Membrana plasmática de espermatozoides bovinos: efeito de metabólitos do oxigênio, antioxidantes e criopreservação / Plasmatic membrane of bovine spermatozoa: effect of the species oxygen reactive, antioxidant and cryopreservation

A membrana plasmática é a parte da estrutura do espermatozoide mais susceptível a modificações durante o processo de criopreservação, e sua integridade é fundamental para que os espermatozoides estejam viáveis no momento da fecundação. Sua composição, tipo de fosfolipídeos e quantidade de proteínas são variáveis e influenciam a sensibilidade ao choque térmico. Durante o processo de capacitação, alterações na membrana plasmática são necessárias para que os espermatozoides sejam capazes de efetuar a reação acrossomal e, consequentemente, a fecundação. A presença de metabólitos do oxigênio é necessária para esse processo. No entanto, em excesso, eles são prejudiciais e comprometem a fluidez e a integridade da membrana. Enzimas antioxidantes presentes no plasma seminal e no próprio espermatozoide neutralizam esses metabólitos, evitando estresse oxidativo. Porém, a criopreservação causa desequilíbrio entre produção e neutralização de metabólitos do oxigênio, comprometendo a viabilidade da célula espermática. Na tentativa de amenizar as perdas celulares, diluidores de diferentes composições, inclusive contendo antioxidantes, têm sido testados para a preservação da viabilidade espermática. Esta revisão enfoca a composição lipídica da membrana plasmática do espermatozoide e a produção de metabólitos do oxigênio, relacionando-as com a qualidade espermática de bovinos após o processo de criopreservação e a utilização de diluidores contendo antioxidante.

The plasmatic membrane is the part of the spermatozoa structure which is the most susceptible to change during cryopreservation and its integrity is fundamental for spermatic viability in the moment of fertilization. Its composition, type of phospholipids and quantity of proteins, is variable and affects the sensibility to thermal shock. During capacitation, alterations occurs in the plasmatic membrane, these alterations are necessary for the spermatozoa to be able to perform the acrosome reaction and hence the fertilization. The presence of free radicals are necessary in this process, however, ROS are harmful in excess and interfere in the fluidity and integrity of the membrane. Antioxidants enzymes in the seminal plasma and in the spermatozoa neutralize these radicals preventing oxidative stress, but the cryopreservation causes imbalance between production and neutralization, compromising the cell´s viability. With the Objective of minimizing cells loss, extenders with different composition, including antioxidants, have been tested for sperm viability preservation This review focuses in the plasmatic membrane composition and species oxygen reactive production, related with quality sperm bovine after cryopreserved process and the use extender containing antioxidant.

Membrana plasmática de espermatozoides bovinos: efeito de metabólitos do oxigênio, antioxidantes e criopreservação / Plasmatic membrane of bovine spermatozoa: effect of the species oxygen reactive, antioxidant and cryopreservation

A membrana plasmática é a parte da estrutura do espermatozoide mais susceptível a modificações durante o processo de criopreservação, e sua integridade é fundamental para que os espermatozoides estejam viáveis no momento da fecundação. Sua composição, tipo de fosfolipídeos e quantidade de proteínas são variáveis e influenciam a sensibilidade ao choque térmico. Durante o processo de capacitação, alterações na membrana plasmática são necessárias para que os espermatozoides sejam capazes de efetuar a reação acrossomal e, consequentemente, a fecundação. A presença de metabólitos do oxigênio é necessária para esse processo. No entanto, em excesso, eles são prejudiciais e comprometem a fluidez e a integridade da membrana. Enzimas antioxidantes presentes no plasma seminal e no próprio espermatozoide neutralizam esses metabólitos, evitando estresse oxidativo. Porém, a criopreservação causa desequilíbrio entre produção e neutralização de metabólitos do oxigênio, comprometendo a viabilidade da célula espermática. Na tentativa de amenizar as perdas celulares, diluidores de diferentes composições, inclusive contendo antioxidantes, têm sido testados para a preservação da viabilidade espermática. Esta revisão enfoca a composição lipídica da membrana plasmática do espermatozoide e a produção de metabólitos do oxigênio, relacionando-as com a qualidade espermática de bovinos após o processo de criopreservação e a utilização de diluidores contendo antioxidante.(AU)

