Analysis of the virulence of an atypical enteropathogenic Escherichia coli strain in vitro and in vivo and the influence of type three secretion system.

Atypical enteropathogenic Escherichia coli (aEPEC) inject various effectors into intestinal cells through a type three secretion system (T3SS), causing attaching and effacing (A/E) lesions. We investigated the role of T3SS in the ability of the aEPEC 1711-4 strain to interact with enterocytes in vitro (Caco-2 cells) and in vivo (rabbit ileal loops) and to translocate the rat intestinal mucosa in vivo. A T3SS isogenic mutant strain was constructed, which showed marked reduction in the ability to associate and invade but not to persist inside Caco-2 cells. After rabbit infection, only aEPEC 1711-4 was detected inside enterocytes at 8 and 24 hours pointing to a T3SS-dependent invasive potential in vivo. In contrast to aEPEC 1711-4, the T3SS-deficient strain no longer produced A/E lesions or induced macrophage infiltration. We also demonstrated that the ability of aEPEC 1711-4 to translocate through mesenteric lymph nodes to spleen and liver in a rat model depends on a functional T3SS, since a decreased number of T3SS mutant bacteria were recovered from extraintestinal sites. These findings indicate that the full virulence potential of aEPEC 1711-4 depends on a functional T3SS, which contributes to efficient adhesion/invasion in vitro and in vivo and to bacterial translocation to extraintestinal sites.

Caracterizaçäo parcial de receptores solúveis E presentes em soros de pacientes com hanseníase / Partial characterization of E-soluble receptor (Rs) present in Hansen's disease (HD) patients sera

Os receptores solúveis para eritrócitos de carneiro (E) podem ser encontrados sob forma solúvel em soros humanos, e em níveis elevados em patologias associadas com a imunossupressäo. No presente trabalho, concordando com os dados da literatura observamos nível de receptores solúveis para E (Rs) em níveis elevados em soros de pacientes com hanseníase. A partir desses soros, isolamos Rs de peso moleculares distintos, Rs1 (= 58 KDa) e Rs2 (acima de 150 KDa), por cromatografia por gel filtraçäo (Sephadex G-200) e por troca iônica (DEAE celulose), concordando com os resultados obtidos anteriormente com soros de pacientes urêmicos ou neoplásicos. As fraçöes positivas detectadas, por ensaio imunoenzimático, quando analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida e por "western blotting" utilizando soro anti-Rs, demonstraram apenas uma banda de Rs1 e uma ou duas bandas para Rs2. Para verificar se os mesmos apresentavam alguma relaçäo com CD2, molécula de superfície de linfócito T que interage com E, e com CD58, ligante natural de CD2, foi realizado ensaio imunoenzimático utilizando anticorpos monoclonais respectivos. Os resultados obtidos sugerem a inexistência de relaçäo de Rs1 e Rs2 com a molécula CD2 ou CD58

Obtençäo e análise de soro heterólogo anti-receptor de linfócitos T humano para eritrócitos de carneiro / Obtention and analysis of heterologous anti-human T lymphocyte receptors for sheep erythrocytes serum

Neste trabalho foi obtido soro anti-receptor de linfócitos de carneiro (E) por imunizaçäo de carneiro com eritrócitos autólogos sensibilizados com receptores solubilizados de membranas de linfócitos humanos. A análise desse soro anti-receptor solúvel (anti-Rs) demonstrou a capacidade de inibir a formaçäo da rosácea, de identificar linfócitos T por imunofluorescência indireta, de aglutinar complexo E sensibilizado com receptor solúvel, confirmando os dados da literatura. Considerando que esse soro anti-Rs interage com moléculas de peso molecular aproximado de 58 Kd (Rs1) e acima de 150 Kd (Rs2), foi analisado o efeito bloqueador desse soro anti-Rs na interaçäo de Rs1 e Rs2 a E. Adicionalmente IgG anti-Rs foi purificada através de cromatografia de afinidade utilizando coluna de Sepharose Proteína A e analisada em cultura de linfócitos. Essa IgG anti-Rs purificada, nas concentraçöes de 60 e 120 µg induziu resposta proliferativa de linfócitos humanos normais "in vitro"