Development and evaluation of a novel high-throughput image-based fluorescent neutralization test for detection of Zika virus infection.

Zika virus (ZIKV) is an emerging arbovirus belonging to the genus flavivirus that comprises other important public health viruses, such as dengue (DENV) and yellow fever (YFV). In general, ZIKV infection is a self-limiting disease, however cases of Guillain-Barré syndrome and congenital brain abnormalities in newborn infants have been reported. Diagnosing ZIKV infection remains a challenge, as viral RNA detection is only applicable until a few days after the onset of symptoms. After that, serological tests must be applied, and, as expected, high cross-reactivity between ZIKV and other flavivirus serology is observed. Plaque reduction neutralization test (PRNT) is indicated to confirm positive samples for being more specific, however it is laborious intensive and time consuming, representing a major bottleneck for patient diagnosis. To overcome this limitation, we developed a high-throughput image-based fluorescent neutralization test for ZIKV infection by serological detection. Using 226 human specimens, we showed that the new test presented higher throughput than traditional PRNT, maintaining the correlation between results. Furthermore, when tested with dengue virus samples, it showed 50.53% less cross reactivity than MAC-ELISA. This fluorescent neutralization test could be used for clinical diagnosis confirmation of ZIKV infection, as well as for vaccine clinical trials and seroprevalence studies.

Incidencia de infecciones sintomáticas y asintomáticas por virus dengue en Maracay, Venezuela: 2006-2007 / Incidence of symptomatic and asymptomatic dengue virus infections in Maracay, Venezuela: 2006-2007

Con el objetivo de estimar las tasas de incidencia de infecciones sintomáticas y asintomáticas por virus dengue (DENV) durante un año (octubre 2006-septiembre 2007) en cuatro barrios de Maracay (Venezuela) se realizó un estudio prospectivo consistente de visitas domiciliarias, tres veces por semana, para detectar casos de dengue y de encuestas serológicas semestrales para determinar infecciones asintomáticas probables por DENV. Los sujetos de estudio pertenecían a una cohorte de 2663 personas ≥5 años de edad. El diagnóstico confirmatorio de DENV se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR). Las pruebas serológicas se realizaron mediante el ensayo inmunoenzimático de captura de IgM anti-dengue (MAC-ELISA). Los resultados determinaron tasas de incidencia de 5,7 y 18,6 por 100 000 personas/día (p/d) para las infecciones sintomáticas y asintomáticas, respectivamente. La tasa de incidencia de las infecciones sintomáticas observada en las personas <15 años de edad fue significativamente mayor que la encontrada en los sujetos ≥15 años (15,8 versus 2,9 por 100 000 p/d). Por otro lado, las tasas de incidencia de las infecciones asintomáticas en ambos grupos de edad fueron similares (17,3 y 18,9 por 100 000 p/d, respectivamente). Se detectaron los cuatro serotipos del DENV en tres de los barrios estudiados. Se observó que la edad y la hiperendemicidad fueron probablemente los factores que más contribuyeron a la incidencia del dengue en los cuatro barrios investigados. Seguramente, las infecciones asintomáticas contribuyeron a incrementar la transmisión viral en el área de estudio.

The incidence rates of symptomatic and asymptomatic dengue virus (DENV) infections in four "barrios" of Maracay, Venezuela, during one-year (October 2006-September 2007) were estimated. A prospective study consisting of house visits three-times a week to detect dengue cases, and semiannual serological surveys to determine probable asymptomatic dengue virus (DENV) infections was conducted. The study subjects belonged to a cohort of 2,663 people ≥5 year-old. Confirmatory diagnosis of DENV infections was carried out by reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Serological surveys were performed by anti-dengue IgM-capture immunoassay (MAC-ELISA). The results showed that the incidence rates for symptomatic and asymptomatic infections were determined to be 5.7 and 18.6 per 100,000 persons/day (p/d), respectively. The incidence rate of symptomatic infections was significantly higher in persons <15 year-old than that found in subjects ≥15 years (15.8 versus 2.9 per 100,000 p/d). On the other hand, the incidence rates of asymptomatic infections in both age groups were similar (17.3 and 18.9 per 100,000 p/d, respectively). All four DENV serotypes were detected in three of the four "barrios" studied. Finally, age and hyperendemicity were probably the contributing factors to the incidence of dengue in the four "barrios" investigated. Surely, the asymptomatic infections contributed to increase the viral transmission in the study area.

[Laboratory diagnosis of dengue virus infections in Aragua State, Venezuela: October 1997-December 1998]. / Diagnóstico de laboratorio de infecciones por el virus dengue en el estado Aragua; Venezuela: Octubre 1997-Diciembre 1998.

The efficacy of a proactive dengue surveillance system to predict epidemics depends on the laboratory diagnostic capacity for an early detection of virus circulation. This study shows the results of the dengue virologic and serologic surveillance accomplished in Aragua State (Venezuela) from October 1997 to December 1998. Five hundred and forty seven sera from suspected dengue patients were tested using the techniques of Virus Isolation and Immunofluorescence Serotyping (VIIS), Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), Anti-dengue IgM Capture Enzyme Immunoassay (MAC-ELISA) and Haemagglutination Inhibition test (HI). Of the tested sera, 97.4% resulted positive to at least one technique; of these, 60.4% were classified as confirmed cases (virologically positives) and 39.6% as probable cases (virologically negatives/serologically positives). Though the majority of positive cases occurred during the 1997 and 1998 epidemic periods, the gradual increase of the seropositive rates between both periods suggested the incoming 1998 outbreak. Den-1 (51.2%), Den-2 (37.9%) and Den-4 (10.6%) infected patients were detected as well as one dual infection of Den-2 and Den-4 (0.3%). Dengue hyperendemicity (co-circulation of Den-1, Den-2 and Den-4) in Aragua State was confirmed together with the detection of few cases (6.5%) of Dengue Hemorrhagic Fever/Dengue Shock Syndrome cases (HF/DSS); 38.1% of these cases occurred in patients with secondary infections. The high percentage (85.7%) of DHF/DSS cases infected by Den-2 virus supports the reported virulence of this serotype.