The plasmatic membrane is the part of the spermatozoa structure which is the most susceptible to change during cryopreservation and its integrity is fundamental for spermatic viability in the moment of fertilization. Its composition, type of phospholipids and quantity of proteins, is variable and affects the sensibility to thermal shock. During capacitation, alterations occurs in the plasmatic membrane, these alterations are necessary for the spermatozoa to be able to perform the acrosome reaction and hence the fertilization. The presence of free radicals are necessary in this process, however, ROS are harmful in excess and interfere in the fluidity and integrity of the membrane. Antioxidants enzymes in the seminal plasma and in the spermatozoa neutralize these radicals preventing oxidative stress, but the cryopreservation causes imbalance between production and neutralization, compromising the cell´s viability. With the Objective of minimizing cells loss, extenders with different composition, including antioxidants, have been tested for sperm viability preservation This review focuses in the plasmatic membrane composition and species oxygen reactive production, related with quality sperm bovine after cryopreserved process and the use extender containing antioxidant.(AU)

Desenvolvimento morfológico dos ovários em embriões e fetos bovinos da raça Nelore / Morphological development of the ovaries in embryos and fetuses of Nelore breed

Investigaram-se os eventos morfológicos relacionados ao desenvolvimento pré-natal de ovários de 81 embriões e fetos da raça Nelore, coletados em frigoríficos, com idades variando de 26 a 240 dias pós-fecundação. Observou-se formação da crista gonádica e presença de células germinativas em seu interior aos 29 e 34 dias, respectivamente. As oogônias e folículos primordiais, ao contrário dos folículos em crescimento, apresentaram diferenças significativas de diâmetro nos vários períodos estudados. Verificou-se correlação positiva (P<0,05) entre o diâmetro das oogônias e de seus núcleos, bem como entre o diâmetro dos folículos primordiais e em crescimento com seus oócitos e respectivos núcleos. A gônada apresentou-se completamente formada aos 40 dias. Folículos primordiais, em crescimento e antrais surgiram, aproximadamente, aos 95, 140 e 180 dias, respectivamente. Na raça Nelore, a oogênese tem início e duração semelhante à de raças taurinas, mas apresenta como peculiaridade a antecipação do surgimento da foliculogênese.

Desenvolvimento morfológico dos ovários em embriões e fetos bovinos da raça Nelore / Morphological development of the ovaries in embryos and fetuses of Nelore breed

Investigaram-se os eventos morfológicos relacionados ao desenvolvimento pré-natal de ovários de 81 embriões e fetos da raça Nelore, coletados em frigoríficos, com idades variando de 26 a 240 dias pós-fecundação. Observou-se formação da crista gonádica e presença de células germinativas em seu interior aos 29 e 34 dias, respectivamente. As oogônias e folículos primordiais, ao contrário dos folículos em crescimento, apresentaram diferenças significativas de diâmetro nos vários períodos estudados. Verificou-se correlação positiva (P<0,05) entre o diâmetro das oogônias e de seus núcleos, bem como entre o diâmetro dos folículos primordiais e em crescimento com seus oócitos e respectivos núcleos. A gônada apresentou-se completamente formada aos 40 dias. Folículos primordiais, em crescimento e antrais surgiram, aproximadamente, aos 95, 140 e 180 dias, respectivamente. Na raça Nelore, a oogênese tem início e duração semelhante à de raças taurinas, mas apresenta como peculiaridade a antecipação do surgimento da foliculogênese.(AU)

The morphologic events related to the prenatal development of the ovaries in 81 Nelore breed embryos and fetuses gathered in a local slaughterhouse, with age range from 26 to 240 days following fecundation were studied. The age of fetuses was estimated from measures taken in the cranium-caudal direction. The sex was identified from macroscopic observations and using Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. For histology the gonads were fixed in Bouins fluid for 24 hours and 5 µm thick sections were stained with hematoxylin-eosin. Formation of gonadal ridge and presence of germinal cells were found within it at 29 and 34 days, respectively. Oogonia and primordial follicles, unlike the growing follicles, exhibited significant differences in diameter in the various periods studied. Positive correlation (P<0.05) was found between the diameter of oogonia and their nucleus as well as between primordial and growing follicles with their oocytes and respective nuclei. The gonad was fully formed at 40 days. Primordial follicles, in the growing stage, and antral follicles first appeared, approximately at 95, 140, and 180 days, respectively. Despite the onset and duration of oogenesis being similar to that of taurine breeds, folliculogenesis initiates at an early stages in the Nelore breed.(AU)

