Brazilian Center for the Validation of Alternative Methods (BraCVAM) and the process of validation in Brazil.

The need for the creation of a Brazilian centre for the validation of alternative methods was recognised in 2008, and members of academia, industry and existing international validation centres immediately engaged with the idea. In 2012, co-operation between the Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ) and the Brazilian Health Surveillance Agency (ANVISA) instigated the establishment of the Brazilian Center for the Validation of Alternative Methods (BraCVAM), which was officially launched in 2013. The Brazilian validation process follows OECD Guidance Document No. 34, where BraCVAM functions as the focal point to identify and/or receive requests from parties interested in submitting tests for validation. BraCVAM then informs the Brazilian National Network on Alternative Methods (RENaMA) of promising assays, which helps with prioritisation and contributes to the validation studies of selected assays. A Validation Management Group supervises the validation study, and the results obtained are peer-reviewed by an ad hoc Scientific Review Committee, organised under the auspices of BraCVAM. Based on the peer-review outcome, BraCVAM will prepare recommendations on the validated test method, which will be sent to the National Council for the Control of Animal Experimentation (CONCEA). CONCEA is in charge of the regulatory adoption of all validated test methods in Brazil, following an open public consultation.

Participation of Brazil in the World Congresses on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences: an increase in commitment to the Three Rs.

Many Brazilian researchers have long been interested in the development and use of alternative methods. Most of their research groups work in isolation, due to the lack of funding for collaborative studies. Despite these problems, since the Third World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences, Brazilian researchers have strongly participated, not only by presenting posters and oral presentations, but also by being involved in the World Congress Committees. The Brazilian Center for the Validation of Alternative Methods (BraCVAM) must play an important role in the development and validation of alternative methods, through the active participation of the National Network of Alternative Methods (ReNaMA). In Brazil, Law 11,794/2008 regulates the use of animals in experimentation and education, and Law 9,605/1998 clearly states that use of the original animal test is not permitted, if an alternative method is available. Therefore, given the current legal framework, it is very important that all the Ministries involved with animal use, and the organisations responsible for funding researchers, strive to increase the financial support of those groups that are involved in the development and use of alternative methods in Brazil.

Influência do erro de micropipetas na dosagem espectrofotométrica do ensaio de endotoxina bacteriana (LAL cromogênico) aplicável a produtos sujeitos à Vigilância Sanitária / Effect of micropipette inaccuracy on performance of spectrophotometric assay for bacteria endotoxin dosage (chromogenic LAL) employed in products subjected to sanitary surveillance

Segundo a norma ISO 17.025, os instrumentos usados em experimento devem ser calibrados. No caso de micropipetas não há limite máximo de erro definido, sendo difícil estipular até que ponto uma micropipeta pode continuar a ser usada. O objetivo do trabalho foi o de determinar a porcentagem de erro no volume da micropipeta que não interfira nos resultados das diferentes etapas do ensaio toxicológico Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). Os percentuais de erro foram obtidos do levantamento de 44 certificados de micropipetas. Foram utilizados uma pipeta monocanal calibrada, de volume variável e kit LAL Cromogênio QCL-1000 (Lonza). A curva de endotoxina foi construída com as concentrações de 0,1; 0,25; 0,5 e 1 UE/mL. Os percentuais de erro de ±2%, ±4% e±10% foram comparados com a concentração de referência (0,5 UE/mL), e analisados pelo Student t-test (p<0,05). A análise estatística mostrou que, para a endotoxina padrão e para o substrato do LAL, erro acima de 2% interferenos resultados, cuja correção deve ser feita pelo ajuste do volume na pipeta. Nenhum erro testado causou interferência estatisticamente significativa na reação da cor do substrato. Micropipetas com erro superior a ±2% devem ser corrigidas.

Influência do erro de micropipetas na dosagem espectrofotométrica do ensaio de endotoxina bacteriana (LAL cromogênico) aplicável a produtos sujeitos à Vigilância Sanitária / Effect of micropipette inaccuracy on performance of spectrophotometric assay for bacteria endotoxin dosage (chromogenic LAL) employed in products subjected to sanitary surveillance

