On the Cornea of Healthy Merino Sheep: A Detailed Ex Vivo Confocal, Histological and Ultrastructural Study.

Our study performed qualitative and quantitative studies on the corneal ultrastructure of healthy female Merino sheep of ages 4 months and 6 years old from the Argentinean Pampa. The corneas were evaluated using ex vivo laser-scanning confocal microscopy, light microscopy and transmission electron microscopy. Those studies allowed us to obtain detailed images of the corneal layers as well as quantitative data of the cellular and sub-basal nerve densities in the cornea from sheep of different ages. The density of the corneal cells was significantly different in the anterior versus the posterior epithelium and stroma. Moreover, the density of the epithelial, stromal cells and endothelial cells, as well as the sub-basal nerve density were significantly lower in adult than in young animals. Our work provided a wide-ranging description of the corneal ultrastructure of healthy female Merino sheep, which adds to the current knowledge about the ophthalmological aspects of this species and undoubtedly benefits veterinarians.

Ocular and systemic toxicity of intravitreal topotecan in rabbits for potential treatment of retinoblastoma.

Treatment of intraocular retinoblastoma with vitreous seeding is a challenge. Different routes of chemotherapy administration have been explored in order to attaining pharmacological concentrations into the posterior chamber. Intravitreal drug injection is a promissing route for maximum bioavailability to the vitreous but it requires a well defined dose for achieving tumor control while limited toxicity to the retina. Topotecan proved to be a promising agent for retinoblastoma treatment due to its pharmacological activity and limited toxicity. High and prolonged concentrations were achieved in the rabbit vitreous after 5 µg of intravitreal topotecan. However, whether a lower dose could achieve potentially therapeutic levels remained to be determined. Thus, we here study the pharmacokinetics of topotecan after 0.5 µg and the toxicity profile of intravitreal topotecan in the rabbit eye as a potential treatment of retinoblastoma. A cohort of rabbits was used to study topotecan disposition in the vitreous after a single dose of 0.5 µg of intravitreal topotecan. In addition, an independent cohort of non-tumor bearing rabbits was employed to evaluate the clinical and retinal toxicity after four weekly injections of two different doses of intravitreal topotecan (Group A, 5 µg/dose; Group B, 0.5 µg/dose) to the right eye of each animal. The same volume (0.1 ml) of normal saline was administered to the left eye as control. A third group of rabbits (Group C) served as double control (both eyes injected with normal saline). Animals were weekly evaluated for clinical and hematologic values and ocular evaluations were performed with an inverse ophthalmoscope to establish potential topotecan toxicity. Weekly controls included topotecan quantitation in plasma of all rabbits. Electroretinograms (ERGs) were recorded before and after topotecan doses. One week after the last injection, topotecan concentrations were measured in vitreous of all eyes and samples for retinal histology were obtained. Our results indicate that topotecan shows non linear pharmacokinetics after a single intravitreal dose in the range of 0.5-5 µg in the rabbit. Vitreous concentration of lactone topotecan was close to the concentration assumed to be therapeutically active after 5 h of 0.5 µg intravitreal administration. Eyes injected with four weekly doses of topotecan (0.5 or 5 µg/dose) showed no significant differences in their ERG wave amplitudes and implicit times in comparison with control (p > 0.05). Animals showed no weight, hair loss or significant changes in hematologic values during the study period. There were no significant histologic damage of the retinas exposed to topotecan treatments. After intravitreal administration no topotecan could be detected in plasma during the follow-up period nor in the vitreous of treated and control animals after 1 week of the last injection. The present data shows that four weekly intravitreal injection of 5 µg of topotecan is safe for the rabbit eye. Despite multiple injections of 0.5 µg of topotecan are also safe to the rabbit eye, lactone topotecan vitreous concentrations were potentially active only after 5 h of the administration. We postulate promising translation to clinics for retinoblastoma treatment.

