Immunohistochemistry and polymerase chain reaction on paraffin-embedded material improve the diagnosis of cutaneous leishmaniasis in the Amazon region.

BACKGROUND: Recently, there has been an increase in the incidence of cutaneous leishmaniasis (CL), which represents an important health problem. This increase may be related to the epidemiologic expansion of the infective agent and the increase in tourism in tropical areas. The difficulty in clinical diagnosis, mainly in areas in which CL is not the first consideration of local physicians, has intensified efforts to describe diagnostic tests, which should be specific, sensitive, and practical. Amongst the new tests described are those including nucleic acid amplification (polymerase chain reaction, PCR) and immunohistochemistry (IHC). METHODS: In this study, we evaluated the sensitivity of a PCR based on small subunit (SSU) ribosomal DNA, in comparison with IHC using Leishmania spp. antibodies, in biopsies embedded in paraffin. RESULT: The results indicated a total sensitivity of 96% (90.9% with PCR and 68.8% with IHC), showing the possibility of using paraffin-embedded biopsies to diagnose CL. CONCLUSION: We propose the use of the two tests together as a routine protocol for diagnosis. This would require the provision of local medical services to perform molecular biology techniques and adequate Leishmania antibodies.

Rendimiento diagnostico de la inmunodeficiencia y el ensayo inmunoenzimatico en sueros de pacientes con leishmaniasis del norte y del nordeste de Brasil / Diagnostic performance índices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leishmaniasis sera from northern and northeastern Brazil

Se examino un total de 341 muestras de suero para detectar anticuerpos IgA, IgG e IgM anti-Leishmania mediante pruebas de inmunofluorescencia (IF) y ensayos inmunoenzimaticos (ELISA). En conjunto, 292 de los sueros pertenecian a pacientes con diagnosticos clinicos y parasitologicos de leishmaniasis cutanea (resultados positivos en la impronta de lesiones o en la prueba cutanea de Montenegro) y 49, a controles de la misma poblacion. Los índices de rendimiento diagnostico de los ELISA-IgG e IgM fueron de utilidad diagnostica y el valor predictivo positivo del ELISA-IgG fue de 94,6. . La especificidad de la prueba de IF-IgA fue notablemente alta (100. ), pero su sensibilidad fue muy baja

Rendimiento diagnóstico de la inmunodeficiencia y el ensayo inmunoenzimático en sueros de pacientes con leishmaniasis del norte y del nordeste de Brasil / Diagnostic performance indices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leshmaniasis sera from northern and northeastern Brazil

Se examinó un total de 341 muestras de suero para detectar anticuerpos IgA, IgG e IgM anti-Leishmania mediante pruebas de inmunofluorescencia (IF) y ensayos inmunoenzimáticos (ELISA). En conjunto, 292 de los sueros pertenecían a pacientes con diagnósticos clínicos y parasitológicos de leishmaniasis cutánea (resultados positivos en la impronta de lesiones o en la prueba cutánea de Montenegro) y 49, a controles de la misma población. Los índices de rendimiento diagnóstico de los ELISA-IgG e IgM fueron de utilidad diagnóstica y el valor predictivo positivo del ELISA-IgG fue de 94,6. La especificidad de la prueba de IF-IgA fue notablemente alta (100), pero su sensibilidad fue muy baja.

Rendimiento diagnóstico de la inmunodeficiencia y el ensayo inmunoenzimático en sueros de pacientes con leishmaniasis del norte y del nordeste de Brasil / Diagnostic performance indices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leshmaniasis sera from northern and northeastern Brazil

Se examinó un total de 341 muestras de suero para detectar anticuerpos IgA, IgG e IgM anti-Leishmania mediante pruebas de inmunofluorescencia (IF) y ensayos inmunoenzimáticos (ELISA). En conjunto, 292 de los sueros pertenecían a pacientes con diagnósticos clínicos y parasitológicos de leishmaniasis cutánea (resultados positivos en la impronta de lesiones o en la prueba cutánea de Montenegro) y 49, a controles de la misma población. Los índices de rendimiento diagnóstico de los ELISA-IgG e IgM fueron de utilidad diagnóstica y el valor predictivo positivo del ELISA-IgG fue de 94,6

. La especificidad de la prueba de IF-IgA fue notablemente alta (100

), pero su sensibilidad fue muy baja

Comparison on the performance of Leishmania major-like and Leishmania braziliensis braziliensis as antigen for new world leishmaniasis IgG-immunofluorescence test

