Chronic Pulmonary Aspergillosis in Patients with Underlying Respiratory Disorders in Cuba-A Pilot Study.

Chronic pulmonary aspergillosis (CPA) is a fungal infection with high mortality and morbidity rates. This disease is caused by several Aspergillus species and affects patients with an underlying respiratory condition. This pilot study aims to recognize CPA among patients with different respiratory diseases. Twenty-one out of 47 patients were classified as CPA based on the examination of clinical signs and symptoms, radiological findings, mycological culture of respiratory samples and analysis of Aspergillus IgG antibodies. There was a close association between high levels of Aspergillus IgG antibodies and the presence of cavities. Although Aspergillus flavus was the predominant species among clinical isolates, the number of isolates was small to reach conclusions on the prevalence of this species as main cause of CPA in Cuba. From the eleven evaluable patients for the treatment with itraconazole (Lozartil®), nine improved their health status while two did not show any recovery. This drug is included in the therapy schemes for aspergillosis in Cuba.

Aportes del Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí al desarrollo de la especialidad en Cuba / Contributions of the Mycology Laboratory at Pedro Kouri Tropical Medicine Institute to the development of the specialty in Cuba

En el marco del 80 aniversario del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, se exponen en apretada síntesis, las actividades más relevantes en el campo del diagnóstico, la investigación y la docencia desarrolladas hasta el momento por el Laboratorio de Micología de la referida institución. A 38 años de su creación, este sigue siendo uno de los pocos lugares en Cuba que se desempeña en este campo y que se reconoce por los logros científico-técnicos alcanzados. Sin lugar a duda, estos responden básicamente al cuadro de salud nacional, sin descuidar el entorno regional y mundial. Todos los resultados que se exponen, se encuentran sustentados por más de 100 publicaciones y otras obras científicas, lo que avala la calidad y rigor del trabajo desplegado. Sirva este artículo para homenajear al fundador del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí y a todos los científicos que en el transcurso de estos años contribuyeron a engrandecer su nombre(AU)

In the framework of the 80th anniversary of Pedro Kouri Tropical Medicine Institute, a succinct presentation is provided of the most relevant activities in the fields of diagnosis, research and teaching so far performed by the Mycology Laboratory at the Institute. Thirty-eight years after its founding, the Laboratory continues to be one of the few places in Cuba devoted to this field and recognized for its scientific and technical achievements, which no doubt essentially respond to the national health status, without neglecting the regional and global environment. All the results presented are endorsed by over 100 publications and scientific works, which is evidence of the quality and rigor of the work done. May this paper be a tribute to the founder of Pedro Kouri Tropical Medicine Institute and all the scientists who have brought prestige to its name throughout these years(AU)

Presentación de siete casos de tiña negra en niños / Reports of seven cases of tinea nigra in children

Introducción: la tiña negra es una micosis superficial causada por el hongo Hortaea werneckii. Se considera una micosis benigna que por lo general es observada en países tropicales. Objetivo: reportar siete casos de tiña negra en niños de dos hospitales de La Habana, Cuba. Métodos: se realizó estudio micológico (examen directo y cultivo) a partir de escamas tomadas mediante raspado de las lesiones a siete niños con diagnóstico clínico presuntivo de tiña negra palmar. Se registraron las características de las lesiones, edad, sexo y factores predisponentes de los pacientes, así como la evolución del cuadro con el tratamiento antifúngico. Resultados: se confirmó la sospecha clínica de tiña negra a través del aislamiento e identificación de Hortae werneckii. Las edades de los pacientes oscilaron entre 3 y 6 años y el 57 por ciento era del sexo femenino. La hiperhidrosis se encontró en el 43 por ciento de los casos. El tratamiento específico con antifúngicos azólicos y terbinafina tópicos fue satisfactorio en 21 días como promedio. Conclusiones: todos los casos con sospecha de tiña negra fueron confirmados de manera oportuna en el laboratorio, lo que permitió descartar enfermedades malignas y aplicar tratamiento específico(AU)

Presentación de siete casos de tiña negra en niños / Reports of seven cases of tinea nigra in children

Introducción: la tiña negra es una micosis superficial causada por el hongo Hortaea werneckii. Se considera una micosis benigna que por lo general es observada en países tropicales. Objetivo: reportar siete casos de tiña negra en niños de dos hospitales de La Habana, Cuba. Métodos: se realizó estudio micológico (examen directo y cultivo) a partir de escamas tomadas mediante raspado de las lesiones a siete niños con diagnóstico clínico presuntivo de tiña negra palmar. Se registraron las características de las lesiones, edad, sexo y factores predisponentes de los pacientes, así como la evolución del cuadro con el tratamiento antifúngico. Resultados: se confirmó la sospecha clínica de tiña negra a través del aislamiento e identificación de Hortae werneckii. Las edades de los pacientes oscilaron entre 3 y 6 años y el 57 por ciento era del sexo femenino. La hiperhidrosis se encontró en el 43 por ciento de los casos. El tratamiento específico con antifúngicos azólicos y terbinafina tópicos fue satisfactorio en 21 días como promedio. Conclusiones: todos los casos con sospecha de tiña negra fueron confirmados de manera oportuna en el laboratorio, lo que permitió descartar enfermedades malignas y aplicar tratamiento específico(AU)

Introduction: tinea nigra is a superficial mycosis caused by the fungus Hortaea werneckii. It is considered a benign fungal infection and usually observed in tropical countries. Objective: to report seven cases of tinea nigra in children in two hospitals of Havana, Cuba. Methods: a mycological study (direct examination and culture) was made from skin scales from scraping injuries to seven children with presumptive clinical diagnosis of tinea nigra palmaris. The characteristics of the injury, age, sex and predisposing factors of patients were recorded, as well as the conditions natural history under antifungal treatment. Results: clinical suspicion of tinea nigra was confirmed through the isolation and identification of Hortae werneckii. The ages of the patients ranged from 3 to 6 years and 57 percent were female. Hyperhidrosis was found in 43 percent of the cases. Specific treatment with topical azole antifungal drugs and terbinafine was satisfactory in 21 days averagely. Conclusions: all cases suspected of tinea nigra were timely confirmed in the laboratory, a fact that permitted ruling out malignant diseases and applying specific treatment(AU)