Participación de componentes inmunológicos en la etiopatogenia de la queratopatía climática esferoidea / Involvement of immune components in the etiopathogenia of climatic droplet keratopathy

Objetivo. Investigar si componentes de la inmunidad innata están involucrados en la iniciación/perpetuación de las anormalidades estructurales observadas en la capa de Bowman y el estroma superficial de la córnea de pacientes con queratopatía climática esferoidea (QCE). Materiales y métodos. En el estudio participaron 8 pacientes con QCE y 12 individuos sanos del Departamento El Cuy, Provincia de Río Negro, y 10 individuos sanos de la ciudad de Córdoba. Todos ellos, luego de firmar el consentimiento informado, recibieron un examen oftalmológico completo y se recolectaron muestras de lágrima para estudiar las concentraciones de diferentes citocinas, niveles y formas de metaloproteinasas de matriz (MMPs), y el inhibidor natural de MMPs (TIMP-1). Se realizó microscopía confocal in vivo (MCF) en algunos pacientes y controles. Biopsias de córneas provenientes de pacientes que fueron tratados con queratoplastia penetrante también fueron estudiadas mediante inmunohistoquímica (IHQ). Resultados. Los resultados de MCF indicaron claramente una progresión en la cantidad de depósitos a nivel subepitelial, a medida que la enfermedad avanza. El daño progresivo de las fibras nerviosas sub basales y estromales en los estadios 2 y 3 se correlaciona con pérdida de la sensibilidad corneal. Además de estas alteraciones, observamos que el número de células dendríticas (CD) en el limbo corneal aumentó significativamente a medida que la QCE progresa. En lágrimas de pacientes con QCE se detectaron concentraciones significativamente superiores de citocinas proinflamatorias (IL1ß e IL-8) que en individuos controles (p<0,005). No se halló IL-2, IL-17, IL-4, IL-13 ni IL-10 en pacientes y ni controles. Las actividades de gelatinasas (MMP-9 y -2) fueron significativamente mayores en QCE que en los controles (p<0,001), mientras que los niveles de TIMP-1 fueron significativamente menores en los pacientes (p<0,05). La concentración de MMP-8 fue mayor en controles pero los niveles de esta colagenasa-2 fueron 30 veces superiores, tanto en QCE como controles, con respecto a los valores de los individuos de un centro urbano. Mediante IHC observamos reactividad para MMP-9 en la mayoría de las células epiteliales, solamente en córneas con QCE. Conclusión. Demostramos un rol protagónico del eje citocinas proinflamatorias - gela-tinasas en el desarrollo de la QCE. Los altos niveles de IL-1ß e IL-8 en lágrimas de pacientes facilitan la producción de MMP-8 y gelatinasas, y los efectos de las mismas se exacerban, ya que los pacientes tienen bajos niveles de sus inhibidores naturales (TIMP-1). La MMP-9, además de degradar componentes de la matriz extracelular, cataliza la activación postranscripcional de IL-1ß, potenciando el proceso inflamatorio. Estos resultados son los primeros en explicar mecanismos inmunológicos involucrados en la etiopatogénesis de la QCE y aportan nuevas alternativas para el desarrollo de terapias preventivas utilizando inhibidores de IL-1ß y/o gelatinasas(AU)