COMPUTER-ASSISTED AND CONVENTIONAL SPERM MOTILITY ANALYSIS OF BOER AND ALPINE GOATS SEMEN IN THE AUTUMN AND SPRING. / ANÁLISE COMPUTADORIZADA (CASA) E CONVENCIONAL DA MOTILIDADE ESPERMÁTICA DE SÊMEN CAPRINO DAS RAÇAS BOER E ALPINA NO OUTONO E PRIMAVERA.

Um dos fatores limitantes da reprodução caprina é a produção e qualidade do sêmen. Na análise do sêmen, a avaliação da motilidade espermática é o procedimento mais comum usado para diagnosticar a fertilidade do macho. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da raça, indivíduo, método de avaliação e estação do ano (outono e primavera)sobre a motilidade. O sêmen foi colhido de machos caprinos das raças Boer (n=5) e Alpina (n=4), com auxílio de vagina artificial, totalizando 71 ejaculados obtidos no outono e 64 na primavera. Após a colheita, amostras de sêmen foram diluídas em PBS na concentração espermática aproximada de 50 milhões de células por mL para análise computadorizada e uma amostra diluída em solução fisiológica a 0,9% para análise convencional. As variáveis raça, bode, método e estação foram estudadas por meio de análise de variância e teste de Tukey. Não foram observadas diferenças estatísticas para raças, bem como para as estações, no entanto, dentro da raça, foi detectada diferença estatística (p > 0,01) para a motilidade entre bodes estudados, assim como entre os métodos de avaliação. Concluiu-se que, machos das raças Boer e Alpina, não apresentaram alteração quanto a motilidade espermática convencional e computadorizada, entre as estações, contudo, observou-se uma variação individual entre os machos, independentemente da raça.PALAVRAS-CHAVE: Caprino.

Sexing of murine and bovine embryos by developmental arrest induced by high-titer H-Y antisera.

Murine and bovine embryos at the late morula stage were cultured in medium containing high-titer rat H-Y antisera. After 12h of incubation, embryos blocked at the late morulae stage were classified as males and those at the blastocyst stage were classified as females. Sexing of murine embryos by PCR and cytogenetics revealed that 83% of the embryos classified as males and 82% of those classified as females had their sex correctly predicted (P < 0.05). Bovine embryos were transferred to recipient females. Pregnancy rates were 71.4% (10/14) for embryos classified as males and 68.8% (11/16) for embryos classified as females. The sex was correctly predicted for 80% (8/10) of the embryos classified as males and for 81.8% (9/11) of those classified as females (overall accuracy, 80.9%, P < 0.05). Therefore, the induction of developmental arrest by high-titer male-specific antisera was an efficient strategy for non-invasive embryo sexing. The procedure was straightforward and has considerable commercial potential for sexing bovine embryos.

Efficacy of linear and convex transducers for ultrasound-guided transvaginal follicle aspiration.

A new device was developed to hold linear transducers for transvaginal follicle aspiration. Efficacy of follicle aspiration was compared using a linear 6 MHz and a convex 5 MHz transducer. Fifty-five cows were submitted to follicle aspiration at random days of the estrous cycle. Aspirations were conducted with linear (n=28) and convex (n=38) transducers with 18 G needles at a negative pressure corresponding to 13 ml H(2)O/min. A greater number of follicles were aspirated using convex than to linear probe (12.4 versus 7.8, respectively, P<0.05). Mean number of oocytes and recovery rates were similar for convex (5.4 and 48.6%) and linear (4.6 and 59.3%) transducers. Limited space between the linear transducer and needle guide restricted access to some portions of the ovary, reducing the number of follicles aspirated using a linear transducer. The newly developed adaptor allowed greater stability, holding the ovaries firmly against the linear transducer. This diminished mobility permitted a similar number of oocytes to be recovered with both transducers. In conclusion, this new adaptor provided a low cost alternative for routine follicle aspiration and oocyte recovery in cattle.