O desempenho de um antigeno de promastigotas de L. major-like para o diagnostico sorologico de leishmaniose mucocutanea pelo teste de imunofluorescencia-IgG foi comparado com o desempenho de um antigeno de L. braziliensis braziliensis. Cada antigeno foi usado para testar 224 soros de etiologias como leishmaniose mucocutanea, micoses profundas, toxoplasmose, malaria, doenca de Chagas, leishmaniose visceral, fator anti-nucleo, esquistossomose mansonica, fator reumatoide e controles normais. A concordancia entre as respostas de cada antigeno foi grande: 77,2 por cento dos soros de leishmaniose mostraram resultado positivo para ambos os antigenos ou negativo, assim como 91,1 por cento dos soros controle negativos. Reacoes cruzadas ficaram restritas a doenca de Chagas, leishmaniose visceral, fator anti-nucleo e paracoccidioidomicose. A resposta quantitativa dos soros de leishmaniose e doenca de Chagas foi avaliada pelo metodo de regressao linear; embora a interseccao com o eixo y e o "slope" fossem diferentes para cada antigeno nenhum deles se mostrou melhor na evidenciacao de anticorpos anti-Leishmania. O antigeno de L. major-like mostrou-se melhor que o de L.b. braziliensis na evidenciacao de anticorpos em soros de doenca de Chagas.

Performance indexes of a dot-enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) and an enzyme-linked immunosorbent assay (IgG-ELISA) for field surveys of world leishmaniasis

Indices de desempenho diagnostico de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e eficiencia foram determinados nas reacoes de dot-ELISA e IgG-ELISA em 340 soros de leishmaniose mucocutanea. A sensibilidade do dot-ELISA foi significativamente mais baixa que a da IgG-ELISA e os dois testes tiveram indices de especificidade e de valor de predicao positivo da mesma magnitude. Setenta e oito soros tinham resultado negativo a reacao de dot-ELISA e resultado positivo ao IgG-ELISA. Quando os soros foram examinados de acordo com diferentes criterios de analise, quanto a esta discrepancia a estatistica kappa nao corroborou esta hipotese indicando que os dois testes concordavam substancialmente. Os resultados apresentados indicam que os indices de desempenho diagnostico obtidos em trabalho de campo onde haja boa caracterizacao das variaveis podem ser extrapolados a outros estudos populacionais desde que a doenca se mostre de alta prevalencia (devido a um vies de selecao ou nao) e nestas condicoes se pode esperar que os indices facam o diagnostico de doenca entre os resultados positivos ao teste.

Diagnostic performance indices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leishmaniasis sera from northern and north-easter Brazil

A total of 341 sera were screened for anti-Leishmania IgA, IgG, and IgM antibodies by immunofluorescent (IF) tests and enzyme immunoassay (ELISA). Altogether, 292 of the sera originated from patients with clinically as well as parasitologically diagnosed (positive lesion imprint or the Montenegro skin test) cutaneous leishmaniasis; 49 of the sera were from controls from the same base population

In terms of diagnostic performance, the ELISASs for IgG and IgM yielded indices of diagnostic utility, and the positive predictive value for the IgG-ELISA was 94.6 per cent. A remarkably high specificity (100 per cent) was obtained with the IgA-IF test, but its sensitivity was very low(AU)

Evaluation of serological diagnostic indices for mucocutaneous leishmaniasis: immunofluorescence tests and enzyme-linked immunoassays for IgG, IgM and IgA antibodies

The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and efficiency of immunofluorescence (IF) and enzyme-linked immunoassays (ELISA) for IgG, IgM and IgA antibodies were assessed on sera from mucocutaneous lieshmaniasis patients and controls. The sensitivity of the IgG-ELISA test was 93.3 per cent with 95 per cent confidence interval higher than what could be due to a random test not associated with the disease. The specificity of all tests, except the IgM-ELISA, gave indices that could not have been due to chance. The IgG-ELISA and IgG-IF had the highest positive predictive value and the kappa statistic showed that the strength of agreement between the disease and the test was strongest for IgG-ELISA. The IgG-ELISA had a negative predictive value with 95 per cent confidence limits that were not due to chance alone. Efficiency was highest for IgG-ELISA and IgG-IF. These results were obtained using sera from patients with severe or long-standing disease and from controls in whom the disease was ruled out by a negative Montenegro skin test. In field surveys where the differences between cases and controls are less easy to define the diagnostic indices of these tests may vary with the disease prevalence(AU)