Diagnóstico de laboratorio de infecciones por el virus dengue en el estado Aragua Venezuela: octubre 1997-diciembre 1998 / Laboratory diagnosis of dengue virus infections in Aragua state Venezuela: october 1997-december 1998

La eficacia de un sistema de vigilancia epidemiológica proactivo para predecir epidemias de dengue de la capacidad del laboratorio para detectar tempranamente la circulación viral. Este estudio muestra los resultados de la vigilancia virológica del dengue, realizada en el estado Aragua (Venezuela) desde octubre 1997 hasta diciembre 1998. Se evluaron 547 sueros de pacientes sospechosos de dengue mediante las técnicas de aislamiento viral y serotipicación por inmunofluorescencia (AVSI), reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR), inmunoensayo enzimático de captura de IgM anti-dengue (MAC-ELISA) e inhibición de la hemaglutinación (IHA). De los sueros examinados, 97,4 por ciento resultaron positivos a por lo menos una técnica; de estos, 60,4 por ciento fueron clasificados como casos confirmados (virológicamente positivos) y 39,6 por ciento como casos probables (virológicamente negativos, serológicamente positivos). Aunque la gran mayoría de los casos positivos ocurrieron en los períodos epidémicos de 1997 y 1998, el incremento paulatino de las tasas de serotipos entre ambos períodos sugería la llegada de la epidemia de 1998. Se detectaron pacientes infectados con virus Den-1 (51,2 por ciento), Den-2 (37,9 por ciento), Den-4 (10,6 por ciento), y una infección mixta por Den-2 y Den-4 (0,3 por ciento). Se confirma la hiperdemicidad del dengue (co-circulación de Den-1, Den-2 y Den-4) en el estado Aragua, conjuntamente con la detección de pocos pasos (6,5 por ciento) de fiebre hemorrágica de dengue/síndrome de choque por dengue (FHD/SCD); 38,1 por ciento de estos casos ocurrieron en pacientes con infecciones secundarias. El alto porcentaje (85,7 por ciento) de casos de FHD/SCD infectados con el virus Den-2 apoya la reportada virulencia de este serotipo

Estudio de algunas propiedades biológicas de 3 cepas de dengue 2 con diferencias en sus secuencias nucleotídicas / Study of various biological properties of 3 strains of dengue 2 with differences in their nucleotide sequences

Some biological properties of Dengue-2 strains such as A-15 (isolated in Cuba in 1981); Jamaica (isolated in Jamaica in 1981) and New Guinea "C" (NG"C") standard strain differing in their nucleotide sequences were studied. The results showed that the cytopathic effect in C6/36 HT cell line occurred earlier in A-15 strain and that fluorescence was first detected in Jamaica and A-15 strains. This seems to indicate that rapid detection of strains does not have any relation to neither their history of passage nor the original isolation system. A-15 and NG"C" strains exhibited an heterogeneous pattern formed by big and small plaques but average size of plaques in NG"C" was lower whereas Jamaica showed only small plaques. The most neurovirulent strain in mice was NG"G" followed by A-15 whereas Jamaica was not neurovirulent at all. These results indicate that A-15 has a different biological behaviour which is probably due to intrinsic differences. It should be taken into account that 7 amino acid changes were found in the envelope protein which may have affected the expression of some biological properties.

Estudio de algunas propiedades biológicas de 3 cepas de dengue 2 con diferencias en sus secuencias nucleotídicas / I study of some biological properties of 3 stumps of fastidiousness 2 with differences in their sequences nucleotídicas

Se estudiaron algunas propiedades biológicas de las cepas de dengue 2: A-15 (aislada en Cuba en 1981), Jamaica (aislada en Jamaica en 1981) y la cepa estándar Nueva Guinea C (NGC) que presentan diferencias en sus secuencias nucleotídicas. Los resultados mostraron que la aparición del efecto citopático en la línea celular C6/36 HT fue más temprano para la cepa A-15 y la fluorescencia se detectó primero en las cepas Jamaica y A-15, esto parece indicar que la rapidez de la detección de las cepas no guarda relación con su historia de pases ni con el sistema de aislamiento original. A-15 y NG C mostraron un patrón heterogéneo de placas grandes y pequeñas; la talla promedio fue menor en la segunda. Jamaica sólo presentó placas pequeñas. La capa más neurovirulenta en ratones fue la NG C seguida por A-15, mientras que Jamaica no fue neurovirulenta. Estos resultados sugieren que A-15 tiene un comportamiento biológico distinto, probablemente por causa de diferencias intrínsecas. Se debe considerar que se hallaron 7 cambios aminoacídicos en la proteína de envoltura que pudieran haber afectado la expresión de algunas propiedades biológicas(AU)