Evaluación de cuatro métodos de extracción del ADN de Histoplasma capsulatum y su uso en reacciones de PCR / Evaluation of four Histoplasma capsulatum DNA extraction methods and their use in PCR reactions

Histoplasma capsulatum es un hongo endémico de Cuba y el agente causal de la histoplasmosis. Estamicosis se presenta en forma de brotes epidémicos, afecta a las personas, independiente de su estadoinmunológico. Su diagnóstico se realiza mediante técnicas microbiológicas, serológicas e histológicas quetienen una sensibilidad moderada y son demoradas. Por lo que se hace necesario la estandarización demétodos moleculares rápidos y eficientes para el diagnóstico de esta micosis. Se evaluaron cuatro métodosde extracción del ADN (enzimático, mecánico y dos químicos: tiocianato de guanidinio y Tritón X-100) a partirde una cepa de H. capsulatum en fase filamentosa. Se determinó la concentración, la pureza, el rendimientoy la integridad del ADN mediante espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa. Se evaluaron dostécnicas de PCR con el ADN obtenido, con cebadores específicos de especie y otro con un cebador arbitrario. Los mejores resultados de concentración, pureza, rendimiento e integridad se obtuvieron con el método de extracción enzimático. Se logró la estandarización de las PCR con cebadores específicos,confirmándose así las 16 cepas estudiadas como H capsulatum. Con el cebador arbitrario se amplificaronsecuencias diferentes en las cepas ensayadas. Se demostró que el método de extracción enzimática brindóun ADN de buena calidad para su utilización en PCR. Este trabajo facilita el diagnóstico rápido y confiablede H. capsulatum en Cuba y brinda la posibilidad de identificar cepas con estructuras relacionadas genéticamente con los marcadores de patogenicidad y la virulencia, útiles para conformar un inmunógenovacunal(AU)

Histoplasma capsulatum is a fungus endemic from Cuba and it is the etiologic agent of histoplasmosis.This mycosis appears as epidemic outbreaks and affects people regardless their immunological status.Diagnosis of histoplasmosis is based on microbiological, histopathological and serological methods, which show moderated sensitivity or are time-consuming. Rapid and efficient molecular tools are highly demanding. Four DNA extraction methods (enzymatic, mechanic, and two chemistry: guanidine tiocianateand TX-100) were evaluated from a H. capsulatum strain in the mold phase. DNA concentration, purity,integrity and yield were estimated by spectrophotometry and agarose gel electrophoresis. Two PCRtechniques were tested using specific and arbitrary primers. The best DNA extraction method results wereobtained with the enzymatic procedure. Sixteen different Cuban H. capsulatum strains were confirmed by the PCR standardized with specific primers. Different sequences were amplified using the arbitrary primer. The enzymatic protocol is the best option for obtaining a good quality DNA for molecular analysis. This work has created a platform a faster and reliable diagnosis of H capsulatum in Cuba, and provides the ability to identify strains with genetically related structure of pathogenicity and virulence markers useful as vaccine immunogen(AU)

Conservación de cultivos de hongos de importancia médica en agua destilada / Preservation of fungal cultures of medical importance in distilled water

Introducción: en la colección de cultivos de hongos patógenos del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, como centro de referencia nacional, se conservan los agentes causales de las principales micosis humanas, con fines de diagnóstico, investigaciones y enseñanza de la microbiología médica. La conservación de cultivos fúngicos en agua destilada estéril o método de Castellani ha sido avalada como un método que garantiza porcentajes elevados de viabilidad, pureza y estabilidad de las cepas; esto unido a su bajo costo y sencillez, la convierte en una alternativa ventajosa para el mantenimiento de los microorganismos en muchos laboratorios. Objetivo: mostrar los resultados en la preservación en agua destilada estéril de las principales especies fúngicas que integran esta colección. Métodos: se evaluó la viabilidad, pureza y estabilidad de las principales características morfológicas y fisiológicas de 240 cepas de diferentes especies fúngicas pertenecientes a la colección, conservadas en agua destilada estéril. Resultados: de los cultivos, 80 por ciento se conservó en estado viable y sin contaminaciones. Los mejores resultados se obtuvieron en la preservación de los hongos productores de abundantes conidios (97 por ciento de recuperación) y las levaduras (83 por ciento), mientras que con los dermatofitos y hongos dimórficos fue de 69 y 68 por ciento, respectivamente. En 17 géneros, la recuperación de cepas viables fue superior a 60 por ciento, mientras que en 8 resultó de 100 por ciento. El tiempo de conservación fue de 15 a 20 años. Se implementó una base de datos en formato digital de la colección sobre plataforma web. Conclusiones: el método de Castellani es un método de elección para la conservación de cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados

Introduction: causal agents of the main human myicoses have been preserved in the culture collection of pathogenic fungi at Pedro Kourí Tropical Medicine Institute, a national reference center, with the purpose of using them for medical microbiology diagnoses, research and teaching. Preservation of fungal cultures in sterile distilled water, or Castellani's method, has been endorsed as a method ensuring high rates of strain viability, purity and stability, low costs and great simplicity. It is therefore an advantageous alternative for the maintenance of microorganisms in many laboratories. Objective: present the results obtained from the preservation in sterile distilled water of the main fungal species included in the collection. Methods: an evaluation was conducted of the viability, purity and stability of the main morphological and physiological characteristics of 240 strains of different fungal species from the collection, which had been preserved in sterile distilled water. Results: 80 percent of the cultures had retained their viable status without any contamination. The best results corresponded to the preservation of fungi producing abundant conidia (97 percent recovery) and yeasts (83 percent), followed by dermatophytes (69 percent) and dimorphic fungi (68 percent). In 8 genera, recovery of viable strains was 100 percent, and in 17 it was above 60 percent. Preservation time was 15-20 years. A web-based digital database was created for the collection. Conclusions: Castellani's is the method of choice for the preservation of fungal cultures in resource-limited laboratories