Segundo a norma ISO 17.025, os instrumentos usados em experimento devem ser calibrados. No caso de micropipetas não há limite máximo de erro definido, sendo difícil estipular até que ponto uma micropipeta pode continuar a ser usada. O objetivo do trabalho foi o de determinar a porcentagem de erro no volume da micropipeta que não interfira nos resultados das diferentes etapas do ensaio toxicológico Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). Os percentuais de erro foram obtidos do levantamento de 44 certificados de micropipetas. Foram utilizados uma pipeta monocanal calibrada, de volume variável e kit LAL Cromogênio QCL-1000 (Lonza). A curva de endotoxina foi construída com as concentrações de 0,1; 0,25; 0,5 e 1 UE/mL. Os percentuais de erro de ±2%, ±4% e±10% foram comparados com a concentração de referência (0,5 UE/mL), e analisados pelo Student t-test (p<0,05). A análise estatística mostrou que, para a endotoxina padrão e para o substrato do LAL, erro acima de 2% interferenos resultados, cuja correção deve ser feita pelo ajuste do volume na pipeta. Nenhum erro testado causou interferência estatisticamente significativa na reação da cor do substrato. Micropipetas com erro superior a ±2% devem ser corrigidas. (AU)

Caracterização imunofenotípica e avaliação quantitativa do infiltrado linfocítário junto às áreas de displasia epitelial da próstata de cães adultos sexualmente intactos / Immunophenotipic characterization and quantitative evaluation of lymphocitary infiltrate in areas with prostatic epithelial dysplasia of intact and adult dogs

O estudo da próstata canina tem se tornado comum em razão da grande incidência de doenças prostáticas nessa espécie e das similaridades com as alterações apresentadas pela glândula prostática humana. Frente à alta frequência de displasias epiteliais acompanhadas de infiltrado linfocitário intersticial e atrofia acinar na espécie canina, o presente estudo teve como objetivos a caracterização imunofenotípica e a avaliação quantitativa desse infiltrado, utilizando marcadores para identificação de linfócitos T (anti-CD3) e B (anti-CD79a). Foram catalogadas 42 lesões displásicas classificadas em discreta (48 por cento), moderada (38 por cento) e acentuada (14 por cento). O infiltrado linfocitário intersticial periacinar junto às áreas de epitélio prostático displásico constituiu-se predominantemente por linfócitos T (66 por cento) e houve interação entre o grau histológico da displasia e o marcador imunoistoquímico, com oscilação na quantidade de células T e B intersticiais em função do grau da displasia epitelial.

Canine prostatic studies have been common due to high incidence of prostatic diseases in these animals and similarities with alterations in human prostatic gland. Due the high frequency of dysplasia associated with interstitial lymphocitary infiltrate and acinar atrophy in canine prostate, the aims in this study were the immunophenotypic characterization and the quantitative evaluation of the same infiltrated using anti-CD3 and anti-CD79a to T and B lymphocytes, respectively. Forty two epithelial dysplasic lesions were graduated in discrete (48 percent), moderate (38 percent) and accentuated (14 percent). Lymphocitary periacinar infiltrate in dysplasic areas was T type and interaction between dysplasia grade and marker was observed, with oscillation of T and B cells in according with epithelial dysplasia grade.

Caracterização imunofenotípica e avaliação quantitativa do infiltrado linfocítário junto às áreas de displasia epitelial da próstata de cães adultos sexualmente intactos

Canine prostatic studies have been common due to high incidence of prostatic diseases in these animals and similarities with alterations in human prostatic gland. Due the high frequency of dysplasia associated with interstitial lymphocitary infiltrate and acinar atrophy in canine prostate, the aims in this study were the immunophenotypic characterization and the quantitative evaluation of the same infiltrated using anti-CD3 and anti-CD79a to T and B lymphocytes, respectively. Forty two epithelial dysplasic lesions were graduated in discrete (48%), moderate (38%) and accentuated (14%). Lymphocitary periacinar infiltrate in dysplasic areas was T type and interaction between dysplasia grade and marker was observed, with oscillation of T and B cells in according with epithelial dysplasia grade.

O estudo da próstata canina tem se tornado comum em razão da grande incidência de doenças prostáticas nessa espécie e das similaridades com as alterações apresentadas pela glândula prostática humana. Frente à alta frequência de displasias epiteliais acompanhadas de infiltrado linfocitário intersticial e atrofia acinar na espécie canina, o presente estudo teve como objetivos a caracterização imunofenotípica e a avaliação quantitativa desse infiltrado, utilizando marcadores para identificação de linfócitos T (anti-CD3) e B (anti-CD79a). Foram catalogadas 42 lesões displásicas classificadas em discreta (48%), moderada (38%) e acentuada (14%). O infiltrado linfocitário intersticial periacinar junto às áreas de epitélio prostático displásico constituiu-se predominantemente por linfócitos T (66%) e houve interação entre o grau histológico da displasia e o marcador imunoistoquímico, com oscilação na quantidade de células T e B intersticiais em função do grau da displasia epitelial.

