Espermatozoides caprinos criopreservados em meio à base de leite desnatado acrescido de glutationa reduzida

Aiming to evaluate in vitro effect of different concentrations of glutathione reduced (GSH) in skimmed-milk and glycerol 7% it was used semen from five Boer bucks. After collect and evaluation, a pool of samples was diluted in skimmed-milk and glycerol 7% plus antioxidant: G1) Control; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 and G4) GSH 7mM mL-1. Samples were frozen in straws (0.25mL) and stored at -196°C. After thawing, samples were subjected to integrity of the plasma membrane (iMP) and acrosomal (iAc), mitochondrial membrane potential (MMP), kinematic and ultrastructure analysis. Control and GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups did no differ (P>0.05) in iMP, iAc, PMM and kinematic parameters. In the ultrastructural analysis, percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intact did not differ (P>0.05) between groups. However, Control group had higher percentage (P 0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups. Higher percentage (P 0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7mM mL-1). It can be concluded that the GSH (2, 5 and 7mM mL-1) addition in skimmed-milk diluent to freeze goat semen did not preserve sperm integrity.

Visando avaliar o efeito da adição de glutationa reduzida (GSH) ao diluente de congelação de sêmen caprino à base de leite desnatado, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores Boer. Após colheita e avaliação, procedeu-se à formação do pool dos ejaculados e diluição em leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes: G1) Controle; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 e G4) GSH 7mM mL-1. As amostras foram congeladas em palhetas (0,25mL) e armazenadas a -196°C. Após descongelação, avaliou-se a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética e ultraestrutura. Os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM mL-1) não diferiram (P>0,05) em iMP, iAc, PMM e cinética. Na análise ultraestrutural, os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos. Todavia, o grupo Controle apresentou maior porcentual (P 0,05) de gametas com axonema íntegros do que os de GSH (2, 5 e 7mM mL-1). Maior porcentagem (P 0,05) de espermatozoides com mitocôndrias íntegras foi observada no grupo Controle do que nos de GSH (5 e 7 mM mL-1). Conclui-se que a adição de GSH (2, 5 e 7mM mL-1) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado, não preserva a integridade dos espermatozoides.

Espermatozoides caprinos criopreservados em meio à base de leite desnatado acrescido de glutationa reduzida

Aiming to evaluate in vitro effect of different concentrations of glutathione reduced (GSH) in skimmed-milk and glycerol 7% it was used semen from five Boer bucks. After collect and evaluation, a pool of samples was diluted in skimmed-milk and glycerol 7% plus antioxidant: G1) Control; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 and G4) GSH 7mM mL-1. Samples were frozen in straws (0.25mL) and stored at -196°C. After thawing, samples were subjected to integrity of the plasma membrane (iMP) and acrosomal (iAc), mitochondrial membrane potential (MMP), kinematic and ultrastructure analysis. Control and GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups did no differ (P>0.05) in iMP, iAc, PMM and kinematic parameters. In the ultrastructural analysis, percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intact did not differ (P>0.05) between groups. However, Control group had higher percentage (P 0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7mM mL-1) groups. Higher percentage (P 0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7mM mL-1). It can be concluded that the GSH (2, 5 and 7mM mL-1) addition in skimmed-milk diluent to freeze goat semen did not preserve sperm integrity.

Visando avaliar o efeito da adição de glutationa reduzida (GSH) ao diluente de congelação de sêmen caprino à base de leite desnatado, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores Boer. Após colheita e avaliação, procedeu-se à formação do pool dos ejaculados e diluição em leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes: G1) Controle; G2) GSH 2mM mL-1; G3) GSH 5mM mL-1 e G4) GSH 7mM mL-1. As amostras foram congeladas em palhetas (0,25mL) e armazenadas a -196°C. Após descongelação, avaliou-se a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética e ultraestrutura. Os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM mL-1) não diferiram (P>0,05) em iMP, iAc, PMM e cinética. Na análise ultraestrutural, os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos. Todavia, o grupo Controle apresentou maior porcentual (P 0,05) de gametas com axonema íntegros do que os de GSH (2, 5 e 7mM mL-1). Maior porcentagem (P 0,05) de espermatozoides com mitocôndrias íntegras foi observada no grupo Controle do que nos de GSH (5 e 7 mM mL-1). Conclui-se que a adição de GSH (2, 5 e 7mM mL-1) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado, não preserva a integridade dos espermatozoides.