Conservación de cultivos de hongos de importancia médica en agua destilada / Preservation of fungal cultures of medical importance in distilled water

Introducción: en la colección de cultivos de hongos patógenos del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, como centro de referencia nacional, se conservan los agentes causales de las principales micosis humanas, con fines de diagnóstico, investigaciones y enseñanza de la microbiología médica. La conservación de cultivos fúngicos en agua destilada estéril o método de Castellani ha sido avalada como un método que garantiza porcentajes elevados de viabilidad, pureza y estabilidad de las cepas; esto unido a su bajo costo y sencillez, la convierte en una alternativa ventajosa para el mantenimiento de los microorganismos en muchos laboratorios. Objetivo: mostrar los resultados en la preservación en agua destilada estéril de las principales especies fúngicas que integran esta colección. Métodos: se evaluó la viabilidad, pureza y estabilidad de las principales características morfológicas y fisiológicas de 240 cepas de diferentes especies fúngicas pertenecientes a la colección, conservadas en agua destilada estéril. Resultados: de los cultivos, 80 por ciento se conservó en estado viable y sin contaminaciones. Los mejores resultados se obtuvieron en la preservación de los hongos productores de abundantes conidios (97 por ciento de recuperación) y las levaduras (83 por ciento), mientras que con los dermatofitos y hongos dimórficos fue de 69 y 68 por ciento, respectivamente. En 17 géneros, la recuperación de cepas viables fue superior a 60 por ciento, mientras que en 8 resultó de 100 por ciento. El tiempo de conservación fue de 15 a 20 años. Se implementó una base de datos en formato digital de la colección sobre plataforma web. Conclusiones: el método de Castellani es un método de elección para la conservación de cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados(AU)

Introduction: causal agents of the main human myicoses have been preserved in the culture collection of pathogenic fungi at Pedro Kourí Tropical Medicine Institute, a national reference center, with the purpose of using them for medical microbiology diagnoses, research and teaching. Preservation of fungal cultures in sterile distilled water, or Castellani's method, has been endorsed as a method ensuring high rates of strain viability, purity and stability, low costs and great simplicity. It is therefore an advantageous alternative for the maintenance of microorganisms in many laboratories. Objective: present the results obtained from the preservation in sterile distilled water of the main fungal species included in the collection. Methods: an evaluation was conducted of the viability, purity and stability of the main morphological and physiological characteristics of 240 strains of different fungal species from the collection, which had been preserved in sterile distilled water. Results: 80 percent of the cultures had retained their viable status without any contamination. The best results corresponded to the preservation of fungi producing abundant conidia (97 percent recovery) and yeasts (83 percent), followed by dermatophytes (69 percent) and dimorphic fungi (68 percent). In 8 genera, recovery of viable strains was 100 percent, and in 17 it was above 60 percent. Preservation time was 15-20 years. A web-based digital database was created for the collection. Conclusions: Castellani's is the method of choice for the preservation of fungal cultures in resource-limited laboratories(AU)

Conservación de cultivos de hongos de importancia médica en agua destilada / Preservation of fungal cultures of medical importance in distilled water

Introducción: en la colección de cultivos de hongos patógenos del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, como centro de referencia nacional, se conservan los agentes causales de las principales micosis humanas, con fines de diagnóstico, investigaciones y enseñanza de la microbiología médica. La conservación de cultivos fúngicos en agua destilada estéril o método de Castellani ha sido avalada como un método que garantiza porcentajes elevados de viabilidad, pureza y estabilidad de las cepas; esto unido a su bajo costo y sencillez, la convierte en una alternativa ventajosa para el mantenimiento de los microorganismos en muchos laboratorios. Objetivo: mostrar los resultados en la preservación en agua destilada estéril de las principales especies fúngicas que integran esta colección. Métodos: se evaluó la viabilidad, pureza y estabilidad de las principales características morfológicas y fisiológicas de 240 cepas de diferentes especies fúngicas pertenecientes a la colección, conservadas en agua destilada estéril. Resultados: de los cultivos, 80 port ciento se conservó en estado viable y sin contaminaciones. Los mejores resultados se obtuvieron en la preservación de los hongos productores de abundantes conidios (97 por ciento de recuperación) y las levaduras (83 por ciento), mientras que con los dermatofitos y hongos dimórficos fue de 69 y 68 por ciento, respectivamente. En 17 géneros, la recuperación de cepas viables fue superior a 60 por ciento, mientras que en 8 resultó de 100 por ciento. El tiempo de conservación fue de 15 a 20 años. Se implementó una base de datos en formato digital de la colección sobre plataforma web. Conclusiones: el método de Castellani es un método de elección para la conservación de cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados(AU)

Introduction: causal agents of the main human myicoses have been preserved in the culture collection of pathogenic fungi at Pedro KourÍ Tropical Medicine Institute, a national reference center, with the purpose of using them for medical microbiology diagnoses, research and teaching. Preservation of fungal cultures in sterile distilled water, or Castellani's method, has been endorsed as a method ensuring high rates of strain viability, purity and stability, low costs and great simplicity. It is therefore an advantageous alternative for the maintenance of microorganisms in many laboratories. Objective: present the results obtained from the preservation in sterile distilled water of the main fungal species included in the collection. Methods: an evaluation was conducted of the viability, purity and stability of the main morphological and physiological characteristics of 240 strains of different fungal species from the collection, which had been preserved in sterile distilled water. Results: 80 percent of the cultures had retained their viable status without any contamination. The best results corresponded to the preservation of fungi producing abundant conidia (97 percent recovery) and yeasts (83 percent), followed by dermatophytes (69 percent) and dimorphic fungi (68 percent). In 8 genera, recovery of viable strains was 100 percent, and in 17 it was above 60 percent. Preservation time was 15-20 years. A web-based digital database was created for the collection. Conclusions: Castellani's is the method of choice for the preservation of fungal cultures in resource-limited laboratories(AU)

Contribución al estudio de la criptococosis infantil en Cuba / Contribution to the study of infant cryptococosis in Cuba