Peroxidase antibody test for mucocutaneous leishmaniasis serology: performance index and comparison with a fluorescent antibody test

Os parâmetros sorológicos do teste de imunoperoxidase foram comparados aos do teste de imunofluorescência. O teste de imunoperoxidase mostrou ter sensibilidade e valor de prediçäo negativo estatisticamente mais alto que aqueles do teste de imunofluorescência porém, os limites de confiança 95% da especificidade e do valor de prediçäo positivo estavam contidos naqueles encontrados para o teste de imunofluorescência. Tais diferenças se mantiveram quando os cálculos dos índices foram feitos com e sem a inclusäo de soros de doença de Chagas ou leishmaniose visceral. A análise estatística mostrou que os dois testes tinham um grau substancial de concordância mas o teste de imunofluorescência tinha um índice de especificidade e o valor de prediçäo positivo igual a 100,0% quando os soros de Chagas e leishmaniose visceral foram excluídos. Neste caso, o teste positivo se torna o teste diagnóstico da doença em face da näo existência de falso-positivos. O conjugado de peroxidase poderá se constituir em fonte de problemas técnicos na sorologia se a relaçäo enzima/proteína se afastar das quantidades ótimas de marcaçäo

Growth curves of Leishmania brasiliensis brasiliensis promastigotes and surface antigen expression before and after adaptation to schneider's Drosophila medium as assessed by anti-leishmania human sera

Promastigotas de Leismania braziliensis (MHom/BR/75/M2903) foram cultivadas em meio de Schneider de cultura de drosófilas. em um tipo de experiência as formas promastigotas já haviam sido previamente adaptadas ao meio por passagens consecutivas enquanto que no segundo as promastigotas foram cultivadas em meio bifásico e depois transferidas para o meio líquido. O crescimento foi mais abundante nas células já adaptadas ao meio de cultura; células degeneradas e mortas em pequenos números, estavam presentes desde o dia 5 para promastigotas adaptadas ao meio líqüido e desde o dia 3 para células recentemente adaptadas. A síntese de antígenos de superfície diferiu de acordo com o modo como as células eram cultivadas, como verificado pelo título de 5 soros de leishmaniose mucocutânea. O melhor período para a preparaçäo de antígenos de imunofluorescência foi considerado o dia 5 para promastigotas adaptadas ao meio de cultivo e o dia 3 para células recentemente adaptadas

Almacenamiento a largo plazo de IgG e IgM en papel filtro para su uso en encuestas seroepidemiológicas de enfermedades parasitarias / Long-term storage of IgG and IgM on filter paper for use in parasitic disease seroepidemiology surveys

Para tratar de detrminar por cuánto tiempo se pueden almacenar los anticuerpos IgG e IgM en muestras de sangre conservadas en papel filtro, se obtuvieron muestras sanguíneas de 23 pacientes con toxoplasmosis. Se procedió a almacenar una porción de cada muestra en papel filtro a -20 °C y se dividió en tercios el suero restante; un tercio se dejó inalterado, un tercio se combinó con un volumen igual de glicerina y un tercio se liofilizó. Una vez hecho esto, todas las muestras se guardaron a -20 °C y se examinó parte de cada grupo para detectar anticuerpos IgG e IgM, practicando técnicas de inmunofluorescencia (IF) y de inmunodifusión radial (RID), después de un período de almacenamiento de 0, 3, 6, 9, 12 y 18 meses

Los resultados demostraron la dificultad de estimar cuál es la dilución de suero equivalente al eluato obtenido de las muestras almacenadas en papel filtro para fines de análisis. Además, dichos resultados indicaron que la IgG se deterioraba más rápidamente en las muestras almacenadas en papel filtro que en otras. Este deterioro relativamente más rápido de las muestras guardadas en papel filtro fue aun más marcado en el caso de la IgM... (AU)

Almacenamiento a largo plazo de IgG e IgM en papel filtro para su uso en encuestas seroepidemiológicas de enfermedades parasitarias / Long-term storage of IgG and IgM on filter paper for use in seroepidemiologic surveys of parasitic diseases

