human use.

Correlation between API 20 STREP and multiplex PCR for identification of Enterococcus spp. isolated from Brazilian foods

We evaluated the suitability of API 20 STREP and multiplex PCR to speciate 52 Enterococcus spp. obtained from Brazilian foods. A high percentage of isolates (78.9%) presented discrepant results between evaluated tests. Similar results were obtained for six E. faecalis and five E. faecium. The PCR multiplex was more effective than API 20 STREP for complete identification of the isolates.

A identificação das espécies de 52 Enterococcus spp. isolados de amostras de alimentos foi realizada empregando-se duas metodologias: sistema API 20 STREP e PCR multiplex. Os resultados obtidos revelaram que 78,9% dos isolados apresentaram resultados diferentes nos dois testes utilizados. Apenas seis E. faecalis e cinco E. faecium apresentaram resultados concordantes pelos dois métodos. PCR multiplex permitiu a identificação completa de um número significantemente maior de enterococos do que o sistema API 20 STREP.

Evaluation of bacteriocin-producing Lactobacillus sakei 1 against Listeria monocytogenes 1/2a growth and haemolytic activity

Bacteriocin-producing Lactobacillus sakei 1 was cultivated in Brain-Heart Infusion broth (24 h at 25ºC). The culture supernatant was neutralized, filter sterilized and used to test the activity of bacteriocin against Listeria monocytogenes 1/2a, at 8ºC and 15ºC. Non-bacteriocinogenic Lactobacillus sakei ATCC 15521 was used as a negative control. L. monocytogenes 1/2a was inoculated in culture supernatant medium from L. sakei 1 and L. sakei ATCC 15521 and the listerial populations were determined after 0, 5 and 10 days. The bacteriocin production was quantified as arbitrary units per mL (AU/mL) using agar antagonism test. Additionally, to investigate if L. monocytogenes virulence pattern could be changed after bactericion exposure, the ability of L. monocytogenes to cause haemolysis in sheep red blood cells was determined, before and after exposure to bacteriocin at 8ºC. In the presence of the antimicrobial peptide, at 8ºC, L. monocytogenes population decreased, but growth of resistant cells was observed. At 15ºC, there was no difference between test and control. Furthermore, the haemolytic activity of L. monocytogenes 1/2a was not altered by exposure to L. sakei 1 bacteriocin, which suggests no change in its virulence pattern.

Lactobacillus sakei 1 produtor de bacteriocina foi cultivado em caldo Infusão Cérebro-Coração por 24h a 25ºC. O sobrenadante da cultura foi neutralizado, esterilizado por filtração e usado para testar a atividade da bacteriocina frente a Listeria monocytogenes 1/2a, a 8ºC e 15ºC. Lactobacillus sakei ATCC 15521 não bacteriocinogênico, foi utilizado como controle negativo. L. monocytogenes 1/2a foi inoculada no sobrenadante da cultura de L.sakei 1 e L. sakei ATCC 15521 e as populações listeriais foram determinadas após 0, 5 e 10 dias. A produção de bacteriocina foi quantificada como unidades arbitrárias por mL (UA/mL), utilizando-se o teste de antagonismo em ágar. Adicionalmente, para investigar se o padrão de virulência de L. monocytogenes poderia ter mudado após exposição à bacteriocina, foi avaliada a habilidade de L. monocytogenes em causar hemólise em hemáceas de carneiro, antes e após exposição à bacteriocina a 8ºC. Na presença do peptídeo antimicrobiano, a 8ºC, a população de L. monocytogenes foi reduzida, mas o desenvolvimento de células resistentes foi observado. A 15ºC, não houve diferença entre os grupos controle e teste. Além disso, a atividade hemolítica de L. monocytogenes 1/2a não foi alterada pela exposição à bacteriocina de L. sakei, 1/2a não foi alterada pela exposição à bacteriocina de L. sakei, o que sugere que não houve mudança em seu padrão de virulência.

Fate of Helicobacter pylori artificially inoculated in lettuce and carrot samples

Helicobacter pylori is known, worldwide, as the causative agent of gastric diseases. However, its transmission route has not been completely understood. To evaluate the survival of H. pylori (a clinical and a reference strain) artificially inoculated on lettuce and carrot samples, portions of 25 g were inoculated with approximately 10(6) CFU/g of H. pylori and packed under normal and/or modified atmosphere (3% oxygen, 10% carbon dioxide, and 87% nitrogen). The inoculated food samples were stored at 8ºC, with daily enumeration of H. pylori populations on Columbia blood agar (CBA) and/ or Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). When CBA with antibiotics was used, the clinical isolate H. pylori HP1 was detected for up to 72 h in sanitized lettuce and carrot. In sterilized carrot samples, H. pylori HP1 remained viable for up to 96 h. The CBA without antibiotics allowed the recovery of H. pylori ATCC 43629, from carrot samples stored in both atmospheres tested, for up to 120 hours. Our results reinforce that foodborne transmission of H. pylori cannot be disregarded yet.

