Schwann cell-enriched cultures from adult human peripheral nerve: a technique combining short enzymatic dissociation and treatment with cytosine arabinoside (Ara-C).

Attempts to design the nerve cellular prostheses have focused on the production of autologous Schwann cells expanded in vitro as the essential component in the regeneration process of injured peripheral nerves. To obtain human Schwann cells of high quality we tested a short enzymatic dissociation protocol that optimized cellular viability levels. We also assessed patterns of bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation in both Schwann cells and fibroblasts in the presence or absence of the antimitotic Ara-C, an enrichment option for adult human Schwann cell cultures. The Ara-C treated cultures showed a significantly higher Schwann cell percentage (95%), compared with that obtained in the absence of Ara-C (70%), indicating that this antimitotic acts to eliminate fibroblasts in each one of the applied pulses (four pulses). However, we have observed that the use of this antimitotic during prolonged periods of time produced a cumulative effect causing Schwann cell cytotoxicity. Therefore, we consider that our enzymatic dissociation technique and the application of only two pulses of Ara-C to the cultures are enough to achieve enrichment of adult human Schwann cells in culture.

ATPasa de calcio en el sistema nervioso / Calcium ATPase in the nervous system

La bomba de calcio es una proteína integral de la membrana que regula el calcio libre citoplasmático en concentraciones menores de 0,1 mM. En la mayoría de las células eucarióticas está ubicada en la membrana, en el plasmalema o en organelos como el retículo sarcoendoplásmico y los calciosomas. Su actividad está dada por la hidrólisis de ATP, la concentración del ion en el citoplasma y por otros factores que regulan como la calmodulina, los fosfolípidos y las proteínas - cinasas. Por diferentes métodos, se ha detectado la ATPasa de calcio y su actividad en el tejido nervioso central y periférico, como en otros tejidos

Técnica inmunocitoquímica para evaluar la proliferación de células en cultivo por la incorporación de bromodeoxiuridina / Description of an immunocytochemical evaluation technique for in vitro cell proliferation by bromodoxiuridine incorporation

Para evaluar la proliferación in vitro de células, se estandarizó una técnica inmunocitoquímica no radioactiva, fácil de manejar, más rápida y segura que permite detectar la bromodeoxiuridina (BrdU) incorporada en las células que entran en fase S. Durante la estandarización de la ténica inmunocitoquímica con peroxidasa, se usaron varios tipos celulares y se obtuvieron resultados similares. Brevemente, se realiza una incubación BrdU durante 48 horas y luego, se procesa el material celular para una inmunocitoquímica convencional que tiene como paso adicional la desnaturalización del ADN con HCI previa a la incubación con el anticuerpo primario anti-BrdU. Como cromógeno se usó la DAB (diaminobenzidina) o el AEC (aminoetilcarbazol). El procedimiento utilizado permite ver una tinción específica para núcleos en células que entran en fase S y permite evaluar rápidamente el porcentaje de células que están proliferando en el cultivo

Matrices de inclusión para obtención de cortes de tejidos en vibrátomo en estudios citoquímicos / Embedding matrixes for obtaining vibratome tissue slices for cytochemistry studies

Para estudios citoquímicos en diferentes muestras de tejidos, de tamaño pequeños, se hace necesaria la utilización de una matriz inerte que genere soporte y estabilidad al tejido en el momento de obtener cortes de 50µm en vibrátomo. Por esta razón se ensayaron cinco matrices: agar granulado, agar purificado, agar-agar, agarosa y gelatina, a diferentes concentraciones. Tanto con el agar-agar como con la agarosa se obtuvieron los mejores resultados, puesto que estos ofrecen, mayor estabilidad al tejido, fluyen fácilmente al servirse y su textura es muy homogénea, requisitos necesarios para la obtención de cortes precisos, utilizables en citoquímica, inmunocitoquímica y trazados histoquímicos

Cultivo de células de Schwann, un modelo de microambiente del sistema nervioso / Schwann cells cultures: a model of the nervous system microenvironment

Algunos aspectos de la fisiopatología del sistema nervioso periférico pueden ser ampliamente estudiados en un modelo celular in vitro, enriquecido en células de Schwann. La célula de Schwann como glia del sistema nervioso periférico produce la mielina responsable de la transmisión saltatoria del impulso, influye en la actividad neural y da soporte y protección axonal. A su vez es blanco de procesos que alteran la normalidad del sistema nervioso periférico como neuropatías congénitas y/o desmielizantes, lesiones nerviosas, respuestas a patógenos neurotrópicos, etc., eventos más frecuentes y discapacitantes en individuos adultos. de ahí la importancia de obtener célulkas a partir de animales adultos. Sin embargo, estas células son mitóticamente lentas y su obtención en cultico requiere de condiciones específicas que estimulen su proliferación y actividad. describimos a continuación, un modelo in vitro mediante el cual se obtienen cultivos enriquecidos en céelulas de Schwann de ratón adulto, las cuales conservan características de las células in vivo, lo cual permite estudiar diversos fenómenos específicos del sistema nervioso períferico