Para tratar de determinar por cuánto tiempo se pueden almacenar los anticuerpos IgG e IgM en muestras de sangre conservadas en papel filtro, se obtuvieron muestras sanguíneas de 23 pacientes con toxoplasmosis. Se procedió a almacenar una porción de cada muestra en papel filtro a - 20-C y se dividió en tercios el suero restante; un tercio se dejó inalterado, un tercio se combinó con un volumen igual de glicerina y un tercio se liofilizó. Una vez hecho esto, todas las muestras se guardaron a - 20-C y se examinó parte de cada grupo para detectar anticuerpos IgG e IgM, practicando pruebas de inmunofluorescencia (IF) y de inmunodifusión radial (RID), después de un período de almacenamiento de 0, 3, 6, 9, 12 y 18 meses. Los resultados demostraron la dificultad de estimar cuál es la dilución de suero equivalente al eluato obtenido de las muestras almacenadas en papel filtro para fines de análisis. Además, dichos resultados indicaron que la IgG se deterioraba más rápidamente en las muestras almacenadas en papel filtro que en otras. Este deterioro relativamente más rápido de las muestras guardadas en papel filtro fue aun más marcado en el caso de la IgM. Sin embargo, a pesar de estas limitaciones, cabe afirmar que el método de toma de muestras sanguíneas por punción en el dedo y almacenamiento de las mismas en papel filtro continúa siendo el mejor para fines seroepidemiológicos, ya que solo requiere una pequeña cantidad de sangre; no necesita de jeringuillas, tubos de ensayo, condiciones estrictamente estériles ni refrigeración; proporciona muestras adecuadas para muchas pruebas serológicas, y permite emplear personal no muy especializado. Además, el deterioro relativamente rápido de la IgM observado en el presente estudio indica que tal vez se podría reducir la interferencia de la IgM en las pruebas de detección de anticuerpos IgG almacenando las muestras objeto de análisis por un período suficientemente largo como para que se produza el deterioro de la IgM

Anti-leishmania IgA immunoenzymatic assay in mucocutaneous leishmaniasis (preliminary report).

Os Autores descrevem a reacao de IgA ELISA na leishmaniose mucocutanea. Titulos acima do normal foram encontrados no primeiro e segundo anos de infeccao e em soros de micoses profundas acompanhados por envolvimento mucoso ou doenca disseminada

Seroepidemiology of cutaneous leishmaniasis from Ribeira do Iguape Valley. IgM and IgG antibodies detected by means of an immunoenzymatic assay (ELISA).

A presenca de anticorpos de classe IgM e descrita numa serie de soros de leishmaniose cutanea e de individuos normais do Vale do Ribeira, Estado de Sao Paulo, Brasil. A especificidade do anticorpo foi demonstrada pela absorcao de soros IgM-positivos com gamaglubulina agregada pelo calor. Os anticorpos IgM anti-L. braziliensis estavam presentes em casos nao tratados de leishmaniose cutenea e em 43, 21% dos soros de individuos normais da mesma area. Anticorpos de classe IgG estavam presentes em 86,0% dos casos clinicos de leishmaniose cutanea

Almacenamiento a largo plazo de IgG e IgM en papel filtro para su uso en encuestas seroepidemiológicas de enfermedades parasitarias / Long-term storage of IgG and IgM on filter paper for use in parasitic disease seroepidemiology surveys

Para tratar de detrminar por cuánto tiempo se pueden almacenar los anticuerpos IgG e IgM en muestras de sangre conservadas en papel filtro, se obtuvieron muestras sanguíneas de 23 pacientes con toxoplasmosis. Se procedió a almacenar una porción de cada muestra en papel filtro a -20 ºC y se dividió en tercios el suero restante; un tercio se dejó inalterado, un tercio se combinó con un volumen igual de glicerina y un tercio se liofilizó. Una vez hecho esto, todas las muestras se guardaron a -20 ºC y se examinó parte de cada grupo para detectar anticuerpos IgG e IgM, practicando técnicas de inmunofluorescencia (IF) y de inmunodifusión radial (RID), después de un período de almacenamiento de 0, 3, 6, 9, 12 y 18 meses

Los resultados demostraron la dificultad de estimar cuál es la dilución de suero equivalente al eluato obtenido de las muestras almacenadas en papel filtro para fines de análisis. Además, dichos resultados indicaron que la IgG se deterioraba más rápidamente en las muestras almacenadas en papel filtro que en otras. Este deterioro relativamente más rápido de las muestras guardadas en papel filtro fue aun más marcado en el caso de la IgM... (AU)