Introducción: a partir de 1998 en el laboratorio de micología del Instituto Pedro Kourí se observó un incremento del número de aislamientos de Cryptococcus obtenidos de niños seronegativos al VIH con meningoencefalitis. Los reportes de criptococosis infantil a nivel mundial son infrecuentes y generalmente se encuentran asociados al sida. Objetivo: estudiar la criptococosis infantil en Cuba a través de la evaluación integral de 7 casos. Métodos: se realizó un estudio retrospectivo integral, se revisaron las historias clínicas de 7 pacientes pediátricos afectados por criptococosis menigoencefálica y se caracterizaron los aislamientos obtenidos (uno de cada paciente). A estos se les determinó la especie, variedad, serotipo, patogenicidad en un modelo murino y susceptibilidad a la anfotericina B. Resultados: la edad media de los niños fue de 5,8 años, con ligero predominio del sexo femenino (4:3). Los síntomas más frecuentes resultaron la cefalea, fotofobia, fiebre y los vómitos. En 6 pacientes el estudio citoquímico del líquido cefalorraquídeo y el examen imaginológico de cráneo evidenciaron anomalías. El diagnóstico microbiológico se realizó mediante examen directo y cultivo. Todos los aislamientos correspondieron con Cryptococcus neoformans serotipo A y la anfotericina B mostró una concentración mínima inhibitoria menor o igual que 0,125 mg/mL. El 85,7 porciento mostró actividad fenoloxidasa y elevada letalidad en los animales infectados (71,4-100 porciento). Conclusiones: el pronóstico de la meningoencefalitis por Cryptococcus está estrechamente ligado a un diagnóstico precoz. Esta realidad hace que deba tenerse siempre presente, por lo que los datos aportados bien pudieran servir de alerta a los médicos de asistencia(AU)

Introduction: since 1998, an increasing number of Cryptococcus isolates obtained from HIV-negative children with meningoencephalitis was observed in the mycology laboratory at Pedro Kourí Institute. The global reports of child cryptococcosis are rare and usually associated with AIDS. Objectives: to study child cryptococosis in Cuba through the comprehensive evaluation of 7 cases. Methods: the clinical histories of seven pediatric patients with cryptococcal meningoencephalitis were examined and the obtained isolates (one per patient) were characterized. The species, variety, serotype, pathogenicity in a mouse model and amphotericin B susceptibility of the isolates were determined. Results: average age of the children was 5.8 years, with a slight female predominance (4:3). The most common symptoms were headache, photophobia, fever and vomiting. The cytochemical study of cerebral spinal fluid and skull imaging test showed abnormalities in 6 patients. The microbiological diagnosis was made through direct examination and culture. All the isolates were from Cryptococcus neoformans serotype A and amphotericin B showed a minimum inhibitory concentration £ 0.125 mg/mL. In the group, 85.7 percent showed phenoloxidase activity and high lethality rate in infected animals (71.4 to 100 percent). Conclusions: the prognosis of cryptococcal meningoencephalitis is closely linked to early diagnosis, therefore, this should be always kept in mind and the provided data from this study may serve as warning to attending physicians(AU)

Contribución al estudio de la criptococosis infantil en Cuba / Contribution to the study of infant cryptococosis in Cuba

Introducción: a partir de 1998 en el laboratorio de micología del Instituto Pedro Kourí se observó un incremento del número de aislamientos de Cryptococcus obtenidos de niños seronegativos al VIH con meningoencefalitis. Los reportes de criptococosis infantil a nivel mundial son infrecuentes y generalmente se encuentran asociados al sida. Objetivo: estudiar la criptococosis infantil en Cuba a través de la evaluación integral de 7 casos. Métodos: se realizó un estudio retrospectivo integral, se revisaron las historias clínicas de 7 pacientes pediátricos afectados por criptococosis menigoencefálica y se caracterizaron los aislamientos obtenidos (uno de cada paciente). A estos se les determinó la especie, variedad, serotipo, patogenicidad en un modelo murino y susceptibilidad a la anfotericina B. Resultados: la edad media de los niños fue de 5,8 años, con ligero predominio del sexo femenino (4:3). Los síntomas más frecuentes resultaron la cefalea, fotofobia, fiebre y los vómitos. En 6 pacientes el estudio citoquímico del líquido cefalorraquídeo y el examen imaginológico de cráneo evidenciaron anomalías. El diagnóstico microbiológico se realizó mediante examen directo y cultivo. Todos los aislamientos correspondieron con Cryptococcus neoformans serotipo A y la anfotericina B mostró una concentración mínima inhibitoria menor o igual que 0,125 mg/mL. El 85,7 porciento mostró actividad fenoloxidasa y elevada letalidad en los animales infectados (71,4-100 porciento). Conclusiones: el pronóstico de la meningoencefalitis por Cryptococcus está estrechamente ligado a un diagnóstico precoz. Esta realidad hace que deba tenerse siempre presente, por lo que los datos aportados bien pudieran servir de alerta a los médicos de asistencia

Introduction: since 1998, an increasing number of Cryptococcus isolates obtained from HIV-negative children with meningoencephalitis was observed in the mycology laboratory at Pedro Kourí Institute. The global reports of child cryptococcosis are rare and usually associated with AIDS. Objectives: to study child cryptococosis in Cuba through the comprehensive evaluation of 7 cases. Methods: the clinical histories of seven pediatric patients with cryptococcal meningoencephalitis were examined and the obtained isolates (one per patient) were characterized. The species, variety, serotype, pathogenicity in a mouse model and amphotericin B susceptibility of the isolates were determined. Results: average age of the children was 5.8 years, with a slight female predominance (4:3). The most common symptoms were headache, photophobia, fever and vomiting. The cytochemical study of cerebral spinal fluid and skull imaging test showed abnormalities in 6 patients. The microbiological diagnosis was made through direct examination and culture. All the isolates were from Cryptococcus neoformans serotype A and amphotericin B showed a minimum inhibitory concentration £ 0.125 mg/mL. In the group, 85.7 percent showed phenoloxidase activity and high lethality rate in infected animals (71.4 to 100 percent). Conclusions: the prognosis of cryptococcal meningoencephalitis is closely linked to early diagnosis, therefore, this should be always kept in mind and the provided data from this study may serve as warning to attending physicians

