RESUMO
The design of more effective therapies for metastatic disease involves development of new compounds able to specifically block the malignant process. We demonstrated previously that a new synthetic nitrogenated compound 3'-1-chloroethyl-2,3-dihydro-1H-imidazo-(2, 1-i)-purine-4-ium-7-yl-3'-deoxy-1',5', 6'-tri-O-(methylsulfonyl)-muco-inositol chloride (DIC) had an anti-proliferative activity on tumor cells in vitro. In the present work we demonstrate that DIC induces apoptosis on the LM3 murine mammary adenocarcinoma cell line in vitro and has anti-angiogenic activity in vivo. We also evaluated toxicity, biodistribution and anti-neoplastic properties of DIC in vivo. Toxicity studies allowed us to establish the LD50 (750 mg/kg body weight). Administration of 250 mg/kg/day (LD10) for 6 days did not cause overt toxic effects. Biodistribution assays revealed that DIC was rapidly eliminated (60% at t=10 min), although it accumulated in tumor tissue at higher concentrations than in other tissues. Daily s.c. treatment with DIC (LD10) for 24 days significantly reduced the number of spontaneous lung metastases. These results suggest that DIC has the ability of impairing the metastatic development by inhibiting angiogenesis and inducing apoptosis on tumor cells.
Assuntos
Antineoplásicos/farmacologia , Inositol/análogos & derivados , Purinas/farmacologia , Adenocarcinoma/patologia , Animais , Antineoplásicos/síntese química , Antineoplásicos/uso terapêutico , Antineoplásicos/toxicidade , Divisão Celular/efeitos dos fármacos , Ensaios de Seleção de Medicamentos Antitumorais , Feminino , Inositol/síntese química , Inositol/farmacologia , Inositol/toxicidade , Radioisótopos do Iodo , Neoplasias Mamárias Experimentais/patologia , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Metástase Neoplásica/prevenção & controle , Neovascularização Patológica/prevenção & controle , Purinas/síntese química , Purinas/toxicidade , Distribuição Tecidual , Células Tumorais CultivadasRESUMO
El anticuerpo monoclonal (AcMo) anti-CEA B2C114 fue marcado con 99mTc utilizando uno de los métodos directos de marcación, en el cual la proteína (AcMo IgG1) se reuce utilizando una solución de Ditiotreitol (DTT) para generar grupos sulfhidrilos, uniendo el 99mTc a los mismos a través del anión [99mTcNCl4]- preparado por calentamiento a reflujo de pertecneciato en presencia de azida sódica y HCl conc. El exceso de DTT se eliminó pasando el AcMo reducido por Sephadex G-25 y del mismo modo se realizó la purificación del anticuerpo marcado. Las cromatografías en TLC y Whatman Nº1 usando Metanol 85 por ciento y solución fisiológica como solventes, mostraron una actividad unida a proteínas entre 55-60 por ciento, obteniéndose luego de la purificación por Sephadex G-25 un producto con 90-95 por ciento de pureza radioquímica. Se realizó la biodistribución en ratones Balb/c a las 21 h post inyección obteniéndose una relación de 2:1 de la dosis inyectada por gramo de tejido, con respecto al tumor reactivo:no reactivo. El ensayo de unión realizado demostró que el AcMo conservó su actividad biológica después de marcado
Assuntos
Animais , Camundongos , Anticorpos Monoclonais/farmacocinética , Marcação por Isótopo , Modelos Biológicos , Pertecnetato Tc 99m de Sódio , Anticorpos Monoclonais , Antígeno Carcinoembrionário , Disponibilidade Biológica , Cromatografia em Gel , Cromatografia em Papel , Cromatografia em Camada Fina , Marcação por Isótopo/estatística & dados numéricos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Neoplasias/diagnósticoRESUMO
Two anti-CEA antibodies, B2C114 and IORCEA1, were radiolabeled with 99mTc by two direct methods (mercaptoethanol and ascorbic acid reduction), and the radio-immunoimaging properties of B2C114 were assessed in mice bearing an M3-reactive tumor. The labeling efficiency was greater than 90% as measured by ITLC in saline, methylethylketone and with serum albumin impregnated sheets using ethanol: water: NH4OH (2:5:1). The label was stable to challenge with excess DTPA, and in the case of ascorbic acid reduction, serum analysis showed that 10-15% of the radioactivity was lost during incubation. In vitro studies demonstrated that the radiolabeled antibodies retained their immunoreactivity. Biodistribution studies in normal Balb/c mice showed that the pattern of uptake was quite similar for both antibodies. Biodistribution of the 99mTc-B2C114 and image studies in the animal model showed that the tumor was clearly visualized and that B2C114 labeled with 99mTc is a possible candidate for human radioimmunodetection of CEA-expressing tumors.