Relationship between follicle size and ultrasound-guided transvaginal oocyte recovery.

We evaluated the relationship between follicle size and oocyte recovery (OR) using ultrasound-guided follicle aspiration. Thirty Holstein cows were subjected to OR without gonadotrophic therapy. Oocytes were recovered two to four times from each cow in a total of 67 aspiration sessions. Ovarian follicles with diameters < or =4 mm and >4 mm were aspirated in separated groups. Recovered oocytes from each group were kept separate and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture to the blastocyst stage. A total of 430 follicles were aspirated, of which 154 (35.8%) were from follicles >4 mm and 276 (64.2%) were from follicles < or =4 mm. Seventy-seven oocytes (50%) were recovered from follicles >4 mm and 200 (72.2%) were from follicles < or =4 mm. Nineteen blastocysts were obtained from follicles >4 mm, whereas 45 blastocysts were obtained from follicles < or =4 mm. Recovery rate was greater (P<0.01) in follicles < or =4 mm. Oocyte quality, cleavage rate and blastocyst development did not differ between different follicle sizes. Routine aspiration of small follicles (< or =4 mm) could increase the number of oocytes available for in vitro development.

Effect on insulin-like growth factor-1 during in vitro oocyte maturation and in vitro culture of bovine embryos / Efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-1 durante a maturação in vitro dos oócitos e cultivo in vitro de embriões bovinos

The effects of insulin-like growth factor-I (IGF-I) on in vitro maturation (IVM) (experiment I) and on in vitro embryo development (experiment II) of bovine oocytes fertilized in vitro, were evaluated in terms of cleavage (CR), blastocyst (BR) and hatching (HR) rates. For IVM, immature cumulus-oocyte complexes were cultured in TCM-199 medium supplemented with Hepes, sodium bicarbonate, sodium pyruvate, additives, fetal calf serum (B-199 medium) and gonadotropins (14 U/ml PMSG and 7 U/ml hCG). For embryo development, the oocytes/zygotes were cultured in B-199 medium with bovine oviduct epithelial cells in suspension under silicon oil. Treatments for in vitro culture conditions for both experiments were: 1- B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. All cultures were performed at 38.5oC in 5% CO2 in air and the data were analyzed by chi-square test. In experiment I, there were no differences (P>0.05) among treatments for CR, BR or HR. In experiment II, the addition of IGF-I to the embryo culture medium (ECM) resulted in a significant increase in CR while for BR and HR this effect was not observed. The addition of 200 ng/ml IGF-I to ECM increased CR (71.1%) when compared to 100 ng/ml IGF-I (57.6%) or control (56.7%) groups, however, there were no differences when compared to 50 (69.4%) or 10 ng/ml (73.1%) groups. There was no beneficial effect of the addition of IGF-I in the IVM or ECM media on the in vitro development of embryos produced from oocytes matured and fertilized in vitro. (AU)

Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturação in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosão (TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG). Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensão sob óleo de silicone. As condições de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5° C em atmosfera com 5% de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, não houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quando o meio de MIV foi suplementado com IGF-I. No experimento II, a adição de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas não influenciou a TB e a TE. A adição de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1%) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6%) ou controle (56,7%), entretanto não houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4%) ou 10 ng/ml (73,1%) de IGF-I. Não houve efeito benéfico na adição de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relação ao desenvolvimento de embriões produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro. (AU)

Effect on insulin-like growth factor-1 during in vitro oocyte maturation and in vitro culture of bovine embryos

Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturaçäo in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosäo(TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG. Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensäo sob óleo de silicone. As condiçöes de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5§C em atmosfera com 5(porcento) de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, näo houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quanto ao meio de MIV foi suplemento com IGF-I. No experimento II, a adiçäo de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas näo influenciou a TB e a TE. A adiçäo de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1(porcento)) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6(porcento)) ou controle (56,7(porcento)), entretanto näo houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4(porcento)) ou 10 ng/ml (73,1(porcento)) de IGF-I. Näo houve efeito benéfico na adiçäo de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relaçäo ao desenvolvimento de embriöes produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro

Detecçäo de subfertilidade em vacas leiteiras por meio de medidas anatômicas da regiäo pélvica e do aparelho genital / Evaluation of subfertility in dairy cows by measuring the pelvis and the genital tract

O objetivo deste estudo foi mensurar as regiöes que compöem a garupa da vaca leiteira, com aparelho desenvolvido para esse fim, e avaliar o efeito dessas variáveis na contaminaçäo intra-uterina e na eficiência reprodutiva (intervalos parto-primeiro cio e parto-primeira inseminaçäo, número de serviços por concepçäo e período de serviço). Foram usadas 252 vacas Holandesas, paridas há mais de 30 dias e näo inseminadas. Realizaram-se medidas anatômicas da regiäo pélvica e do aparelho genital e cultivo bacteriológico de material uterino. A influência das variáveis independentes (mensuraçöes) sobre a presença de contaminantes intra-uterinos foi analisada por meio de regressäo logística, a da presença de contaminantes intra-uterinos sobre a eficiência reprodutiva, por análise de variância, e a das variáveis independentes (mensuraçöes) sobre a eficiência reprodutiva por meio de regressao linear múltipla. A presença de contaminantes intra-uterinos näo foi influenciada por nenhuma das variáveis. Staphylococcus sp. (29,6 por cento) foi o microrganismo mais encontrado no material uterino, seguido por Actinomyces pyogenes (26,0 por cento), Streptococcus sp. (22,2 por cento) e coliformes (22,2 por cento), porém essa contaminaçäo nao teve efeito negativo nos índices reprodutivos. Das medidas anatômicas avaliadas, as que influenciaram as características reprodutivas foram: abertura do ílio (maior abertura menor eficiência reprodutiva), localizaçäo do óstio cranial da cérvice (quanto mais abdominal, piores os índices reprodutivos) e presença de urovagina (influência negativa na taxa de concepçäo)

Remoçäo do folículo dominante por aspiraçäo transvaginal guiada por ultra-som e resposta superovulatória em vacas Nelore / Dominant follicle removal by ultrasound guided transvaginal aspiration and superovulatory response in Nellore cows

O presente estudo analisou o significado fisiológico do folículo dominante (FD) e sua remoçäo na resposta superovulatória de 42 vacas Nelore e testou a hipótese de que o número de folículos subordinados pequenos (3-8mm) poderia ser usado como critério único para a avaliaçäo da presença ou ausência de um FD nos ovários. Exames ultra-sonográficos foram realizados dois dias antes do início do tratamento superovulatório (D0) e as vacas foram divididas em três grupos: grupo sem FD (SFD), grupo com FD (FD) e grupo com um FD aspirado (FDA). A resposta superovulatória das doadoras näo diferiu entre os grupos, mas a taxa de viabilidade embrionária foi maior nos grupos SFD (69,40 por cento) e FDA (68,99 por cento) grupos, comparados ao FD (48,54 por cento). O número de estruturas näo fertilizadas näo diferiu entre os grupos SFD e FD nem entre SFD e FDA, mas foi maior no grupo FD comparados ao FDA. Pode-se concluir que, em vacas Nelore, a determinaçäo do número de folículos subordinados é um critério seguro para a avaliaçäo da presença ou ausência de um FD nos ovários, mas erros poderiam ser evitados se apenas folículos de 4-8mm fossem considerados, e que a presença de um FD no início da superovulaçäo reduz a taxa de viabilidade embrionária e sua remoçäo por aspiraçäo transvaginal guiada por ultra-som induziu taxas de viabilidade embrionárias semelhantes àquelas observadas na ausência de um FD

Detecção de subfertilidade em vacas leiteiras por meio de medidas anatômicas da região pélvica e do aparelho genital