Morphologic evaluation of goat spermatozoa diluted and frozen in media based on powder coconut water (PCW-101) or TRIS, stained by eosin-nigrosin and bromophenol blue / AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DE ESPERMATOZÓIDES CAPRINOS DILUÍDOS E CONGELADOS EM MEIO À BASE DE ÁGUA DE COCO EM PÓ (ACP-101) OU TRIS, CORADOS POR EOSINA-NIGROSINA E AZUL DE BROMOFENOL

This aims of the work were: to evaluate in vitro the goat semen frozen in diluents media based on powder coconut water (PCW-101) and TRIS and, compare the bromophenol blue stain efficiency with the eosin-nigrosin stain. The ejaculateds were divided and diluted into PCW-101 and TRIS, frozed and thawed after 30 days. Spermatic morphology was evaluated, through semen smears stained by eosin-nigrosin (EN) and bromophenol blue (BB). The morphologic parameters evaluated were: normal spermatozoa (N), head alteration (HA), intermediary piece alteration (IPA), tail alteration (TA), proximal citoplasmic drop (PCD), distal citoplasmic drop (DCD), and detached head (DH). There wasnt significant difference in the observation of N between media, staining and their interactions after 5 minutes of thermo resistance test. After 120, the N was significantly influenced by media, where the TRIS presented better results. The incubation period of 120 minutes at 37ºC affect the spermatic morphology, increasing the HA percentages. The media based on TRIS promoted better protection from the cryoinjuries on frozen goat spermatozoa. BB staining was efficient on the fresh and post-thaw goat semen evaluation.KEY WORDS: Bromophenol blue, goat, powder coconut water; TRIS, spermatozoa.

Este trabalho teve como objetivos avaliar a morfologia de espermatozoides caprinos frescos e congelados em meios à base de água de coco em pó (ACP-101) e TRIS, bem como comparar a eficiência dos corantes azul de bromofenol (AB) e eosina-nigrosina (EN). Cada ejaculado foi dividido, diluído em ACP-101 e TRIS, congelado e, após trinta dias, descongelado. Analisou-se a morfologia espermática por esfregaços corados por EN e AB. Os parâmetros morfológicos foram: espermatozoides normais (N), alterações de cabeça (AC), de peça intermediária (API), de flagelo (AF), gotas citoplasmáticas proximal (GCP) e distal (GCD) e cabeça destacada (CD). Não se verificou diferença de N entre tratamentos após cinco minutos do teste de termorresistência. Após 120 minutos, a quantificação de N foi influenciada pelo diluente, tendo o TRIS resultados superiores. O período de incubação afetou a morfologia espermática, aumentando as porcentagens de AC. Conclui-se que o meio à base de TRIS promoveu maior proteção quanto às crioinjúrias em espermatozoides caprinos. O corante AB demonstrou ser mais eficiente na avaliação do sêmen caprino fresco e pós-descongelação.PALAVRAS-CHAVES: Água de coco em pó, azul de bromofenol, caprinos, espermatozoides, TRIS.

Morphologic evaluation of goat spermatozoa diluted and frozen in media based on powder coconut water (PCW-101) or TRIS, stained by eosin-nigrosin and bromophenol blue / Avaliação morfológica de espermatozóides caprinos diluídos e congelados em meio à base de água de coco em pó (acp-101) ou tris, corados por eosina-nigrosina e azul de bromofenol

This aims of the work were: to evaluate in vitro the goat semen frozen in diluents media based on powder coconut water (PCW-101) and TRIS and, compare the bromophenol blue stain efficiency with the eosin-nigrosin stain. The ejaculateds were divided and diluted into PCW-101 and TRIS, frozed and thawed after 30 days. Spermatic morphology was evaluated, through semen smears stained by eosin-nigrosin (EN) and bromophenol blue (BB). The morphologic parameters evaluated were: normal spermatozoa (N), head alteration (HA), intermediary piece alteration (IPA), tail alteration (TA), proximal citoplasmic drop (PCD), distal citoplasmic drop (DCD), and detached head (DH). There wasnt significant difference in the observation of N between media, staining and their interactions after 5 minutes of thermo resistance test. After 120, the N was significantly influenced by media, where the TRIS presented better results. The incubation period of 120 minutes at 37ºC affect the spermatic morphology, increasing the HA percentages. The media based on TRIS promoted better protection from the cryoinjuries on frozen goat spermatozoa. BB staining was efficient on the fresh and post-thaw goat semen evaluation.KEY WORDS: Bromophenol blue, goat, powder coconut water; TRIS, spermatozoa.

