A bioassay for brassinosteroid activity based on the in vitro fluorimetric detection of nitric oxide production.

Recent studies have shown that low concentrations of brassinolide induce a rapid generation of nitric oxide in mesophyll cells of maize leaves, which can be easily detected by fluorimetric methods. In this work we describe a series of natural and synthetic brassinosteroids that are able to trigger in vitro NO production in tomato cells that exhibits dose-response behavior. We propose that this effect can be used to develop a new rapid and very sensitive bioassay for brassinosteroid activity that offers several advantages when compared to the current methodologies.

Ultraviolet-B-induced stomatal closure in Arabidopsis is regulated by the UV RESISTANCE LOCUS8 photoreceptor in a nitric oxide-dependent mechanism.

UV RESISTANCE LOCUS8 (UVR8) signaling involves CONSTITUTIVELY PHOTOMORPHOGENIC1, the ELONGATED HYPOCOTYL5 (HY5) transcription factor, and the closely related HY5 HOMOLOG. Some UV-B responses mediated by UVR8 are also regulated by nitric oxide (NO), a bioactive molecule that orchestrates a wide range of processes in plants. In this study, we investigated the participation of the UVR8 pathway and its interaction with NO in UV-B-induced stomatal movements in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana). Stomata in abaxial epidermal strips of Arabidopsis ecotype Landsberg erecta closed in response to increasing UV-B fluence rates, with maximal closure after 3-h exposure to 5.46 µmol m⁻² s⁻¹ UV-B. Both hydrogen peroxide (H2O2) and NO increased in response to UV-B, and stomatal closure was maintained by NO up to 24 h after the beginning of exposure. Stomata of plants expressing bacterial NO dioxygenase, which prevents NO accumulation, did not close in response to UV-B, although H2O2 still increased. When the uvr8-1 null mutant was exposed to UV-B, stomata remained open, irrespective of the fluence rate. Neither NO nor H2O2 increased in stomata of the uvr8-1 mutant. However, the NO donor S-nitrosoglutathione induced closure of uvr8-1 stomata to the same extent as in the wild type. Experiments with mutants in UVR8 signaling components implicated CONSTITUTIVELY PHOTOMORPHOGENIC1, HY5, and HY5 HOMOLOG in UV-B-induced stomatal closure. This research provides evidence that the UVR8 pathway regulates stomatal closure by a mechanism involving both H2O2 and NO generation in response to UV-B exposure.

Proteolytic activities in kidney and liver during refeeding of protein depleted mice

Los contenidos renal y hepático de proteinas disminuyen significativamente en ratones sometidos a una dieta aproteica durante cinco días. La realimentación con una dieta completa induce una rápida recuperación de la masa proteica perdida por ambos tejidos. Esta recuperación es consecuencia de una marcada inhibición de la proteólisis intracelular. El objetivo de este trabajo fue estudiar la contribución de los sistemas proteolíticos lisosomal o ácido y neutro al proceso de recuperación aludido. Para ello se evaluaron las actividades proteolíticas a pH 5.0 y pH 7.4 presentes en los tejidos homogeneizados. La actividad ácida disminuyó en ambos tejidos como consecuencia de la desnutrición proteica y se recuperó luego de 12 horas de realimentación. Sin embargo, las actividades neutras de ambos organos disminuyeron debido a la desnutrición y permanecieron en niveles bajos luego de 12 horas de realimentación. Se estudió, además, el efecto de las dietas sobre la estabilidad osmótica de los lisosomas hepáticos y renales. Esta aumentó durante la realimentación, indicando que se produce una disminución en la actividad autofágica de dichos tejidos. Estos hallazgos indican que tanto la baja actividad del sistema lisosomal vacuolar como la baja actividad del sistema proteolítico neutro serían responsables de la inhibición de la proteólisis in vivo exhibida por los riñones e higados durante la recuperación de su masa proteica

Proteolytic activities in kidney and liver during refeeding of protein depleted mice

Los contenidos renal y hepático de proteinas disminuyen significativamente en ratones sometidos a una dieta aproteica durante cinco días. La realimentación con una dieta completa induce una rápida recuperación de la masa proteica perdida por ambos tejidos. Esta recuperación es consecuencia de una marcada inhibición de la proteólisis intracelular. El objetivo de este trabajo fue estudiar la contribución de los sistemas proteolíticos lisosomal o ácido y neutro al proceso de recuperación aludido. Para ello se evaluaron las actividades proteolíticas a pH 5.0 y pH 7.4 presentes en los tejidos homogeneizados. La actividad ácida disminuyó en ambos tejidos como consecuencia de la desnutrición proteica y se recuperó luego de 12 horas de realimentación. Sin embargo, las actividades neutras de ambos organos disminuyeron debido a la desnutrición y permanecieron en niveles bajos luego de 12 horas de realimentación. Se estudió, además, el efecto de las dietas sobre la estabilidad osmótica de los lisosomas hepáticos y renales. Esta aumentó durante la realimentación, indicando que se produce una disminución en la actividad autofágica de dichos tejidos. Estos hallazgos indican que tanto la baja actividad del sistema lisosomal vacuolar como la baja actividad del sistema proteolítico neutro serían responsables de la inhibición de la proteólisis in vivo exhibida por los riñones e higados durante la recuperación de su masa proteica (AU)