The objective of this study was to measure the dairy cow rump with an equipment especially developed for this purpose, and to evaluate the effect of these variables on intrauterine contamination and reproductive efficiency (intervals parturition-first estrus and parturition-first AI, services per conception and days open). Lactating Holstein cows (n=252) with more than 30 days post-partum were used in this study. Anatomical measurements of the pelvic region and reproductive tract, and bacteriological tests of uterine material were done. The influence of the independent variables (measurements) on the presence of intra-uterine contamination was analyzed through logistic regression, the effect of intra-uterine contamination on reproductive traits through analysis of variance, and the effect of independent variables (measurements) on reproductive traits was analyzed through multiple linear regression. The presence of intra-uterine contamination was not influenced by any variable. Staphylococcus sp. (29.6%) was the most important microorganism found in the uterine material, followed by Actinomyces pyogenes (26.0%), Streptococcus sp. (22.0%) and coliforms (22.0%). However, this contamination did not have negative effect on reproductive efficiency. The reproductive traits were influenced by some of the following anatomic variables: ilium opening (wider thurl then poorer reproductive efficiency), cervix front opening localization (the more abdominal, the poorer was the efficiency) and presence of urovagina (negative influence on conception rate).

O objetivo deste estudo foi mensurar as regiões que compõem a garupa da vaca leiteira, com aparelho desenvolvido para esse fim, e avaliar o efeito dessas variáveis na contaminação intra-uterina e na eficiência reprodutiva (intervalos parto-primeiro cio e parto-primeira inseminação, número de serviços por concepção e período de serviço). Foram usadas 252 vacas Holandesas, paridas há mais de 30 dias e não inseminadas. Realizaram-se medidas anatômicas da região pélvica e do aparelho genital e cultivo bacteriológico de material uterino. A influência das variáveis independentes (mensurações) sobre a presença de contaminantes intra-uterinos foi analisada por meio de regressão logística, a da presença de contaminantes intra-uterinos sobre a eficiência reprodutiva, por análise de variância, e a das variáveis independentes (mensurações) sobre a eficiência reprodutiva por meio de regressão linear múltipla. A presença de contaminantes intra-uterinos não foi influenciada por nenhuma das variáveis. Staphylococcus sp. (29,6%) foi o microrganismo mais encontrado no material uterino, seguido por Actinomyces pyogenes (26,0%), Streptococcus sp. (22,2%) e coliformes (22,2%), porém essa contaminação não teve efeito negativo nos índices reprodutivos. Das medidas anatômicas avaliadas, as que influenciaram as características reprodutivas foram: abertura do ílio (maior abertura menor eficiência reprodutiva), localização do óstio cranial da cérvice (quanto mais abdominal, piores os índices reprodutivos) e presença de urovagina (influência negativa na taxa de concepção).

Dominant follicle removal by ultrasound guided transvaginal aspiration and superovulatory response in Nellore cows

The present study analyzed the physiological significance of the dominant follicle (DF) and its removal on the superovulatory response of 42 Nellore cows and tested the hypothesis that the number of subordinate small follicles (3-8mm) could be used as a single criterion for the evaluation of the presence or absence of a DF in the ovaries. Ultrasonographic examinations were performed two days before the beginning of superovulatory treatment (D0) and the cows divided into three groups: group without DF (NDF), group with a DF (DF) and group with an aspirated DF (ADF). The superovulatory response of the donors did not differ between groups, but the rate of embryonic viability was higher in NDF (69.40%) and ADF (68.99%) groups compared to DF (48.54%). The number of unfertilized structures did not differ between NDF and DF or between NDF and ADF groups, but was higher in DF compared to ADF. It is concluded that, in Nellore cows, the number of subordinate follicles is a safe criterion for the evaluation of the presence of a DF in the ovaries, but errors could be avoided if only 4-8mm follicles were considered, and that the presence of a DF at the beginning of superovulation reduced the embryonic viability rate and its removal by transvaginal aspiration guided by ultrasound induced embryonic viability rates similar to that observed in the absence of a DF.