Objective. To investigate whether components of innate immunity are involved in the initiation / perpetuation of the structural abnormalities observed in Bowman's layer and superficial stroma of the córnea of patients with Climatic droplet keratopathy (CDK). Materials and Methods. The study included 8 CDK patients and 12 healthy individuals from Department El Cuy, Province of Río Negro, and 10 healthy subjects from the city of Córdoba. All of them, after signing informed consent, received a thorough eye exam and tear samples were collected to study the concentrations of different cytokines, and levels and forms of matrix metalloproteinases (MMPs) and their natural inhibitor (TIMP-1). In vivo confocal microscopy (CFM) was performed in some patients and controls. Corneal biopsies from CDK patients treated with penetrating keratoplasty were also studied by immunohistochemistry (IHC). Results. CFM results clearly indicated a progression in the amount of deposits at corneal sub epithelial level as the disease progresses. The progressive damage in the nerve plexus in stages 2 and 3 correlated with a loss of corneal sensitivity. In addition to these alterations, we observed that the number of dendritic cells (DC) in the limbus increased significantly as the disease progresses.In tears of patients with CDK we detected significantly higher concentrations of pro-inflammatory cytokines (IL-1ß and IL-8) than in control subjects (p < 0.005). We found no IL-2, IL-17, IL-4, IL-13 and IL-10 in patients and controls. The activities of gelatinases (MMP-9 and -2) were significantly higher in CDK than in controls (p < 0.001), while TIMP-1 levels were significantly lower in patients (p < 0.05). The concentration of MMP-8 was higher in controls, but levels of this collagenase-2 were 30 times higher, both in CDK and controls, with respect to MMP-8 values of individuals inhabiting an urban area. By IHC we observed reactivity for MMP-9 in most epithelial cells only in CDK corneas. Conclussion. We demonstrated a key role of the axis pro-inflammatory cytokines ­ gelatinases in the development of CDK. High levels of IL-1ß and IL-8 in tears of patients facilitate the production of MMP-8 and gelatinases, and the effects of these molecules are exacerbated because patients have low levels of their natural inhibitors (TIMP-1). Since MMP-9 besides degrading extracellular matrix components, catalyzes the post translational activation of IL-1ß, the inflammatory process is fuelled. These results are the first to explain immunological mechanisms involved in the pathogenesis of the QCE and provide new alternatives for the development of preventive therapies using inhibitors of IL-1ß and / or gelatinases.(AU)

In vivo lamellar keratoplasty using platelet-rich plasma as a bioadhesive.

PURPOSE: The use of standard sutures has been replaced by platelet-rich plasma (PRP), a bioadhesive agent, in several surgical procedures. This prompted us to test PRP efficacy in experimental lamellar keratoplasty. METHODS: After lamellar anterior keratoplasty, PRP with a mean concentration of 807,564 platelets/mm(3) was used to attach the corneal flap to the stromal surface in 12 New Zealand white rabbits. 10-0 nylon sutures were used in one control group of 12 animals and no suture was used in a second control group of six rabbits. Animals were killed at days 2, 7, 30, and 90 for histological and smooth muscle actin (SMA) immunohistochemical analysis. RESULTS: The PRP group showed a tight corneal graft from the first postoperative hours until they were killed. A transparent cornea was seen at 30 days and remained clear until the end of the protocol. Histological specimens showed no signs of ocular inflammation in any animal within the PRP group. Electron microscopy showed normal morphological features on the flap and stromal bed, and a clear interface zone without cells or debris. The number of stromal myofibroblasts was lower than that seen in the suture group at 3 months postsurgery. The sutured group showed an attached cornea with signs of inflammation around the knots. All flaps without PRP or sutures were completely detached in the immediate postoperative period. CONCLUSIONS: PRP was useful for attaching the corneal flap and it was well tolerated by the rabbit corneal tissue. Corneal healing was satisfactory. Further studies on PRP adhesiveness in grafts with donor corneas should be performed before considering its use in patients.

Niveles de topotecan en el vitreo luego de la administración periocular en conejos / Vitreous topotecan levels after periocular administration in rabbits