Métodos alternativos ao uso de animais: uma visão atual / Métodos alternativos ao uso de animais: uma visão atual

The use of animals in experimentation and teaching has been severely criticized. Since the end of 1970 decade many researches have being developed in order to establish alternative methods for animal use, following the Russel and Burchs 3Rs principle. Although we can already count on some alternative methods, the complete animals replace is not possible in many scientific areas yet. In the field of education, at least in the initial University stage, it is possible to replace animals already. A new method needs to be formally validated. Brazil does not have an organism responsible for validating and indicating a method for regulatory acceptance. By this way, the creation of a Brazilian Centre for Validation of Alternative Methods is needed.

O uso de animais na experimentação e no ensino tem sido severamente criticado. Desde o final da década de 1970, muitas pesquisas têm sido desenvolvidas na busca de métodos alternativos ao uso de animais, sempre seguindo o princípio dos 3Rs, de Russel e Burch. Apesar de existirem alguns métodos alternativos, a substituição completa de animais ainda não é possível em diversas áreas da experimentação. No que tange a área do ensino, é possível usar alternativas, pelo menos, nos estágios básicos da educação superior. Um novo método necessita, obrigatoriamente, passar por um processo de validação. No Brasil, ainda não existe um órgão responsável por validar os métodos e indicar para a aceitação regulatória. Neste sentido, a criação de um Centro Brasileiro de Validação de Métodos Alternativos é necessária.

Caracterização imunofenotípica e avaliação quantitativa do infiltrado linfocítário junto às áreas de displasia epitelial da próstata de cães adultos sexualmente intactos

Canine prostatic studies have been common due to high incidence of prostatic diseases in these animals and similarities with alterations in human prostatic gland. Due the high frequency of dysplasia associated with interstitial lymphocitary infiltrate and acinar atrophy in canine prostate, the aims in this study were the immunophenotypic characterization and the quantitative evaluation of the same infiltrated using anti-CD3 and anti-CD79a to T and B lymphocytes, respectively. Forty two epithelial dysplasic lesions were graduated in discrete (48%), moderate (38%) and accentuated (14%). Lymphocitary periacinar infiltrate in dysplasic areas was T type and interaction between dysplasia grade and marker was observed, with oscillation of T and B cells in according with epithelial dysplasia grade.

O estudo da próstata canina tem se tornado comum em razão da grande incidência de doenças prostáticas nessa espécie e das similaridades com as alterações apresentadas pela glândula prostática humana. Frente à alta frequência de displasias epiteliais acompanhadas de infiltrado linfocitário intersticial e atrofia acinar na espécie canina, o presente estudo teve como objetivos a caracterização imunofenotípica e a avaliação quantitativa desse infiltrado, utilizando marcadores para identificação de linfócitos T (anti-CD3) e B (anti-CD79a). Foram catalogadas 42 lesões displásicas classificadas em discreta (48%), moderada (38%) e acentuada (14%). O infiltrado linfocitário intersticial periacinar junto às áreas de epitélio prostático displásico constituiu-se predominantemente por linfócitos T (66%) e houve interação entre o grau histológico da displasia e o marcador imunoistoquímico, com oscilação na quantidade de células T e B intersticiais em função do grau da displasia epitelial.

Métodos alternativos ao uso de animais: uma visão atual / Métodos alternativos ao uso de animais: uma visão atual

The use of animals in experimentation and teaching has been severely criticized. Since the end of 1970 decade many researches have being developed in order to establish alternative methods for animal use, following the Russel and Burchs 3Rs principle. Although we can already count on some alternative methods, the complete animals replace is not possible in many scientific areas yet. In the field of education, at least in the initial University stage, it is possible to replace animals already. A new method needs to be formally validated. Brazil does not have an organism responsible for validating and indicating a method for regulatory acceptance. By this way, the creation of a Brazilian Centre for Validation of Alternative Methods is needed.

O uso de animais na experimentação e no ensino tem sido severamente criticado. Desde o final da década de 1970, muitas pesquisas têm sido desenvolvidas na busca de métodos alternativos ao uso de animais, sempre seguindo o princípio dos 3Rs, de Russel e Burch. Apesar de existirem alguns métodos alternativos, a substituição completa de animais ainda não é possível em diversas áreas da experimentação. No que tange a área do ensino, é possível usar alternativas, pelo menos, nos estágios básicos da educação superior. Um novo método necessita, obrigatoriamente, passar por um processo de validação. No Brasil, ainda não existe um órgão responsável por validar os métodos e indicar para a aceitação regulatória. Neste sentido, a criação de um Centro Brasileiro de Validação de Métodos Alternativos é necessária.