O presente estudo analisou o significado fisiológico do folículo dominante (FD) e sua remoção na resposta superovulatória de 42 vacas Nelore e testou a hipótese de que o número de folículos subordinados pequenos (3-8mm) poderia ser usado como critério único para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários. Exames ultra-sonográficos foram realizados dois dias antes do início do tratamento superovulatório (D0) e as vacas foram divididas em três grupos: grupo sem FD (SFD), grupo com FD (FD) e grupo com um FD aspirado (FDA). A resposta superovulatória das doadoras não diferiu entre os grupos, mas a taxa de viabilidade embrionária foi maior nos grupos SFD (69,40%) e FDA (68,99%) grupos, comparados ao FD (48,54%). O número de estruturas não fertilizadas não diferiu entre os grupos SFD e FD nem entre SFD e FDA, mas foi maior no grupo FD comparados ao FDA. Pode-se concluir que, em vacas Nelore, a determinação do número de folículos subordinados é um critério seguro para a avaliação da presença ou ausência de um FD nos ovários, mas erros poderiam ser evitados se apenas folículos de 4-8mm fossem considerados, e que a presença de um FD no início da superovulação reduz a taxa de viabilidade embrionária e sua remoção por aspiração transvaginal guiada por ultra-som induziu taxas de viablidade embrionárias semelhantes àquelas observadas na ausência de um FD.

Avaliaçäo das condiçöes de maturaçäo oocitária e do efeito do reprodutor na produçäo in vitro de embriöes bovinos / Evaluation of oocyte maturation conditions and bull effect on the in vitro bovine embryo production

Avaliaram-se as condiçöes de cultura para maturaçäo dos oócitos (Exp. I) e o efeito do reprodutor (Exp. II) sobre as taxas de clivagem (TC) e de mórulas e blastocistos (MO/BL) produzidos in vitro. Oócitos imaturos foram submetidos a maturaçäo in vitro sob diferentes condiçöes: meio B-199, acrescido de 5 por cento de soro de vaca em estro (SVE), 5 por cento de soro fetal bovino (SFB) e células da granulosa (T1 subscrito/Exp. I) ou meio B-199, acrescido de 10 por cento de SFB, 14 UI/ml de PMSG e 7 UI/ml de hCG (T2 subscrito/Exp I). Após 24 h de cultura, os oócitos maturos foram inseminados com sêmen descongelado de dois reprodutores (R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II) e, após 48 h de incubaçäo, os embriöes de 2 e 4 células foram transferidos para placas de cultivo in vitro, onde permaneceram em cultura por mais 9 dias. No Exp. I, os oócitos de T1 subscrito e T2 subscrito foram inseminados com sêmen do R1 subscrito/Exp. II. No Exp. II, os oócitos do T1 subscrito/Exp. I foram inseminados com sêmen de R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II. No Exp. I, a TC foi superior (p<0,0l) para T2 subscrito, quando comparado com T1 subscrito. A produçäo de MO/BL näo foi diferente (p>0,05) entre tratamentos. No Exp. II, a TC e a taxa de MO/BL diferiram (p<0,05) para cada reprodutor. A adiçäo de hormônios no meio de maturaçäo, embora näo tenha interferido na produçäo de embriöes, parece ser um procedimento mais prático que o uso de células da granulosa. A utilizaçäo de sêmen de diferentes reprodutores afetou o subseqüente desenvolvimento embrionário in vitro

Proteínas ligantes do insulin-like growth factor (IGFBPs) e dominância folicular em vacas Bos taurus indicus puras e cruzadas / Insulin-like growth factor-binding proteins and follicular dominance in Bos taurus indicus pure and crossed cows

O objetivo deste estudo foi identificar um marcador bioquímico de folículos bovinos com diâmetro maior do que 10 mm, o qual poderia ser utilizado para identificar folículos dominantes nesta espécie. Líquido folicular era aspirado de folículos com diâmetros menores do que 5 mm, entre 5 e 10 mm e maiores do que 10 mm, provenientes de ovários de 37 fêmeas bovinas abatidas. Após aspiraçäo, o líquido folicular (LF) era acondicionado em ependorfs etiquetados e congelados. Os padröes eletroforéticos em SDS-PAGE das proteínas do LF foram deteminados e verificou-se que os folículos com diâmetro maior do que 10 mm apresentaram um polipeptídeo com PM entre 39 e 43 KDa identificado como a proteína ligante de IGF-3 (IGFBP-3), o qual näo foi observado em folículos com diâmetro menor do que 5 mm e entre 5 e 10 mm. Este estudo sugere que este polipeptídeo possa ser utilizado como marcador bioquímico de folículos maiores do que 10 mm

Plasma concentrations of progesterone, 17beta-estradiol and androstenedione and superovulatory response of Nelore cows (Bos indicus) treated with FSH.