Conservación de cultivos fúngicos de alto riesgo de Histoplasma y Cryptococcus / Preservation of high risk fungal cultures of Histoplasma and Cryptococcus

Introducción: las colecciones de cultivos microbianos son las encargadas de garantizar el material biológico requerido para el desarrollo de las ciencias biológicas. Entre los métodos de conservación de cultivos fúngicos, la inmersión en agua destilada, por su bajo costo y sencillez, constituye una ventajosa alternativa. Objetivo: evaluar la utilidad de este método de conservación en los cultivos fúngicos de Histoplasma y Cryptococcus. Métodos: se realizó una evaluación del estado de conservación de las especies de mayor riesgo biológico, pertenecientes a los géneros Histoplasma y Cryptococcus de la colección de cultivos de hongos del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. Se analizaron 102 cepas conservadas en agua destilada, de las cuales 92 por ciento estaba preservado por más de 10 años. Resultados: los porcentajes de recuperación para H. capsulatum, C. neoformans y C. gattii fueron 64,3; 79,1 y 100 por ciento, respectivamente. Se demostró que este método de conservación resulta satisfactorio para cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados. Se implementó sobre plataforma web una base de datos digital con la información de interés de la colección. Se hizo una valoración de la importancia del estricto cumplimiento de las medidas de bioseguridad para el trabajo de las colecciones, especialmente frente a patógenos de alto riesgo. Conclusiones: la conservación de cultivos de hongos en agua destilada es un método de gran utilidad en laboratorios de recursos limitados. El trabajo de las colecciones de cultivos debe considerarse una actividad imprescindible para enfrentar los nuevos retos del desarrollo de las ciencias biomédicas(AU)

Introduction: culture collections are responsible for providing the microbial resources for development of biological sciences. Storage in distilled water is one of the easiest and least expensive method for long-term fungal preservation. Objective: to evaluate the usefulness of this preservation method in fungal culture of Histoplasma and Cryptococcus. Methods: the preservation condition of the highest biological risk species from Histoplasma y Cryptococcus genera, included in the fungal culture collection of Pedro Kourí Institute of Tropical Medicine in Havana, was evaluated in this study. One hundred and two strains stored in distilled water, 92 percent of which had been preserved for more than 10 years, were analyzed. Results: the percentages of recovered strains from H. capsulatum, C. neoformans and C. gattii were 64.3 percent; 79.1 percent and 100 percent respectively. This method of preservation proved to be satisfactory for fungal culture in labs with limited financial resources. A web-based database with interesting information about the collection was made. The importance of strict compliance with the biosafety measures in these collections, particularly with high risk pathogens. Conclusions: preservation of fungal cultures in distilled water is a very useful method for laboratories with limited resources. Culture collections should be assumed as an essential activity in order to solve increasing challenges in the development of biomedical sciences(AU)

Conservación de cultivos fúngicos de alto riesgo de Histoplasma y Cryptococcus / Preservation of high risk fungal cultures of Histoplasma and Cryptococcus

Introducción: las colecciones de cultivos microbianos son las encargadas de garantizar el material biológico requerido para el desarrollo de las ciencias biológicas. Entre los métodos de conservación de cultivos fúngicos, la inmersión en agua destilada, por su bajo costo y sencillez, constituye una ventajosa alternativa. Objetivo: evaluar la utilidad de este método de conservación en los cultivos fúngicos de Histoplasma y Cryptococcus. Métodos: se realizó una evaluación del estado de conservación de las especies de mayor riesgo biológico, pertenecientes a los géneros Histoplasma y Cryptococcus de la colección de cultivos de hongos del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Se analizaron 102 cepas conservadas en agua destilada, de las cuales 92 por ciento estaba preservado por más de 10 años. Resultados: los porcentajes de recuperación para H. capsulatum, C. neoformans y C. gattii fueron 64,3; 79,1 y 100 por ciento, respectivamente. Se demostró que este método de conservación resulta satisfactorio para cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados. Se implementó sobre plataforma web una base de datos digital con la información de interés de la colección. Se hizo una valoración de la importancia del estricto cumplimiento de las medidas de bioseguridad para el trabajo de las colecciones, especialmente frente a patógenos de alto riesgo. Conclusiones: la conservación de cultivos de hongos en agua destilada es un método de gran utilidad en laboratorios de recursos limitados. El trabajo de las colecciones de cultivos debe considerarse una actividad imprescindible para enfrentar los nuevos retos del desarrollo de las ciencias biomédicas.

Introduction: culture collections are responsible for providing the microbial resources for development of biological sciences. Storage in distilled water is one of the easiest and least expensive method for long-term fungal preservation. Objective: to evaluate the usefulness of this preservation method in fungal culture of Histoplasma and Cryptococcus. Methods: the preservation condition of the highest biological risk species from Histoplasma y Cryptococcus genera, included in the fungal culture collection of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine in Havana, was evaluated in this study. One hundred and two strains stored in distilled water, 92 percent of which had been preserved for more than 10 years, were analyzed. Results: the percentages of recovered strains from H. capsulatum, C. neoformans and C. gattii were 64.3 percent; 79.1 percent and 100 percent respectively. This method of preservation proved to be satisfactory for fungal culture in labs with limited financial resources. A web-based database with interesting information about the collection was made. The importance of strict compliance with the biosafety measures in these collections, particularly with high risk pathogens. Conclusions: preservation of fungal cultures in distilled water is a very useful method for laboratories with limited resources. Culture collections should be assumed as an essential activity in order to solve increasing challenges in the development of biomedical sciences.

Efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 en la infección experimental por Cryptococcus neoformans / Effect of 4B3 monoclonal antibody on the experimental Cryptococcus neoformans infection

Introducción: las frecuencias de recaídas y elevada letalidad de la criptococosis se mantienen altas, lo cual incentiva la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas. Objetivos: evaluar el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la infección criptocócica en ratones BALB/c. Métodos: se determinó la cinética de la concentración sérica del anticuerpo monoclonal para su administración intraperitoneal (500 Ág), que fue medida por ELISA cuantitativo de doble anticuerpo. La capacidad protectora se observó mediante el registro de supervivencia de ratones BALB/c administrados con 500 Ág de anticuerpo monoclonal 4B3 e inoculados con 2 x 10(2,2) células/mL de Cryptococcus neoformans, así como por evaluación de la diseminación de la levadura a los principales órganos diana. Se identificó el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la fagocitosis y lisis del microorganismo por células de la línea de macrófagos P338.D1. Resultados: la dosis empleada fue suficiente para mantener valores séricos elevados del 4B3 (38 Ág/mL) durante al menos 46 d. Se determinó que el 4B3 no confiere protección, lo cual potencia la diseminación del microorganismo y disminuye el tiempo de vida de los animales. El ensayo de fagocitosis mostró que el anticuerpo evaluado incrementa la actividad fagocítica de los macrófagos sin lograr un efecto fungicida. Conclusiones: el anticuerpo monoclonal 4B3 estimula la fagocitosis de C. neoformans por macrófagos, pero sin efecto fungicida. Con ello favorece la diseminación de la levadura y disminuye el tiempo de vida de los ratones a la infección(AU)

Introduction: frequent relapses and high lethality of criptococcosis has encouraged the search for new therapeutic strategies. Objectives: to evaluate the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the cryptococcal infection in Balb/c mice. Methods: the kinetics in serum concentration of the studied monoclonal antibody was determined for intraperitoneal administration (500 Ág) by quantitative sandwich ELISA. In order to assess its protective capability, were administered 500 Ág of 4B3 and innoculated 2 x 10(2.2) cells/mL of Cryptococcus neoformans. The survival of mice was recorded and the yeast dissemination to the main target organs was evaluated. Macrophages P338.D1 cell lines were used to measure the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the phagocytosis and lysis of the microorganism. Results: the used dose helped to keep high values (38 Ág/m) of 4B3 in serum for at least 46 days. It was found that the monoclonal antibody does not give protection, which makes the microorganism dissemination possible, along with the reduction in the survival of mice. Finally, the phagocytosis test showed that 4B3 increased the phagocytic activity of macrophages without any fungicidal effect. Conclusions: the monoclonal antibody 4B3 stimulates C. neoformans phagocytosis by macrophages without fungicidal effect, thus favoring yeast dissemination and decreasing the survival of mice due to cryptococcal infection(AU)

Efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 en la infección experimental por Cryptococcus neoformans / Effect of 4B3 monoclonal antibody on the experimental Cryptococcus neoformans infection

Introducción: las frecuencias de recaídas y elevada letalidad de la criptococosis se mantienen altas, lo cual incentiva la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas. Objetivos: evaluar el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la infección criptocócica en ratones BALB/c. Métodos: se determinó la cinética de la concentración sérica del anticuerpo monoclonal para su administración intraperitoneal (500 µg), que fue medida por ELISA cuantitativo de doble anticuerpo. La capacidad protectora se observó mediante el registro de supervivencia de ratones BALB/c administrados con 500 µg de anticuerpo monoclonal 4B3 e inoculados con 2 x 10(2,2) células/mL de Cryptococcus neoformans, así como por evaluación de la diseminación de la levadura a los principales órganos diana. Se identificó el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la fagocitosis y lisis del microorganismo por células de la línea de macrófagos P338.D1. Resultados: la dosis empleada fue suficiente para mantener valores séricos elevados del 4B3 (38 µg/mL) durante al menos 46 d. Se determinó que el 4B3 no confiere protección, lo cual potencia la diseminación del microorganismo y disminuye el tiempo de vida de los animales. El ensayo de fagocitosis mostró que el anticuerpo evaluado incrementa la actividad fagocítica de los macrófagos sin lograr un efecto fungicida. Conclusiones: el anticuerpo monoclonal 4B3 estimula la fagocitosis de C. neoformans por macrófagos, pero sin efecto fungicida. Con ello favorece la diseminación de la levadura y disminuye el tiempo de vida de los ratones a la infección.

Introduction: frequent relapses and high lethality of criptococcosis has encouraged the search for new therapeutic strategies. Objectives: to evaluate the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the cryptococcal infection in Balb/c mice. Methods: the kinetics in serum concentration of the studied monoclonal antibody was determined for intraperitoneal administration (500 µg) by quantitative sandwich ELISA. In order to assess its protective capability, were administered 500 µg of 4B3 and innoculated 2 x 10(2.2) cells/mL of Cryptococcus neoformans. The survival of mice was recorded and the yeast dissemination to the main target organs was evaluated. Macrophages P338.D1 cell lines were used to measure the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the phagocytosis and lysis of the microorganism. Results: the used dose helped to keep high values (38 µg/m) of 4B3 in serum for at least 46 days. It was found that the monoclonal antibody does not give protection, which makes the microorganism dissemination possible, along with the reduction in the survival of mice. Finally, the phagocytosis test showed that 4B3 increased the phagocytic activity of macrophages without any fungicidal effect. Conclusions: the monoclonal antibody 4B3 stimulates C. neoformans phagocytosis by macrophages without fungicidal effect, thus favoring yeast dissemination and decreasing the survival of mice due to cryptococcal infection.

[Effect of 4B3 monoclonal antibody on the experimental Cryptococcus neoformans infection]. / Efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 en la infección experimental por Cryptococcus neoformans.

