Avaliação in vitro da ação do extrato bruto de Croton cajucara e de terpenos isolados sobre Trypanosoma cruzi / In vitro evaluation of the action of the crude extract of Croton cajucara and terpenes isolated on Trypanosoma cruzi

Cróton cajucara é uma planta encontrada no Pará, região Amazônica, onde é muito conhecida por suas propriedades medicinais. No presente trabalho, o efeito do extrato metanólico da casca do caule de C. cajucara (ECC) e dos terpenos isolados trans-desidrocrotonina (DCTN) e ácido acetilaleuritólico (AAA) foi investigado sobre o clone DM28c e as cepas Y, GLT, 291 e C45 de T. cruzi. ECC e AAA apresentaram inibição dose-dependente sobre a proliferação de epimastigotas das quatro subpopulações, sendo a cepa GLT 291 a mais suscetível após 72h de tratamento. Nos ensaios com tripomastigotas de cultura, ECC foi mais ativo que os compostos isolados, apresentando IC50 na faixa de 10 a 50 miu/mL. Nestes ensaios, ECC, AAA e benznidazol apresentaram efeito tripanocida superior sobre as cepas mais recentemente isoladas de animais silvestres (GLT 291 e C45). Em relação ao DCNT, a maior atividade foi observada sobre o clone DM28c com valor de IC50 igual a 109,5 miu/mL. A possível toxicidade de ECC, AAA e DCTN foi avaliada através do teste MTT sobre macrófagos peritoneais de camundongos. Em concentrações iguais a 100 miu/mL para ECC e DCTN, e 50 miu/mL para AAA não foi observada toxicidade. Nos ensaios sobre amastigotas intracelulares das quatro subpopulações, AAA e ECC reduziram o percentual de infecção e o índice endocítico após 96h de tratamento em concentrações não tóxicas para os macrófagos. DCNT foi somente avaliado sobre o clone DM28c e foi ativo na faixa de 17,5 a 88,2 miu/mL. A atividade sobre a via da tripanotiona redutase (TR) de T.cruzi foi avaliada. ECC inibiu a via da TR em epimastigotas e tripomastigotas de todas as subpopulações, superando a atividade do AAA. Em tripomastigotas, AAA inibiu a via da TR de todas as subpopulações, ao passo que em epimastigotas, tal atividade foi observada somente em relação às cepas Y, GLT, 291 e C45. A ausência de atividade do AAA sobre a via da TR em epimastigotas do DM28c sugere heterogeneidade do perfil bioquímico entre este clone e as três cepas estudadas. A análise ultraestrututal de epimastigotas e tripomastigotas da cepa GLT 291 após 14 e 24h de tratamento com ECC e AAA foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Ambos os compostos induziram alterações na membrana plasmática, como projeções e empacotamento de membrana, além de blebs no corpo e flagelo. O tratamento de epimastigotas com AAA induziu ainda alterações na mitocôndria, com aumento do volume da organela e ausência de cristas, e nos reservossomos, com aumento do volume de inclusões lipídicas. O tratamento de epimastigotas e tripomastigotas com ECC não diferiu em relação aos tempos de tratamento e resultou em intensa desorganização citoplasmática. Em epimastigotas foi possível evidenciar desorganização do aparelho de Golgi, ao passo que em tripomastigotas, tal como observado após tratamento com AAA, verificou-se dilatação da bolsa flagelar. Os resultados obtidos com AAA sobre amastigotas intracelulares, e ECC sobre todas as formas evolutivas de T. cruzi estimularam não apenas a continuidade deste estudo, como também, a investigação de outros componentes presentes no extrato de C. cajucara.

Effects of homeopathy in mice experimentally infected with Trypanosoma cruzi.

AIM: The aim of this study was to evaluate the action of homeopathic treatment on mice experimentally infected with Trypanosoma cruzi. METHODS: Eighty adult male C57BL/6 inbred mice were randomly allocated to five groups treated with biotherapy (nosode) of T. cruzi 12dH (12x) pre- and post-infection; Phosphorus 12dH post-infection; infected control treated with control solution and uninfected control. The biotherapy was prepared by the Costa method from the blood of mice experimentally infected with the Y strain of T. cruzi. Phosphorus was used because of its clinical and reportorial similarity to Chagas disease. T. cruzi (10(4)) sanguineous forms were inoculated intraperitoneally per animal. Parasitaemia was monitored, leukocyte and serological responses were evaluated at 0, 7, 14 and 42 days after infection. The prepatent and patent periods of parasitaemia, maximum of parasitaemia, day of maximum parasitaemia and mortality rates were compared between groups. RESULTS: A significantly shorter period of patent parasitaemia was observed in the group treated with the biotherapy before infection (p<0.05) than in the other groups. This group also had the lowest parasitaemias values at 9, 13, 15 (p<0.05), 17 (p<0.05), 22, 24 and 28 days, a lower rate of mortality and a significant increase of lymphocytes compared to the infected control group. The Phosphorus group had the longest period of patent parasitaemia, higher maximum parasitaemia, and a significant reduction of lymphocyte numbers, but no mortality. The infected control group had the highest mortality rate (not statistically significant), and the highest IgG titres at 42 days post-infection (p<0.05). CONCLUSIONS: The results suggest that pre-treatment with biotherapy modulates host immune response to T. cruzi, mainly during the acute phase of the infection. Phosphorus shows an action on the pathogenicity by T. cruzi infection. Homeopathic treatment of T. cruzi infection should be further investigated.