H. pylori é o agente da maioria dos casos de gastrites e úlceras pépticas. Entretanto, sua forma de transmissão não foi completamente elucidada. Para avaliar a sobrevivência de H. pylori (uma cepa de referência e uma clínica), artificialmente inoculado em amostras de cenoura e alface, porções de 25g das amostras receberam aproximadamente 10(6) UFC/g de H. pylori, e foram embaladas em atmosfera normal e/ou modificada (3% oxigênio, 10% dióxido de carbono, e 87% nitrogênio). Em seguida, foram armazenadas a 8ºC, com enumeração diária da população de H. pylori em ágar Columbia sangue (CBA) e/ou Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). Quando usamos CBA com antibióticos, o isolado clínico de H. pylori (HP1) foi detectado por até 72 horas nas amostras de alface e cenoura sanitizadas. Em amostras de cenoura esterilizadas, H. pylori HP1 permaneceu viável por até 96 horas. CBA sem antibióticos permitiu a recuperação de H. pylori ATCC 43629, a partir de amostras de cenoura embaladas em ambas as atmosferas, por até 120 horas. Nossos resultados reforçam que a transmissão de H. pylori, através do consumo de água e alimento contaminados, ainda não pode ser descartado.

Fate of Helicobacter pylori artificially inoculated in lettuce and carrot samples

Helicobacter pylori is known, worldwide, as the causative agent of gastric diseases. However, its transmission route has not been completely understood. To evaluate the survival of H. pylori (a clinical and a reference strain) artificially inoculated on lettuce and carrot samples, portions of 25 g were inoculated with approximately 10(6) CFU/g of H. pylori and packed under normal and/or modified atmosphere (3% oxygen, 10% carbon dioxide, and 87% nitrogen). The inoculated food samples were stored at 8ºC, with daily enumeration of H. pylori populations on Columbia blood agar (CBA) and/ or Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). When CBA with antibiotics was used, the clinical isolate H. pylori HP1 was detected for up to 72 h in sanitized lettuce and carrot. In sterilized carrot samples, H. pylori HP1 remained viable for up to 96 h. The CBA without antibiotics allowed the recovery of H. pylori ATCC 43629, from carrot samples stored in both atmospheres tested, for up to 120 hours. Our results reinforce that foodborne transmission of H. pylori cannot be disregarded yet.

H. pylori é o agente da maioria dos casos de gastrites e úlceras pépticas. Entretanto, sua forma de transmissão não foi completamente elucidada. Para avaliar a sobrevivência de H. pylori (uma cepa de referência e uma clínica), artificialmente inoculado em amostras de cenoura e alface, porções de 25g das amostras receberam aproximadamente 10(6) UFC/g de H. pylori, e foram embaladas em atmosfera normal e/ou modificada (3% oxigênio, 10% dióxido de carbono, e 87% nitrogênio). Em seguida, foram armazenadas a 8ºC, com enumeração diária da população de H. pylori em ágar Columbia sangue (CBA) e/ou Helicobacter pylori Special Peptone Agar (HPSPA). Quando usamos CBA com antibióticos, o isolado clínico de H. pylori (HP1) foi detectado por até 72 horas nas amostras de alface e cenoura sanitizadas. Em amostras de cenoura esterilizadas, H. pylori HP1 permaneceu viável por até 96 horas. CBA sem antibióticos permitiu a recuperação de H. pylori ATCC 43629, a partir de amostras de cenoura embaladas em ambas as atmosferas, por até 120 horas. Nossos resultados reforçam que a transmissão de H. pylori, através do consumo de água e alimento contaminados, ainda não pode ser descartado.

Antilisterial activity of lactic acid bacteria isolated from vacuum-packaged brazilian meat and meat products

Twenty samples of Brazilian meat and meat products were screened by the agar overlay method for bacteriocin-producing lactic acid bacteria, using Lactobacillus sake ATCC 15521 as indicator strain. Based on Gram staining, KOH reaction, catalase test and fermentation of 49 carbohydrates (API 50 CH), three out of seven isolates with confirmed antagonist properties were identified as Lactobacillus curvatus, one as Leuconostoc mesenteroides and one as Leuconostoc sp. Two isolates could not be properly identified using these tests. The inhibitors produced by these strains were sensitive to proteases. Inhibition due to lytic bacteriophages was ruled out, so the isolates were classified as bacteriocin-producing lactic acid bacteria. Four of them presented antilisterial activity and a potential application as biopreservatives in meat systems.

Vinte amostras de carnes e produtos cárneos brasileiros foram analisadas com a finalidade de se isolar bactérias láticas produtoras de bacteriocina, através do método de antagonismo em ágar, utilizando Lactobacillus sake ATCC 15521 como microrganismo indicador. Baseado na coloração de Gram, reação com KOH, teste de catalase e teste de fermentação de 49 carboidratos (API 50 CH), três das sete cepas com características antagonísticas foram classificadas como Lactobacillus curvatus, uma como Leuconostoc mesenteroides e uma como Leuconostoc sp. Duas cepas não puderam ser identificadas usando apenas estes testes. Os inibidores produzidos por essas cepas mostraram-se sensíveis a proteases. A inibição devido a bacteriófagos líticos foi descartada e assim as culturas foram classificadas como bactérias láticas produtoras de bacteriocina. Quatro cepas apresentaram atividade antilisterial, e conseqüentemente um potencial de utilização como bioconservadores em produtos cárneos.