Carcinoma de células transicionais vesical em uma cadela são bernardo relato de caso

No presente artigo, descreve-se o caso de uma cadela São Bernardo de sete anos de idade e histórico de disúria progressiva e estrangúria. Inicialmente estabeleceu-se o diagnóstico de infecção do trato urinário baixo (cistite), sendo instituída a terapêutica adequada. Frente ao episódio de recidiva do quadro clínico após 45 dias, realizaram-se exames laboratoriais e de imagens que reiteraram o diagnóstico de processo inflamatório crônico, apesar de não descartada a possibilidade de neoplasia vesical. O animal foi novamente tratado, não apresentou melhora e foi submetido à laparotomia exploratória e exame citológico. Face aos achados macro e microscópicos, assim como ao estado geral da cadela, e ao prognóstico reservado, procedeu-se a eutanásia. O exame histopatológico reafirmou a lesão vesical de origem neoplásica classificada como carcinoma de células transicionais de bexiga urinária.

CARCINOMA DE CÉLULAS TRANSICIONAIS VESICAL EM UMA CADELA SÃO BERNARDO RELATO DE CASO

No presente artigo, descreve-se o caso de uma cadela São Bernardo de sete anos de idade e histórico de disúria progressiva e estrangúria. Inicialmente estabeleceu-se o diagnóstico de infecção do trato urinário baixo (cistite), sendo instituída a terapêutica adequada. Frente ao episódio de recidiva do quadro clínico após 45 dias, realizaram-se exames laboratoriais e de imagens que reiteraram o diagnóstico de processo inflamatório crônico, apesar de não descartada a possibilidade de neoplasia vesical. O animal foi novamente tratado, não apresentou melhora e foi submetido à laparotomia exploratória e exame citológico. Face aos achados macro e microscópicos, assim como ao estado geral da cadela, e ao prognóstico reservado, procedeu-se a eutanásia. O exame histopatológico reafirmou a lesão vesical de origem neoplásica classificada como carcinoma de células transicionais de bexiga urinária.

Quimiodectoma como causa de morte súbita em cão relato de caso

Neoplasias primárias do coração são raras em todas as espécies domésticas, no entanto, tumores da base do coração, quimiodectomas ou paragangliomas ocorrem primariamente em cães. Relata-se o caso de um canino, boxer, macho, 14 anos de idade, com histórico de tosse crônica. Os exames clínico, radiográfico e eletrocardiográfico definiram o diagnóstico presuntivo de cardiomiopatia dilatada, sendo instituída terapia indicada. Houve melhora progressiva, contudo, após sete meses o animal veio a óbito e foi submetido a exame necroscópico. Amostras da neoformação observada junto a base cardíaca foram colhidas e encaminhadas à avaliação histopatológica, através da qual instituiu-se o diagnóstico de neoplasia do arco aórtico ou quimiodectoma. A baixa incidência de tumores originários dos tecidos quimiorreceptores denota a importância do presente relato, bem como adiciona dados clínicos, epidemiológicos e anatomopatológicos à literatura veterinária.

QUIMIODECTOMA COMO CAUSA DE MORTE SÚBITA EM CÃO RELATO DE CASO

Neoplasias primárias do coração são raras em todas as espécies domésticas, no entanto, tumores da base do coração, quimiodectomas ou paragangliomas ocorrem primariamente em cães. Relata-se o caso de um canino, boxer, macho, 14 anos de idade, com histórico de tosse crônica. Os exames clínico, radiográfico e eletrocardiográfico definiram o diagnóstico presuntivo de cardiomiopatia dilatada, sendo instituída terapia indicada. Houve melhora progressiva, contudo, após sete meses o animal veio a óbito e foi submetido a exame necroscópico. Amostras da neoformação observada junto a base cardíaca foram colhidas e encaminhadas à avaliação histopatológica, através da qual instituiu-se o diagnóstico de neoplasia do arco aórtico ou quimiodectoma. A baixa incidência de tumores originários dos tecidos quimiorreceptores denota a importância do presente relato, bem como adiciona dados clínicos, epidemiológicos e anatomopatológicos à literatura veterinária.