RESUMO
INTRODUÇAO: Fatores genéticos podem desempenhar um importante papel na susceptibilidade à tuberculose (TB) ativa, e polimorfismos de base única (SNPs) em diferentes genes que codificam para citocinas têm sido descritos e associados com doenças. OBJETIVOS: Investigar o quanto polimorfismo na região promotora do gene que codifica para TNF-alfa (-238 e -308) estão associados a ocorrência de TB ativa. MÉTODOS: SNPs dentro do gene de TNF-alfa foram analisados por PCR- RFLP em dois grupos de indivíduos: pacientes com TB (n = 234) e pacientes com pneumopatias não TB (n = 113). RESULTADOS: Neste estudo, o alelo -238A esteve associado significantemente com susceptibilidade à ocorrência de TB e gravidade das formas clínicas (p = 0,00002; OR = 0,15; IC = 0,06-0,36). Por outro lado, o alelo -308A esteve associado significantemente com a proteção a outras formas de doença pulmonar (p = 0,02; OR = 1,95; IC = 1,07-3,58). CONCLUSÕES: Estes resultados preliminares sugerem a importância de estudos genéticos na ocorrência da TB. São necessários outros estudos para melhorar a compreensão sobre a patogênese do M. tb.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adolescente , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Marcadores Genéticos , Polimorfismo Genético , Predisposição Genética para Doença/genética , Fator de Necrose Tumoral alfa , Tuberculose Pulmonar/genética , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo de Fragmento de Restrição , Análise de Sequência de DNARESUMO
Mycobacterium vaccae represents an alternative mycobacterial cloning host that has been largely overlooked to date. The main reason for this may be the reported non-transformability of this species, specifically the so-called Stanford strain (NCTC 11659), with expression vectors that use kanamycin resistance as a selection method. However, this strain can be transformed using hygromycin resistance as an alternative selectable phenotype. The present study has shown that in contrast to previous reports, M. vaccae (ATCC 15483) is capable of being transformed with a range of vectors encoding kanamycin resistance as the selectable marker. Thereafter, the expression of the lacZ reporter gene in M. vaccae, Mycobacterium bovis BCG and Mycobacterium smegmatis mc(2)155 was evaluated using a range of characterized mycobacterial promoter sequences (hsp60, hsp70, PAN, 18kDa and 16S rRNA) cloned in the same promoter probe vector. In general, the promoters showed similar levels of activity in the three species, demonstrating that existing expression systems can readily be employed with M. vaccae (ATCC 15483). This was further confirmed by the observation that M. vaccae was capable of stable, in vitro expression of recombinant S1 subunit of pertussis toxin at levels equivalent to those obtained with BCG and M. smegmatis. Analysis of structural and functional stability of a range of vectors demonstrated that the incidence of instability noted for M. vaccae was lower than that recorded for M. smegmatis. Taken together, the results indicate that M. vaccae is an additional cloning host which may prove useful for specific aspects of mycobacterial biology and provide increased flexibility to the field of recombinant protein technology for mycobacteria.