Este trabalho teve como objetivos avaliar a morfologia de espermatozoides caprinos frescos e congelados em meios à base de água de coco em pó (ACP-101) e TRIS, bem como comparar a eficiência dos corantes azul de bromofenol (AB) e eosina-nigrosina (EN). Cada ejaculado foi dividido, diluído em ACP-101 e TRIS, congelado e, após trinta dias, descongelado. Analisou-se a morfologia espermática por esfregaços corados por EN e AB. Os parâmetros morfológicos foram: espermatozoides normais (N), alterações de cabeça (AC), de peça intermediária (API), de flagelo (AF), gotas citoplasmáticas proximal (GCP) e distal (GCD) e cabeça destacada (CD). Não se verificou diferença de N entre tratamentos após cinco minutos do teste de termorresistência. Após 120 minutos, a quantificação de N foi influenciada pelo diluente, tendo o TRIS resultados superiores. O período de incubação afetou a morfologia espermática, aumentando as porcentagens de AC. Conclui-se que o meio à base de TRIS promoveu maior proteção quanto às crioinjúrias em espermatozoides caprinos. O corante AB demonstrou ser mais eficiente na avaliação do sêmen caprino fresco e pós-descongelação.PALAVRAS-CHAVES: Água de coco em pó, azul de bromofenol, caprinos, espermatozoides, TRIS.

Powdered coconut water (ACP®) at different temperatures as extender of guinea fowl (Numida meleagris) spermatozoa / Uso da água de coco em pó (ACP®) em diferentes temperaturas como diluente de espermatozóides de capote ("Numida meleagris")

The in vitro efficiency of powdered coconut water (ACP®) as storage medium for fresh, cooled guinea fowl (Numida meleagris) sperm at 4 or 15ºC compared to a commercially available medium (DC) of poultry semen was evaluated. Sperm concentration, percentage of motile spermatozoa, vigor, and morphology at baseline (T0), 2h (T2) and 24h (T24) were recorded. Average pool concentration was of 4.88±0.17 x 109 sptz/mL in the sperm and 600 x 106 sptz/mL in the final aliquots. The number of spermatozoa in the pool averaged 11.4±0.95 x109sptz/ejaculate. No treatment effect (P>0.05) on any parameter (motility, vigor and viable spermatozoa percentage) at baseline was detected between four groups (4 and 15ºC in ACP® and DC). After two hours (T2), only the spermatozoa in ACP® at 4ºC was always higher than the acceptable values: motility 88%, vigor 8.9 and viable spermatozoa concentration of 10.01x109 sptz/mL (P

Avaliou-se a eficiência in vitro do diluidor água de coco em pó (ACP®) em sêmen recém-colhido e resfriado de capotes (Numida meleagris), a 4 ou 15ºC, em comparação ao diluidor comercial (DC) de sêmen de aves. Registraram-se a concentração espermática, a motilidade, o vigor e as alterações morfológicas nos tempos 0 hora (T0), 2 horas (T2) e 24 horas (T24). A média dos pools foi de 4,88±0,17 x109 sptz/mL e a concentração final das alíquotas colhidas, de 600x106sptz/mL. A média/ejaculado do pool foi de 11,4 ± 0,95 x 109 sptz/ejaculado. Os quatro tratamentos (4 e 15C em ACP® ou DC) não ocasionaram diferenças estatísticas (P>0,05) em nenhum dos parâmetros avaliados (motilidade, vigor e sptz viáveis) no tempo zero (T0). Após 2 horas, apenas os espermatozóides diluídos com ACP® a 4ºC mantiveram-se acima dos valores aceitáveis: motilidade 88%, vigor 8,9 e concentração de espermatozóides viáveis de 10,01 x109 sptz/mL (P

Powdered coconut water (ACP®) at different temperatures as extender of guinea fowl (Numida meleagris) spermatozoa / Uso da água de coco em pó (ACP®) em diferentes temperaturas como diluente de espermatozóides de capote ("Numida meleagris")