Assuntos
Anticorpos Monoclonais , Neoplasias Mamárias Experimentais/diagnóstico por imagem , Compostos de Organotecnécio , Radioimunodetecção , Animais , Antígeno Carcinoembrionário/imunologia , Feminino , Marcação por Isótopo/métodos , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Coelhos , Distribuição TecidualRESUMO
El anticuerpo monoclonal (AcMo) B2C114, dirigido contra el antígeno carcinoembrionario (CEA) fue conjugado con el anhídrido bicíclico del DTPA (CA-DTPA) usando diferentes relaciones molares CA-DTPA: AcMo desde 1:1 hasta 30:1. Se determinó para cada caso la eficiencia de acoplamiento y el número de moléculas de DTPA por molécula de AcMo. Se realizó la marcación con 111In para todas las relaciones molares CA-DTPA: AcMo y se determinó la pureza radioquímica por cromatografía instantánea en placa delgada (ITLC Gelman SG) y cromatografía en gel (Sephadex G-25). La biodistribución del AcMo marcado en ratones normales Balb/c y en portadores de tumor reactivo (M3), a diferentes horas post-inyección, mostró una acumulación creciente en el tumor al cabo de 72 h, con captación en hígado y riñón. Se observó también que al aumentar la relación molar CA-DTPA se incrementó el porcentaje de radiactividad asociada al riñón, lo cual indicaría una mayor inestabilidad del radiofármaco
Assuntos
Animais , Camundongos , Anticorpos Monoclonais , Antígeno Carcinoembrionário , Índio , Marcação por Isótopo , Biomarcadores Tumorais/análise , Neoplasias Experimentais/diagnóstico , Ácido Pentético , Radioisótopos , Cintilografia/tendências , Camundongos Endogâmicos BALB C/imunologia , Anticorpos Monoclonais/metabolismo , Neoplasias da Mama , Quelantes , Distribuição Tecidual/fisiologia , Índio/farmacocinética , Biomarcadores Tumorais/biossíntese , Neoplasias Experimentais , Neoplasias Experimentais/imunologia , Cintilografia/estatística & dados numéricos , Cintilografia/veterináriaRESUMO
El anticuerpo mionoclonal B2C114 producido contra el antígeno carcinoembrionario reconoce un carbohidrato del antígeno A de grupo sanguineo humano. La expresión de este determinante antigénico se investigó en estirpes celulares del adenocarcinoma mamario espontáneo M3 y su derivada experimental MM3 de mayor capacidad metastatizante. La reactividad específica in vitro de B2C114 marcado con I a la 125 permitió determinar el número de epitopes antigénicos por celula M3 y la constante de asociación. La biodistribución del anticuerpo monoclonal mostró que I a la 125-B2C114 discriminó, con alta sensibilidad, entre el tumor M3, la variante MM3 y tejidos normales, confirmado por la obtención de imágenes positivas de M3 en cámara gamma. Estos estudios han permitido la obtención de un modelo que facilita el desarrollo de diferentes tecnologías aplicadas al diagnóstico y a la terapéutica del cáncer
Assuntos
Camundongos , Animais , Anticorpos Monoclonais , Antígeno Carcinoembrionário , Epitopos , Imunoterapia , Radioisótopos do Iodo , NeoplasiasRESUMO
El anticuerpo mionoclonal B2C114 producido contra el antígeno carcinoembrionario reconoce un carbohidrato del antígeno A de grupo sanguineo humano. La expresión de este determinante antigénico se investigó en estirpes celulares del adenocarcinoma mamario espontáneo M3 y su derivada experimental MM3 de mayor capacidad metastatizante. La reactividad específica in vitro de B2C114 marcado con I a la 125 permitió determinar el número de epitopes antigénicos por celula M3 y la constante de asociación. La biodistribución del anticuerpo monoclonal mostró que I a la 125-B2C114 discriminó, con alta sensibilidad, entre el tumor M3, la variante MM3 y tejidos normales, confirmado por la obtención de imágenes positivas de M3 en cámara gamma. Estos estudios han permitido la obtención de un modelo que facilita el desarrollo de diferentes tecnologías aplicadas al diagnóstico y a la terapéutica del cáncer (AU)
Assuntos
Camundongos , Animais , Anticorpos Monoclonais , Antígeno Carcinoembrionário , Epitopos , Imunoterapia , Neoplasias , Radioisótopos do IodoRESUMO
El objetivo del presente trabajo fue la producción, caracterización y aplicación de anticuerpos monoclonales anti-antígeno carcinoembrionario. Ratones Balb/c fueron inmunizados con 2 dosis ip de 5 y 10 microng de antígeno carcinoembrionario en adyuvante completo de Freund cada 30 días, y 3 dosis de refuerzo durante días consecutivos. Las células esplénicas fueron fusionadas con células de mieloma X63/Ag8.653 en presencia de polietilenglicol, y los híbridos rescatados en medio selectivo conteniendo hipoxantina-methotrexate-timidina. La detección de híbridos productores de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno se realizó por radioinmunoanálisis en fase sólida, utilizando como trazador imunoglobulina de conejo anti-ratón marcada con 125I. Se obtuvo una eficiencia del 65% en crescimiento y del 13% en positividad. Los híbridos fueron clonados y estabilizados por miniclonado repetitivo, con un 65% de crecimiento y 40% de positividad. De 11 hibridomas productores se seleccionaron 3 que fueron inyectados en ratones BALB/c para la obtención de tumores ascíticos. La inmuno-especificidad de los anticuerpos monoclonales A4, A15 y A19 fue determinada por inmunoelectroforesis crozada, detectándose la formación de inmunoprecipitados específicos entre los anticuerpos monoclonales y el antígeno carcinoembrionario marcado con 125I. El anticuerpo monoclonal A4, de altas afinidad (K=1,60x10*10 litros/mol) fue activo en el radioinmunoensayo hasta la dilución 1: 10 000 testada, permitiendo detectar valores de aproximadamente 0,5ng/ml. En ensayos de competición contra el anticuerpo policlonal, el rango de inhibición obtenido fue del 28 al 35% utilizando antígeno purificado, y del 10 al 15% con sueros de pacientes afectados por cáncer de colon...