Estudiar los niveles de topotecan total y lactona en el vitreo luego de la administración periocular en un modelo animal. Material y métodos: Se administró 1 mg de topotecan periocular en ambos ojos a 9 conejos sin retinoblastoma y se midieron niveles en el vitreo a las 0.25, 0.5, 1, 2, 4 y 24 horas. Se midieron niveles plasmáticos en 2 animales a las 2 horas. Se midió topotecan total y lactona por HPLC. Todos los animales fueron enucleados al completar el experimento y los ojos fueron examinados patológicamente para evalur toxicidad. Resultados: Tanto el topotecan total como la lactona alcanzaron niveles en el vitreo, mostrando un pico a los 30 minutos de la administración periocular. Los niveles medios en el pico fueron de 158 ng/ml para el topotecan total y 122 ng/ml para el topotecan lactona decayendo con una vida media de 2.44 hs. y 2.8 hs. para el topotecan total y lactona respectivamente. Se encontraron bajos niveles plasmáticos en los 2 animales estudiados a las 2 hs. de la administración de topotecan periocular ((32.0 ng7ml). No se evidencio toxicidad significativa. Conclusiones: En este estudio preliminar, el topotecan mostro lograr pernetrar al vitreo luego de la administración periocular a concentraciones potencialmente tumoricidas. Nuestro grupo proseguirá con estudios más detallados para evaluar su comportamiento famacocinético con el fin de utilizarlo potencialmente en paciente con retinoblastoma.

Sjogren's syndrome: a comparative study of impression cytology of the conjunctiva and buccal mucosa, and salivary gland biopsy.

The diagnosis of Sjogren's syndrome (SJ) as an underlying disease of keratoconjunctivitis sicca is important because of the many ocular and systemic complications. We compared the results of impression cytology of conjunctiva (ICC) and the results of labial salivary gland biopsy (LSB) with impression cytology of buccal mucosa (ICB) in 33 patients with SJ. LSB, ICC, and ICB were considered positive in all patients. Moderate to severe changes were graded in 85% of the biopsy specimens, 94% of the conjunctival specimens, and 76% of the buccal mucosa specimens. The rate of agreement between LSB and ICB was 97%. The use of ICB in the clinical ophthalmological examination may be helpful in patients with consistent history, and clinical and ocular findings, before the biopsy procedure.

Genetic spontaneous late subluxation of the lens. A study of two families.

Patients with genetic spontaneous late subluxation of the lens may present signs and symptoms other than lens displacement due to secondary anatomic alteration of the anterior segment. Two families are described, one of them with affected individuals in five successive generations. The vast majority of the patients sought consultation because of progressive myopia or intermittent acute intraocular hypertensive crisis which obscured the basic condition. Upon recognition of the disease, the affected patients underwent an uneventful intracapsular extraction. Histopathologic examination of the removed lenses suggested a dysplastic development of lens zonules.

Hydatid cysts of the orbit. A review of 35 cases.

The authors reviewed 35 cases of orbital hydatid cysts, which represented 5% of orbital surgical cases seen from 1944 to 1985. The average age was 16 years (range, 2-57 years). Slowly progressive unilateral exophthalmos, with or without pain, was the most frequent clinical manifestation. Computed tomography (CT) of the orbit demonstrated a well-circumscribed mass. Ultrasonography showed an anechoic cystic mass. The parasitic membrane and contents were surgically removed through an orbital approach. Hydatid cysts should be included in the differential diagnosis of unilateral exophthalmos in patients from countries where echinococcosis is endemic. Preoperative recognition is important for planning an appropriate surgical treatment in avoiding complications.

Atypical corneal dystrophy with stromal amyloid deposits.

Corneal dystrophies are distinctive clinically and histopathologically; however, variations do occur. We present two cases of stromal amyloidosis from one family masquerading other corneal dystrophy. The two cases are from a six-generation family with an autosomal dominant corneal dystrophy resembling Reis-Bucklers' dystrophy. In these cases, neither the propositus nor other family members showed typical lattice lines. Light and electron microscopy of the obtained corneal buttons disclosed amyloid stromal deposits. The clinicopathologic correlation of these cases suggests that this family represents a variant of stromal amyloid dystrophies.