The in vitro efficiency of powdered coconut water (ACP®) as storage medium for fresh, cooled guinea fowl (Numida meleagris) sperm at 4 or 15ºC compared to a commercially available medium (DC) of poultry semen was evaluated. Sperm concentration, percentage of motile spermatozoa, vigor, and morphology at baseline (T0), 2h (T2) and 24h (T24) were recorded. Average pool concentration was of 4.88±0.17 x 109 sptz/mL in the sperm and 600 x 106 sptz/mL in the final aliquots. The number of spermatozoa in the pool averaged 11.4±0.95 x109sptz/ejaculate. No treatment effect (P>0.05) on any parameter (motility, vigor and viable spermatozoa percentage) at baseline was detected between four groups (4 and 15ºC in ACP® and DC). After two hours (T2), only the spermatozoa in ACP® at 4ºC was always higher than the acceptable values: motility 88%, vigor 8.9 and viable spermatozoa concentration of 10.01x109 sptz/mL (P

Avaliou-se a eficiência in vitro do diluidor água de coco em pó (ACP®) em sêmen recém-colhido e resfriado de capotes (Numida meleagris), a 4 ou 15ºC, em comparação ao diluidor comercial (DC) de sêmen de aves. Registraram-se a concentração espermática, a motilidade, o vigor e as alterações morfológicas nos tempos 0 hora (T0), 2 horas (T2) e 24 horas (T24). A média dos pools foi de 4,88±0,17 x109 sptz/mL e a concentração final das alíquotas colhidas, de 600x106sptz/mL. A média/ejaculado do pool foi de 11,4 ± 0,95 x 109 sptz/ejaculado. Os quatro tratamentos (4 e 15C em ACP® ou DC) não ocasionaram diferenças estatísticas (P>0,05) em nenhum dos parâmetros avaliados (motilidade, vigor e sptz viáveis) no tempo zero (T0). Após 2 horas, apenas os espermatozóides diluídos com ACP® a 4ºC mantiveram-se acima dos valores aceitáveis: motilidade 88%, vigor 8,9 e concentração de espermatozóides viáveis de 10,01 x109 sptz/mL (P

Inseminação artificial de ovelhas da raça Santa Inês com sêmen diluído em água de coco in natura e em pó

O objetivo deste estudo foi avaliar a fertilidade de ovelhas após inseminação (IA) com sêmen diluído em água de coco in natura(ACIN) e em pó (ACP-102) e resfriado a 4C por 24 horas, durante a época chuvosa e seca no estado do Ceará. As ovelhas(n=208) foram previamente submetidas a tratamento hormonal com MAP (50mg) e e.C.G. (200 UI). As ovelhas foram distribuídasem quatro grupos experimentais para a inseminação artificial: grupo 1 (época chuvosa + ACIN = 47); grupo 2 (época chuvosa+ ACP-102 = 47); grupo 3 (época seca + ACIN = 60); e grupo 4 (época seca + ACP-102 = 54). As IA foram realizadas entre 50 e55 horas após a retirada das esponjas com sêmen resfriado por 24 horas. Não foi observada diferença significativa (P>0,05)entre os diluentes testados (ACIN=74,77% vs. ACP-102=72,28%). Com relação à época da IA, verificou-se uma maior taxa deprenhez durante a época seca (81,58%) do que na chuvosa (63,82%) (P 0,05). Conclui-se que ambos diluentes à base deágua de coco apresentam boa capacidade conservadora, pois mantêm o sêmen ovino viável e com níveis satisfatórios defertilidade mesmo após 24 horas de resfriamento a 4C. Independentemente do diluente utilizado, a época da IA no estado doCeará pode influenciar a taxa de prenhez em ovelhas.

