RESUMO
de mama. MUTYH é uma glicosilase envolvida no mecanismo de reparo de excisão de bases (BER) e é responsável pelo reconhecimento e excisão de uma adenina pareada erroneamente com uma guanina oxidada (8-oxoG) que não foi reparada corretamente pela OGG1, outra glicosilase envolvida no reparo deste tipo de base modificada. A presença da base modificada 8-oxoG no DNA causa a transversão GC:TA após eventos replicativos do DNA e a ação de MUTYH é fundamental para corrigir esse pareamento incorreto e dar tempo à OGG1 reparar lesões 8-oxoG não corrigidas previamente. Os mecanismos envolvidos no risco aumentado de alguns tumores em pacientes portadores de mutações mono e bialélicas ainda são desconhecidos. Através da técnica CRISPR/Cas9 e sua variação CRISPR/Cas9n desenvolvemos construções com guias direcionadas para o éxon 1 ou éxon 2 do gene MUTYH, com a finalidade de se estabelecer um modelo em células de câncer gástrico para o estudo da deficiência de MUTYH nas condições mono e bialélica. O sequenciamento do DNA dos clones editados validou a eficiência das construções. A análise da cinética de indução da proteína selvagem, através de estresse oxidativo, relevou que MUTYH é recrutado rapidamente para o núcleo durante o estresse oxidativo. Desse modo, descrevemos um importante modelo para o entendimento das funções biológicas de MUTYH inicialmente em linhagem gástrica e que contribuirá para desvendar os mecanismos biológicos envolvidos na formação de tumores em diferentes tecidos, assim como avaliar a existência de assinaturas mutacionais características.
DNA repair mechanisms are essential to protect and preserve the integrity of the genomes of living organisms. In humans, germline alterations in DNA repair genes are implicated in cancer predisposition. Carriers of a biallelic pathogenic variant in MUTYH are at increased risk of developing colorectal, bladder and ovarian cancer. However, monoallelic mutations in MUTYH increase by more than nine times the risk of developing gastric tumor and, to a lesser extent, the risk of colorectal and breast cancer. MUTYH is a glycosylase involved in the base excision repair (BER) mechanism and is responsible for the recognition and excision of an adenine mispaired with an oxidized guanine (8-oxoG) that has not been correctly repaired by OGG1, another glycosylase involved in the repair of this type of modified base. The presence of the modified 8-oxoG base in the DNA causes the GC:TA transversion after DNA replicative events and the action of MUTYH is critical to correct this mismatch, whichgives OGG1 time to repair previously uncorrected 8-oxoG lesions. The mechanisms involved in the increased risk of some tumors in patients with mono- and biallelic mutations are still unknown. Through the CRISPR/Cas9 technique and its CRISPR/Cas9n variation, we developed constructs with guides directed to the exon1 or exon2 of the MUTYH gene, in order to establish agastric cancer cellular model for the study of MUTYH deficiency in the mono and biallelic contexts. The sequencing of the DNA of edited clones validated the efficiency of the constructions. Analysis of the kinetics of induction of the wild-type proteinin response to oxidative stress, revealed that MUTYH is rapidly recruited to the nucleus during oxidative stress. Thus, we described an important model for understanding the biological functions of MUTYH initially in a gastric cell lineage that will contribute to unravel differences in the biological mechanisms underlying tumors in different tissues and also to evaluate the existence of characteristic mutational signatures.