Leiomiomatosis pulmonar nodular leiomioma metastasiante benigno / Nodular pulmonary leiomyomatosis begin metastasizing leiomyoma

Se trata de una mujer con nódulos redondeados pulmonares múltiples cuya biopsia demostró que se trataba de una leiomiomatosis pulmonar. La presencia de leiomiomas en el útero previamente extirpado, la ausencia de malignidad histológicamente apreciada y el curso prolongado (5 años) llevó al diagnóstico de leiomioma metastasiante benigno (LMB). Los estudios de microscopía electrónica demostraron que el componente sólido tumoral estaba constituido por células musculares, mientras que los espacios quísticos estaban recubiertos por células aplanadas o cuboideas sin cilias y con microvellosidades. Estas características señalan su origen blonquiolar y, por lo tanto, que los espacios que recubren representan remanecentes de epitelios bronquiales englobados por el tumor. La enfermedad no se mostró signos de remisión durante tratamento con progesterona (MPG) y tamoxifen (TMX) por casi un año, ni tampoco tres años después de ooforectomía bilateral. Salvo durante la presentación de derrame pleural que motivó la consulta inical y, más tarde, en el episodio de neumotórax, la paciente se mantuvo u continúa asintomática, a pesar de la profusión y tamaño de las imágenes radiológicas pulmonares

Leiomiomatosis pulmonar nodular leiomioma metastasiante benigno / Nodular pulmonary leiomyomatosis begin metastasizing leiomyoma

Se trata de una mujer con nódulos redondeados pulmonares múltiples cuya biopsia demostró que se trataba de una leiomiomatosis pulmonar. La presencia de leiomiomas en el útero previamente extirpado, la ausencia de malignidad histológicamente apreciada y el curso prolongado (5 años) llevó al diagnóstico de leiomioma metastasiante benigno (LMB). Los estudios de microscopía electrónica demostraron que el componente sólido tumoral estaba constituido por células musculares, mientras que los espacios quísticos estaban recubiertos por células aplanadas o cuboideas sin cilias y con microvellosidades. Estas características señalan su origen blonquiolar y, por lo tanto, que los espacios que recubren representan remanecentes de epitelios bronquiales englobados por el tumor. La enfermedad no se mostró signos de remisión durante tratamento con progesterona (MPG) y tamoxifen (TMX) por casi un año, ni tampoco tres años después de ooforectomía bilateral. Salvo durante la presentación de derrame pleural que motivó la consulta inical y, más tarde, en el episodio de neumotórax, la paciente se mantuvo u continúa asintomática, a pesar de la profusión y tamaño de las imágenes radiológicas pulmonares (AU)

Malignant melanoma of the conjunctiva. Report of a case.

Malignant melanomas of the conjunctiva are extremely rare in children. The authors report an 11-year-old boy who had a nodule at the limbus in a pigmented area since early childhood. The lesion was excised and the diagnosis of atypical compound nevus was made. Five months later, the patient returned with multiple nodules in the bulbar and palpebral conjunctiva. One of the lesions was excised, and the diagnosis was malignant melanoma. He was lost for follow-up for 6 months; then he presented a large pigmented, vascularized mass protruding through the palpebral aperture. Results of systemic workup for metastatic disease were negative, and an exenteration was performed. A few months later, cervical lymphadenopathy developed followed by extensive metastatic disease.

Tumores metastásicos oculares: estudio de 32 casos / Ocular metastatic tumors: study of 32 cases