Progesterone (P(4)), 17beta- estradiol (E(2)) and androstenedione (A(4)) plasma concentrations were correlated with palpated corpora lutea (CL), recovered embryos and viable embryos in 13 Nelore cows induced to superovulate with FSH, starting on Day 10 of the estrous cycle. Administration of FSH increased the number of ovulations and recovered embryos. Plasma P(4), E(2) and A(4) levels on Day 0 and of P(4) on Days 10 and 11 of the cycle were not correlated with the superovulatory response. Determination of CL by palpation per rectum was used to estimate the number of recovered embryos. Plasma P(4) levels higher than 1 ng/ml on the induced estrus day (Day 14) had an adverse effect on the embryo viability rate. Plasma E(2) concentrations on Day 14 were positively correlated with the number of viable embryos collected, a correlation that has not been previously reported. The present data indicate that plasma P(4) and E(2) concentrations in FSH-PGF2alpha-treated Nelore cows are useful for the identification of 2 different populations of Nelore donors and are correlated with superovulatory response and, particularly, with the number of viable embryos.

Relationship between plasma 17-beta estradiol on the day of estrus and number of viable embryos in Bos indicus (Nellore) cows superovulated with FSH.

Thirteen cows, Bos indicus, of the Nellore breed were superovulated with 22 mg of follicle stimulating hormone (FSH) administered by intramuscular route during four consecutive days (D10, D11, D12 and D13), starting on the 10th day of the estrous cycle (day 0 = estrus). Prostaglandin (PGF2 alpha, 1.0 mg, im) was administered on D12, 48 h after the first FSH injection, for the induction of estrus on D14, when artificial insemination was performed. Seven days later (D21 of the cycle), embryos were collected, and evaluated, and the ovarian response was estimated on the basis of number of corpora lutea determined by rectal palpation. Blood samples were obtained for the determination of plasma 17-beta estradiol on D10, D11, D12, D13, D14 and D21 and plasma progesterone on D14 by RIA. The donors were divided into two groups according to progesterone levels on D14, the day of the induced estrus (GI: P4 < or = 1.00 ng/ml, N = 5 and GII: P4 > 1.00 ng/ml, N = 8). A linear positive correlation was observed between plasma 17-beta estradiol concentration on the day of estrus and viable embryo number. We conclude that plasma 17-beta estradiol and progesterone concentrations on the day of estrus can be used to predict the viability of embryos recovered from Nellore cows superovulated with FSH.

Relationship between plasma 17-beta estradiol on the day of estrus and number of viable embryos in Bos indicus (Nellore) cows superovulated with FSH

Thirteen cows, Bos indicus, of the Nellore breed were superovulated with 22 mg of follicle stimulating hormone (FSH) administered by intramuscular route during four consecutive days (D10, D11, D12 and D13), starting on the 10th day of the estrous cycle (day 0 = estrus). Prostaglandin (PGF2 alpha, 1.0 mg, im) was administered on D12, 48 h after the first FSH injection, for the induction of estrus on D14, when artificial insemination was performed. Seven days later (D21 of the cycle), embryos were collected, and evaluated, and the ovarian response was estimated on the basis of number of corpora lutea determined by rectal palpation. Blood samples were obtained for the determination of plasma 17-beta estradiol on D10, D11, D12, D13, D14 and D21 and plasma progesterone on D14 by RIA. The donors were divided into two groups according to progesterone levels on D14, the day of the induced estrus (GI: P4 < or = 1.00 ng/ml, N = 5 and GII: P4 > 1.00 ng/ml, N = 8). A linear positive correlation was observed between plasma 17-beta estradiol concentration on the day of estrus and viable embryo number. We conclude that plasma 17-beta estradiol and progesterone concentrations on the day of estrus can be used to predict the viability of embryos recovered from Nellore cows superovulated with FSH.