RESUMO
Candidiasis, a major opportunistic mycosis caused by Candida sp., may comprise life-threatening systemic infections. The incidence of non-albicans species is rising, particularly in South America and they are frequently drug resistant, causing unresponsive cases. Thus, novel antimycotic agents are required. Here we tested the antifungal activity of [RuIII(NH3)4catechol]+ complex (RuCat), approaching possible action mechanisms on fluconazole-resistant Candida tropicalis. RuCat significantly (P < 0.05) inhibited the growth and viability of C. tropicalis dose-dependently (IC50 20.3 µM). Cytotoxicity of RuCat upon murine splenocytes was lower (Selectivity Index = 16). Scanning electron microscopy analysis showed pseudohyphae formation, yeast aggregation and surface damage. RuCat-treated samples investigated by transmission electron microscopy showed melanin granule trafficking to cell surfaces and extracellular milieu. Surface-adherent membrane fragments and extracellular debris were also observed. RuCat treatment produced intense H2DCFDA labeling, indicating reactive oxygen species (ROS) production which caused increased lipoperoxidation. ROS are involved in the fungicidal effect as N-acetyl-L-cysteine completely restored cell viability. Calcofluor White chitin staining suggests that 70 or 140 µM RuCat treatment for 2 h affected cell-wall structure. PI labeling indicated necrotic cell death. The present data indicate that RuCat triggers ROS production, lipoperoxidation and cell surface damage, culminating in selective necrotic death of drug-resistant C. tropicalis.
Assuntos
Antifúngicos/farmacologia , Candida tropicalis/efeitos dos fármacos , Complexos de Coordenação/farmacologia , Fluconazol/farmacologia , Animais , Antifúngicos/química , Candida tropicalis/crescimento & desenvolvimento , Candida tropicalis/ultraestrutura , Morte Celular , Parede Celular/efeitos dos fármacos , Farmacorresistência Fúngica , Humanos , Concentração Inibidora 50 , Camundongos , Testes de Sensibilidade Microbiana , Viabilidade Microbiana/efeitos dos fármacos , Espécies Reativas de Oxigênio/metabolismo , Baço/citologia , Baço/efeitos dos fármacos , Baço/microbiologiaRESUMO
A candidíase é uma infecção oportunista provocada por diversas espécies de fungos do gênero Candida, frequentemente encontrados integrando a microbiota, da superfície cutânea, no trato gastrointestinal e cavidades mucosas do ser humano desde o seu nascimento. A incidência das infecções fúngicas sistêmicas têm aumentado consideravelmente nas últimas décadas em função do grande número de pacientes com SIDA, a grande quantidade de transplantes e condições crônicas como o câncer, a terapia prolongada com imunossupressores e o uso de agentes corticosteroides. Além disso, a exposição prolongada aos antifúngicos azólicos promove a seleção de patógenos resistentes. No presente estudo avaliou-se a atividade antifúngica do complexo Rutênio-pirocatecol (RPC) frente a um isolado clinico de Candida tropicalis resistente ao fluconazol. A metodologia empregada para os testes de susceptibilidade foi de acordo com o documento M27-A3 do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Esplenócitos de camundongos Balb/c foram obtidos de forma asséptica para avaliar a citotoxicidade do composto para células de mamíferos. O estresse oxidativo promovido pelo composto foi avaliado através da reação ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e ensaios de fluorescência com a sonda diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFH2DA). O Calcofluor White foi empregado para avaliar a integridade da parede celular. A análise ultraestrutural foi realizada através da microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica foram analisados através do teste estatístico ANOVA e pós-teste Dunnett. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica do RPC mostraram uma Concentração Inibitória de 50% (IC50) de 20,3 μM, enquanto em esplesnócitos a concentração efetiva de 50% foi de 325 μM mostrando um índice de seletividade igual a 16...
Candidiasis is an opportunistic infection caused by several species of fungi of the genus Candida, often found is the microbiota, on the skin, gastrointestinal tract and mucous cavities of the human beings birth. The incidence of systemic fungal infections have increased considerably in recent decades due to the large number of AIDS patients, the large number of transplants and chronic conditions such as cancer, prolonged therapy promotes the selection of resistant pathogen with immunosuppressant and corticosteroid agents. Also prolonged exposure azole antifungals to make them strong candidates for patients resistance. In the present study we evaluated the antifungal activity of Ruthenium-pyrocatechol complex (RPC) against a clinical isolate of Candida tropicalis resistant to fluconazole. The methodology for susceptibility testing was in accordance with the M27-A3 document of there National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Splenocytes from Balb/c mice were obtained aseptically to evaluate the cytotoxicity of the compound to mammalian cells. Oxidative stress caused by the compound was assessed by reaction to thiobarbituric acid (TBARS) and fluorescence assays with the probe diclorodihidrofluoresceína diacetate (DCFH2DA). The Calcofluor White was used to evaluate the integrity of the cell wall. The ultrastructural analysis was performed by scanning and transmission electron microscopy. The results for the antifungal activity tests were analyzed using ANOVA and pos-test Dunnett test statistic. The results for the tests of antifungal activity of the RPC showed a 50% inhibitory concentration (IC50) of 20.3 μM while in splenocytes the 50% effective concentration was 325 μM showing a selectivity index of 16...
Assuntos
Humanos , Antígenos/análise , Antígenos/metabolismo , Fluconazol , Fluconazol/análise , Fluconazol/imunologia , Fluconazol/síntese química , Sirolimo , Sirolimo/análise , Sirolimo/efeitos adversos , Sirolimo/provisão & distribuiçãoRESUMO
Candida albicans, fungo cosmopolita, é considerado um comensal comum da microbiota de pessoas saudáveis. No entanto, com o avanço da AIDS e outras condições que comprometem o sistema imunológico, como o tratamento de neoplasias dentre outros, fizeram com que as infecções fúngicas aumentassem 400 por cento nas últimas duas décadas (Beck-Sangue et al., 1993; Pfaller, 1994; Jarvis et al., 1995). A superóxido dismutase (SOD), fator de virulência em C. albicans, é requerida na detoxificação do superóxido. Sendo o dietilditiocarbamato de sódio (DETC) um potente inibidor da SOD, avaliamos no presente estudo o seu efeito fungicida na proliferação in vitro da Candida albicans, sozinho e em combinação com a anfotericina B. O DETC demonstrou um efeito dose-dependente e inibição significativa da proliferação com apenas 6hs de cultivo. A sua combinação com a anfotericina apresentou um efeito sinérgico com FIC = 0,8. Com o objetivo de avaliar as alterações ultraestiuturais induzidas pelo DETC, as leveduras foram tratadas ou não por 24 horas e então processadas para microscopia eletrônica de transmissão. A ultraestrutura de leveduras tratadas com 100l-tM ou 150l-tM de DETC apresentaram extração quase completa do citoplasma e componentes intracelulares. Além disso, foram observados múltiplos corpos vesiculares, contendo matéria de natureza diversa e figuras de mielina. Nossos dados sugerem indução de processo autofágico porém, novos experimentos com abordagem citoquímica serão realizados para confirmação dos resultados.