Bloch y Gartner fueron los primeros en postular que las metástasis constituyen el tumor ocular maligno más frecuente. En EE.UU. y Europa la incidencia calculada anual de melanomas intraoculares es de aproximadamente 5 a 7 casos nuevos por millón de habitantes [21,29]. Estudios clinicopatológicos de poblaciones con neoplasias demostraron una incidencia de metástasis oculares variable entre 0.5 y 11 por ciento, lo que equivale a un número entre 1150 y 25300 calculado con la incidencia de neoplasias en EE.UU. en el año 1972, de acuerdo a lo mencionado por Ferry y Font. La relación metástasis intraocular-melanoma calculada con promedios de las cifras mencionadas es de aproximadamente 11-1. La mitad de los pacientes se presentan a la consulta con disminución de agudeza visual como consecuencia de un desprendimiento de retina que enmascara el diagnóstico clínico correcto; en otros pacientes con tumoración coroidea única y sin antecedentes clínicos de neoplasia en otras localizaciones, se realiza el diagnóstico de neoplasia intraocular primitiva [melanoma], indicando como tratamiento la enucleación sin una evaluación general exhaustiva. La importancia del diagnóstico por el oftalmólogo es sugerido por el hecho de que en la mitad de los casos la metástasis intraocular es la primera manifestación de un tumor en otra localización, particularmente en neoplasias de origen pulmonar y tracto gastrointestinal. El oftalmólogo en la práctica privada tiene pocas oportunidades de evaluar este tipo de pacientes y realizar una experiencia personal. El objetivo de este trabajo es presentar la experiencia de un centro de oftalmología en el diagnóstico, diagnósticos diferenciales y tratamiento de las metástasis oculares, evaluando también las características clínicas y anatomopatológicas y evolución de las mismas. Se comparan los resultados con otros trabajos publicados.

Tumores metastásicos oculares: estudio de 32 casos / Ocular metastatic tumors: study of 32 cases

Bloch y Gartner fueron los primeros en postular que las metástasis constituyen el tumor ocular maligno más frecuente. En EE.UU. y Europa la incidencia calculada anual de melanomas intraoculares es de aproximadamente 5 a 7 casos nuevos por millón de habitantes [21,29]. Estudios clinicopatológicos de poblaciones con neoplasias demostraron una incidencia de metástasis oculares variable entre 0.5 y 11 por ciento, lo que equivale a un número entre 1150 y 25300 calculado con la incidencia de neoplasias en EE.UU. en el año 1972, de acuerdo a lo mencionado por Ferry y Font. La relación metástasis intraocular-melanoma calculada con promedios de las cifras mencionadas es de aproximadamente 11-1. La mitad de los pacientes se presentan a la consulta con disminución de agudeza visual como consecuencia de un desprendimiento de retina que enmascara el diagnóstico clínico correcto; en otros pacientes con tumoración coroidea única y sin antecedentes clínicos de neoplasia en otras localizaciones, se realiza el diagnóstico de neoplasia intraocular primitiva [melanoma], indicando como tratamiento la enucleación sin una evaluación general exhaustiva. La importancia del diagnóstico por el oftalmólogo es sugerido por el hecho de que en la mitad de los casos la metástasis intraocular es la primera manifestación de un tumor en otra localización, particularmente en neoplasias de origen pulmonar y tracto gastrointestinal. El oftalmólogo en la práctica privada tiene pocas oportunidades de evaluar este tipo de pacientes y realizar una experiencia personal. El objetivo de este trabajo es presentar la experiencia de un centro de oftalmología en el diagnóstico, diagnósticos diferenciales y tratamiento de las metástasis oculares, evaluando también las características clínicas y anatomopatológicas y evolución de las mismas. Se comparan los resultados con otros trabajos publicados. (AU)

Gliosis masiva segmentaria de retina. / Segmentary massive gliosis of the retina. Its importance in the differential diagnosis of intraocular tumors

Se presenta un paciente de 61 anos a quien se enucleo el ojo izquierdo con el diagnostico de tumoracion intraocular.Histopatologicamente demostro ser un caso de gliosis masiva segmentaria de retina. Las caracteristicas clinico-patologicas de esta entidad y sus diagnosticos diferenciales histopatologicos son discutidos

Gliosis masiva segmentaria de retina. / Segmentary massive gliosis of the retina. Its importance in the differential diagnosis of intraocular tumors

Se presenta un paciente de 61 anos a quien se enucleo el ojo izquierdo con el diagnostico de tumoracion intraocular.Histopatologicamente demostro ser un caso de gliosis masiva segmentaria de retina. Las caracteristicas clinico-patologicas de esta entidad y sus diagnosticos diferenciales histopatologicos son discutidos