INTRODUCTION: frequent relapses and high lethality of criptococcosis has encouraged the search for new therapeutic strategies. OBJECTIVES: to evaluate the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the cryptococcal infection in Balb/c mice. METHODS: the kinetics in serum concentration of the studied monoclonal antibody was determined for intraperitoneal administration (500 microg) by quantitative sandwich ELISA. In order to assess its protective capability, were administered 500 microg of 4B3 and innoculated 2 x 10(22) cells/mL of Cryptococcus neoformans. The survival of mice was recorded and the yeast dissemination to the main target organs was evaluated. Macrophages P338.D1 cell lines were used to measure the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the phagocytosis and lysis of the microorganism. RESULTS: the used dose helped to keep high values (38 microg/m) of 4B3 in serum for at least 46 days. It was found that the monoclonal antibody does not give protection, which makes the microorganism dissemination possible, along with the reduction in the survival of mice. Finally, the phagocytosis test showed that 4B3 increased the phagocytic activity of macrophages without any fungicidal effect. CONCLUSIONS: the monoclonal antibody 4B3 stimulates C. neoformans phagocytosis by macrophages without fungicidal effect, thus favoring yeast dissemination and decreasing the survival of mice due to cryptococcal infection

Susceptibilidad a la nistatina de aislamientos bucales de Candida y su correlación con la respuesta al tratamiento / Susceptibility to nystatin of oral Candida isolates and its correlation with the response to treatment

INTRODUCCIÓN: la candidiasis bucofaríngea es un marcador precoz de progresión a sida en los pacientes seropositivos al VIH sin tratamiento antirretroviral, así como un indicador de no adherencia al tratamiento antirretroviral o su posible fracaso. OBJETIVO: determinar la susceptibilidad frente a nistatina de las cepas de Candida aisladas de la cavidad bucal de pacientes seropositivos al VIH, y correlacionar los resultados con la respuesta al tratamiento. MÉTODOS: se realizó un estudio de susceptibilidad in vitro frente a nistatina para 104 cepas aisladas de lesiones de candidiasis bucofaríngea de 97 pacientes VIH/sida que habían participado, como voluntarios, en un ensayo clínico para evaluar la respuesta a cuatro drogas. De los 104 aislamientos, 58 fueron obtenidos antes de iniciar los esquemas de tratamientos y 46 una vez finalizado estos. Se procedió según el micrométodo el documento M27-A3 del Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: todas las cepas se comportaron como sensibles a la nistatina, con valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) menores que 16 Ág/mL, independientemente del momento de su aislamiento y de la droga administrada a los pacientes. En el grupo de pacientes tratados con nistatina, los rangos de CMI80 (1-2 Ág/mL), las medias geométricas y los valores acumulativos de la droga frente a los aislamientos de Candida albicans obtenidos antes de iniciar el tratamiento, resultaron similares a los obtenidos frente a las cepas recobradas al finalizar este. De todas las especies identificadas, C. lusitaniae fue la que alcanzó el valor absoluto de CMI más elevado, 4 Ág/mL. CONCLUSIONES: la correlación entre la evolución clínica de los pacientes y los resultados de los estudios de susceptibilidad de sus aislamientos in vitro, fue buena para los pacientes con evolución favorable, pero no para predecir posibles fracasos terapéuticos (AU)

INTRODUCTION: oropharyngeal candidiasis is an early marker of progression to AIDS in HIV-positive patients and an indicator of non-adherence of treatment or possible failure in patients undergoing anti-retroviral therapy. OBJECTIVE: to determine the in vitro susceptibility to nystatin in Candida strains isolated from the oral cavity of HIV-positive patients, and to correlate the results with the response to treatment. METHODS: a study of in vitro susceptibility to nystatin was conducted in 104 oral isolates from 97 HIV/AIDS patients, who participated as volunteers in a clinical trial to evaluate the response to four antifungal drugs. Fifty-eight of the 104 isolates were obtained before starting treatment and the remaining 46 at the end of therapy. Broth microdilution method was performed according to the document M27-A3 of the Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTS: one hundred percent of the strains were susceptible to nystatin, with minimum inhibitory concentration (MIC) values of <16 Ág/mL, regardless of the time of isolation and of the drug administered to patients. In the group of patients treated with nystatin, the MIC80 ranges (1-2 Ág/mL), geometric mean and cumulative values of the drug against Candida albicans isolates before starting treatment were similar to those obtained against strains recovered at the end. Among the identified species, C. lusitaniae reached the highest absolute MIC value (4 Ág/mL). CONCLUSIONS: the correlation between the clinical evolution and the results of in vitro susceptibility tests was good in patients with a favorable outcome; however, it did not allow predicting possible treatment failure (AU)

Cryptococcus gattii aislado de un guepardo (Acinonyx jubatus) del Parque Zoológico Nacional de Cuba / Cyptococcus gattii isolated from a cheetah (Acinonyx jubatus) in the National Zoo of Cuba

INTRODUCCIÓN: la criptococosis, micosis sistémica causada por especies del género Cryptococcus, ha elevado considerablemente su incidencia en los últimos años, asociada sobre todo a la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. También ha sido descrita en animales, aunque con baja frecuencia. MÉTODOS: se presentó el caso de una hembra de guepardo (Acinonyx jubatus) mantenida en cautiverio en el Parque Zoológico Nacional, en La Habana. El animal, procedente de Sudáfrica, comenzó con súbita pérdida de peso, astenia, anorexia y dificultad respiratoria con abundante secreción nasal. RESULTADOS: mediante exámenes micológicos de esas secreciones se demostró la presencia de Cryptococcus gattii serotipo B. Por el origen del animal y su permanencia en cautiverio, se estima que la infección se mantuvo latente por un período no menor de 16 meses. CONCLUSIONES: en Cuba, hasta el momento, todos los aislamientos clínicos de Cryptococcus corresponden a C. neoformans var. grubii, por lo que se estima que la infección fue adquirida en el país de origen del animal. Este representa el primer aislamiento de C. gattii en Cuba a partir de un animal importado de Sudáfrica, donde este hongo es endémico(AU)

INTRODUCTION: Cryptoccosis systemic mycosis caused by Cryptococcus species- has considerably raised its incidence in the last years, mainly associated with the human immunodeficiency virus infection. It has also been described in animals, but rare cases. METHODS: a case of a female cheetah (Acinonyx jubatus) kept in the Nacional Zoo of Havana was presented. The animal came from South Africa. She began losing weight, and suffering asthenia, anorexia and breathing problems with abundant nasal secretion. RESULTS: mycological testing of these secretions disclosed the presence of serotype B Cryptococcus gattii. Because of the origin and captive condition of the animal, it was believed that the infection had been latent for 16 months at least. CONCLUSIONS: up to the present, in Cuba, all clinical Cryptococcus isolates were C. neoformans var. grubii, so it is considered that the infection was caught in the country of origin of the female cheetah. This is the first C. gattii isolate in Cuba from an animal coming from South Africa where this fungus is endemic(AU)

