Validação de bioensaios para o estudo da imunogenicidade da vacina contra raiva / Validation of bioassays to immunogenicity assessment of the anti-rabies vaccines

Para atestar a imunogenicidade de vacinas contra a raiva, os testes de titulação e de soroneutralização de vírus rábico em células BHK-21 foram validados, com os seguintes resultados: [a]linearidade: r= 0,99 e 1,0; [ b] precisão intra- ensaio: CV= 3,4 e 6,3 % ; [ c] precisão inter-ensaios CV = 4,7 e 5, 5 % ; [ d] estabilidade ao congelar e descongelar amostras: CV = 3,5 e 11, 7% [e] estabilidade -tempo entre o descongelamento e a realização do teste: CV = 1% ; [f] exatidão > 96% e > 87% para ambos os testes. Cinco esquemas de imunização com diferentes concentrações, vias de inoculação e intervalos entre doses foram avaliados em camundongos BALB/c com a vacina contra a raiva produzida em células Vero no Instituto Butantan...

To assure the reliability of the results of immunogenicty of raccines, tests of virus titration and neutralization in BHK -21 cells were validated, with the following results: [a] linearity r = 0,99 and 1,0 ; [b] repeatability, CV = 3,4 and 6,3 %; [ c] precision, CV = 4,7 and 5,5 %; [d] freeze- thaw stability, CV =3,5 and 11,7% ; [e], C V = 1% and [f] accuracy = > 96% and > 87% for both tests. Five schemes of immunization with different concentrations, routes of inoculation and interval between doses were evaluated in BALB/c mice with rabies vaccine in Vero cells produced at Instituto Butantan...

Validation of a virus neutralization potency test in BHK-21 cells for rabies immunoglobulins in a two-center study.

A rabies virus neutralization potency test (VNPT), adapted to microplates from the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT) for rabies therapeutic immunoglobulin potency evaluation, was standardized and validated in a two-center study in Brazil. The two institutes involved in the study were: Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (Fundação Oswaldo Cruz) and Instituto Butantan. Two equine rabies immunoglobulin samples, all diluted to 1IU/ml, were tested against the WHO 2nd Rabies Human Ig International Standard. Four dilutions of the samples and standards were tested with the VNPT. The potency of the samples was calculated in IU/ml using the probit method; linearity, accuracy, repeatability (intra-assay variation), intermediate precision (inter-assay variation) and reproducibility (inter-laboratory variation) were assessed to evaluate the reliability of the VNPT. Laboratories were arbitrarily coded as Laboratory A and Laboratory B. The following results were obtained with the International Standard: (a) linearity, the overall coefficient of correlation of the dose-response curve was -0.97; (b) accuracy, % error of -0.70 (IU/ml); (c) repeatability, 17.06% (Laboratory A) and 11.61% (Laboratory B); (d) intermediate precision, 16.99% (Laboratory A) and 22.05% (Laboratory B); (e) reproducibility, 14.5%. The final conclusion was that VNPT presents satisfactory linearity, accuracy, repeatability, intermediate precision and reproducibility and is a reliable and suitable method by which to evaluate rabies immunoglobulin potency.

Avaliação da imunogenicidade da vacina contra raiva em células Vero, desenvolvida no Instituto Butantan, segundo dois esquemas de imunização, em camundongos / Immunogenicity of Vero rabies vaccine developed at Butantan Institute: comparative study of two immunization protocols

A capacidade imunogênica de uma nova vacina contra raiva em células Vero, purificada, desenvolvida no Instituto Butantan, foi avaliada em camundongos. Grupos de animais da linhagem N:NIH foram imunizados com essa vacina, denominada VR/VERO, ou com vacinas comerciais de reconhecida eficácia: HDCV e VERORAB. Dois esquemas de imunização com três doses de vacina foram empregados, sendo que no primeiro estas foram aplicadas nos dias 0, 7 e 28 e no segundo nos dias 0, 28 e 63. Os títulos de anticorpos neutralizantes foram dosados 7 dias após cada dose de vacina e 30 dias após a última dose. Todos os camundongos imunizados com as vacinas VR/VERO ou HDCV e 83% dos vacinados com VERORAB apresentaram título satisfatório após a segunda dose, comprovando a imunogenicidade da vacina VR/VERO em relação às outras duas. As médias geométricas dos títulos de anticorpos neutralizantes obtidas com o esquema de doses mais espaçadas foram superiores às do esquema de doses mais próximas, sendo que essa diferença foi significativa na resposta secundária e 30 dias após a última dose de vacina. O esquema de imunização de intervalos longos propiciou uma resposta secundária similar à resposta terciária do esquema de intervalos curtos, sugerindo que há uma indução mais eficaz de memória à vacina. A cinética da produção de subclasses IgG1 e IgG2a foi avaliada no soro dos animais imunizados com as vacinasHDCV e VR/VERO, com os dois esquemas de imunização. A produção desses isótipos foi semelhante nos animais imunizados com as duas vacinas, sendo que tanto IgG1 quanto IgG2a apresentaram títulos muito superiores na resposta secundária do esquema de doses mais espaçadas,demonstrando a maior eficácia deste último

Hyperimmune antirabies sera titration by standard mouse neutralization and counterimmunoelectrophoresis tests, comparing results of different laboratories

Para a determinacao do nivel de anticorpos de vinte quatro amostras de soros equinos hiperimunes contra a Raiva, foram utilizadas as tecnicas de soroneutralizacao em camundongos (SN) e contraimunoeletroforese (CIE). As provas foram realizadas nos Institutos Butantan (IB) e Panamericano de Proteccion de Alimentos y Zoonosis (INPPAZ). A analise estatistica mostrou que para o SN e CIE feitas no IB, a correlacao foi de r=0,9317, enquanto que no INPPAZ foi de r=0,974. Comparando-se os dados obtidos pelo CIE nos dois laboratorios observou-se uma correlacao de r=0,845. A tecnica de CIE demonstrou ser tao sensivel e eficiente quanto a SN na titulacao de soros anti-rabicos hiperimunes de origem equina. Assim, com base nos resultados de CIE, que e uma tecnica simples, rapida e economica, pode-se estimar os titulos de anticorpos dos soros em SN.

Termoestabilidade da vacina contra a raiva, tipo Fuenzalida & Palacios, uso humano / Thermostability of rabies vaccine, type Fuenzalida & Palacios, for human use

Ten lots of Fuenzalida & Palacios type antirabies vaccine for human use, produced at the Instituto Butantan (São Paulo, Brazil) were stored at temperatures of 45, 37, 28 and 2-8 degrees C. The potency of each lot was determined in samples taken at varied time intervals using the NIH method and lots presenting antigenic values > or = 0,3 were considered satisfactory for use. After 2 hours at 45 degrees C the antigenic value of one out of 10 lots tested was found to be less than the minimum required value. At 37 degrees C all lots maintained satisfactory antigenic values until the third day of storage, whilst at 28 and 2-8 degrees C the potency was fully maintained, respectively for 10 and 360 days. At the ideal temperature of 2-8 degrees C, 100 of the tested vaccines maintained the minimum required antigenicity for a longer period (16 months) than the expiration time of 6-12 months usually recommended for this type of biological produced in Latin American and Caribbean countries. Thus, the obtained data suggested that in countries still producing Fuenzalida & Palacios type vaccine, the expiration tim could be extended to 16 months, what could prevent the unnecessary discarding of products still in useful condition.