Inseminação artificial de ovelhas da raça Santa Inês com sêmen diluído em água de coco in natura e em pó

O objetivo deste estudo foi avaliar a fertilidade de ovelhas após inseminação (IA) com sêmen diluído em água de coco in natura(ACIN) e em pó (ACP-102) e resfriado a 4C por 24 horas, durante a época chuvosa e seca no estado do Ceará. As ovelhas(n=208) foram previamente submetidas a tratamento hormonal com MAP (50mg) e e.C.G. (200 UI). As ovelhas foram distribuídasem quatro grupos experimentais para a inseminação artificial: grupo 1 (época chuvosa + ACIN = 47); grupo 2 (época chuvosa+ ACP-102 = 47); grupo 3 (época seca + ACIN = 60); e grupo 4 (época seca + ACP-102 = 54). As IA foram realizadas entre 50 e55 horas após a retirada das esponjas com sêmen resfriado por 24 horas. Não foi observada diferença significativa (P>0,05)entre os diluentes testados (ACIN=74,77% vs. ACP-102=72,28%). Com relação à época da IA, verificou-se uma maior taxa deprenhez durante a época seca (81,58%) do que na chuvosa (63,82%) (P 0,05). Conclui-se que ambos diluentes à base deágua de coco apresentam boa capacidade conservadora, pois mantêm o sêmen ovino viável e com níveis satisfatórios defertilidade mesmo após 24 horas de resfriamento a 4C. Independentemente do diluente utilizado, a época da IA no estado doCeará pode influenciar a taxa de prenhez em ovelhas.

Viabilidade do sêmen caprino lavado e não lavado diluído em água de coco, resfriado e armazenado a 4oC

A conservação do sêmen por períodos curtos é dependente da redução reversível da motilidade e da atividade metabólica dosespermatozóides a baixas temperaturas. Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da época de coleta de sêmen sobre aviabilidade do sêmen lavado e não lavado, resfriado e armazenado a 4oC em diluidor água de coco. Foram utilizados 40ejaculados provenientes de quatro caprinos da raça Saanen. Após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto a concentraçãoespermática e diluído a uma concentração final de 200 x 106 sptz/ml. O sêmen diluído foi dividido em duas alíquotas iguais, euma delas foi resfriada a 4oC (sêmen não lavado), a outra metade foi centrifugada para a remoção do plasma seminal,novamente diluída em água de coco e em seguida resfriada a 4oC (sêmen lavado). Assim, o sêmen foi avaliado a 0, 24, 48 e72 horas de conservação a 4oC quanto a motilidade individual progressiva (MIP) e porcentagem de espermatozóides móveis(PEM) por meio do teste de termorresistência (TTR) a 37oC aos 5, 60 e 120 minutos de incubação. A taxa de degradação damotilidade (TDM) foi calculada ao final da incubação. Os parâmetros de MIP, PEM e TDM foram submetidos a ANOVA e Fisher´sPLSD a 5%. A MIP no sêmen lavado foi superior (p 0,001) até 48 horas de conservação a 4oC no período chuvoso e a 0h noperíodo seco, não ocorrendo diferença na MIP nos outros tempos avaliados. Da mesma fo

Viabilidade do sêmen caprino lavado e não lavado diluído em água de coco, resfriado e armazenado a 4oC

A conservação do sêmen por períodos curtos é dependente da redução reversível da motilidade e da atividade metabólica dosespermatozóides a baixas temperaturas. Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da época de coleta de sêmen sobre aviabilidade do sêmen lavado e não lavado, resfriado e armazenado a 4oC em diluidor água de coco. Foram utilizados 40ejaculados provenientes de quatro caprinos da raça Saanen. Após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto a concentraçãoespermática e diluído a uma concentração final de 200 x 106 sptz/ml. O sêmen diluído foi dividido em duas alíquotas iguais, euma delas foi resfriada a 4oC (sêmen não lavado), a outra metade foi centrifugada para a remoção do plasma seminal,novamente diluída em água de coco e em seguida resfriada a 4oC (sêmen lavado). Assim, o sêmen foi avaliado a 0, 24, 48 e72 horas de conservação a 4oC quanto a motilidade individual progressiva (MIP) e porcentagem de espermatozóides móveis(PEM) por meio do teste de termorresistência (TTR) a 37oC aos 5, 60 e 120 minutos de incubação. A taxa de degradação damotilidade (TDM) foi calculada ao final da incubação. Os parâmetros de MIP, PEM e TDM foram submetidos a ANOVA e Fisher´sPLSD a 5%. A MIP no sêmen lavado foi superior (p 0,001) até 48 horas de conservação a 4oC no período chuvoso e a 0h noperíodo seco, não ocorrendo diferença na MIP nos outros tempos avaliados. Da mesma fo