Susceptibilidad a la nistatina de aislamientos bucales de Candida y su correlación con la respuesta al tratamiento / Susceptibility to nystatin of oral Candida isolates and its correlation with the response to treatment

INTRODUCCIÓN: la candidiasis bucofaríngea es un marcador precoz de progresión a sida en los pacientes seropositivos al VIH sin tratamiento antirretroviral, así como un indicador de no adherencia al tratamiento antirretroviral o su posible fracaso. OBJETIVO: determinar la susceptibilidad frente a nistatina de las cepas de Candida aisladas de la cavidad bucal de pacientes seropositivos al VIH, y correlacionar los resultados con la respuesta al tratamiento. MÉTODOS: se realizó un estudio de susceptibilidad in vitro frente a nistatina para 104 cepas aisladas de lesiones de candidiasis bucofaríngea de 97 pacientes VIH/sida que habían participado, como voluntarios, en un ensayo clínico para evaluar la respuesta a cuatro drogas. De los 104 aislamientos, 58 fueron obtenidos antes de iniciar los esquemas de tratamientos y 46 una vez finalizado estos. Se procedió según el micrométodo el documento M27-A3 del Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTADOS: todas las cepas se comportaron como sensibles a la nistatina, con valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) menores que 16 Ág/mL, independientemente del momento de su aislamiento y de la droga administrada a los pacientes. En el grupo de pacientes tratados con nistatina, los rangos de CMI80 (1-2 Ág/mL), las medias geométricas y los valores acumulativos de la droga frente a los aislamientos de Candida albicans obtenidos antes de iniciar el tratamiento, resultaron similares a los obtenidos frente a las cepas recobradas al finalizar este. De todas las especies identificadas, C. lusitaniae fue la que alcanzó el valor absoluto de CMI más elevado, 4 Ág/mL. CONCLUSIONES: la correlación entre la evolución clínica de los pacientes y los resultados de los estudios de susceptibilidad de sus aislamientos in vitro, fue buena para los pacientes con evolución favorable, pero no para predecir posibles fracasos terapéuticos (AU)

INTRODUCTION: oropharyngeal candidiasis is an early marker of progression to AIDS in HIV-positive patients and an indicator of non-adherence of treatment or possible failure in patients undergoing anti-retroviral therapy. OBJECTIVE: to determine the in vitro susceptibility to nystatin in Candida strains isolated from the oral cavity of HIV-positive patients, and to correlate the results with the response to treatment. METHODS: a study of in vitro susceptibility to nystatin was conducted in 104 oral isolates from 97 HIV/AIDS patients, who participated as volunteers in a clinical trial to evaluate the response to four antifungal drugs. Fifty-eight of the 104 isolates were obtained before starting treatment and the remaining 46 at the end of therapy. Broth microdilution method was performed according to the document M27-A3 of the Clinical and Laboratory Standards Institute. RESULTS: one hundred percent of the strains were susceptible to nystatin, with minimum inhibitory concentration (MIC) values of <16 Ág/mL, regardless of the time of isolation and of the drug administered to patients. In the group of patients treated with nystatin, the MIC80 ranges (1-2 Ág/mL), geometric mean and cumulative values of the drug against Candida albicans isolates before starting treatment were similar to those obtained against strains recovered at the end. Among the identified species, C. lusitaniae reached the highest absolute MIC value (4 Ág/mL). CONCLUSIONS: the correlation between the clinical evolution and the results of in vitro susceptibility tests was good in patients with a favorable outcome; however, it did not allow predicting possible treatment failure (AU)

Cryptococcus gattii aislado de un guepardo (Acinonyx jubatus) del Parque Zoológico Nacional de Cuba / Cyptococcus gattii isolated from a cheetah (Acinonyx jubatus) in the National Zoo of Cuba

INTRODUCCIÓN: la criptococosis, micosis sistémica causada por especies del género Cryptococcus, ha elevado considerablemente su incidencia en los últimos años, asociada sobre todo a la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. También ha sido descrita en animales, aunque con baja frecuencia. MÉTODOS: se presentó el caso de una hembra de guepardo (Acinonyx jubatus) mantenida en cautiverio en el Parque Zoológico Nacional, en La Habana. El animal, procedente de Sudáfrica, comenzó con súbita pérdida de peso, astenia, anorexia y dificultad respiratoria con abundante secreción nasal. RESULTADOS: mediante exámenes micológicos de esas secreciones se demostró la presencia de Cryptococcus gattii serotipo B. Por el origen del animal y su permanencia en cautiverio, se estima que la infección se mantuvo latente por un período no menor de 16 meses. CONCLUSIONES: en Cuba, hasta el momento, todos los aislamientos clínicos de Cryptococcus corresponden a C. neoformans var. grubii, por lo que se estima que la infección fue adquirida en el país de origen del animal. Este representa el primer aislamiento de C. gattii en Cuba a partir de un animal importado de Sudáfrica, donde este hongo es endémico (AU)

INTRODUCTION: Cryptoccosis systemic mycosis caused by Cryptococcus species- has considerably raised its incidence in the last years, mainly associated with the human immunodeficiency virus infection. It has also been described in animals, but rare cases. METHODS: a case of a female cheetah (Acinonyx jubatus) kept in the Nacional Zoo of Havana was presented. The animal came from South Africa. She began losing weight, and suffering asthenia, anorexia and breathing problems with abundant nasal secretion. RESULTS: mycological testing of these secretions disclosed the presence of serotype B Cryptococcus gattii. Because of the origin and captive condition of the animal, it was believed that the infection had been latent for 16 months at least. CONCLUSIONS: up to the present, in Cuba, all clinical Cryptococcus isolates were C. neoformans var. grubii, so it is considered that the infection was caught in the country of origin of the female cheetah. This is the first C. gattii isolate in Cuba from an animal coming from South Africa where this fungus is endemic (AU)