Development and evaluation of a multiplex qPCR assay for rapid diagnostics of emerging sporotrichosis.

Sporothrix schenckii and related species are the agents of human and animal sporotrichosis. Routine diagnoses using classical mycological approaches are unspecific due to overlapping phenotypes. As the frequency and prevalence of sporotrichosis increases worldwide, developing specific, sensitive and cost-effective diagnostic tools is essential to understand the distribution patterns, map-affected areas and promote specific public health strategies to mitigate future outbreaks. Polymorphisms among the ß-tubulin gene were exploited to speciate S. brasiliensis, S. schenckii and S. globosa in a one-tube multiplex probe-based qPCR assay. A panel of 84 Sporothrix revealed 100% specificity (AUC = 1.000, 95% CI = 0.971-1.000, p < .0001) without cross-reacting with other medically relevant fungi, human, feline or murine DNA. Speciation via multiplex qPCR matched phylogenetic identification (Kappa = 1.0; 95% CI = 1.0-1.0; very good agreement), supporting its use as a reliable alternative to DNA sequencing. Remarkably, the lower limit of detection was 3 copies of the target for all species. As a proof of concept, we used swabs of wound exudate of 70 cats suspected of sporotrichosis to reveal an overwhelming occurrence of S. brasiliensis in 69 specimens (sensitivity = 98.57%; 95%CI: 92.3-100.0 and specificity = 100%; 95% CI = 78.2-100). In comparison to culture, qPCR showed a larger area under the curve (AUC = 0.993±0.007; 95% CI = 0.944-1.000; p < .0001; Youden's index = 0.9857), supporting that qPCR is an essential tool for accurately detect Sporothrix DNA directly from clinical samples, thus accelerating the diagnosis of sporotrichosis. Moreover, our multiplex qPCR system has the potential to increase diagnostic capacity in Sporothrix-affected areas, helping the local animal health agent or veterinarian to quickly identify and isolate new cases, which will likely benefit thousands of patients infected every year worldwide.

Esporotricose em cão Yorkshire Terrier na cidade de São Paulo, SP – Brasil: relato de caso / Sporotrichosis in Yorkshire Terrier dog in the city of São Paulo, SP – Brazil: case report

A esporotricose é uma micose subcutânea de implantação causada pelo fungo dimórfico Sporothrix spp. que acomete seres humanos e animais, sendo rara em cães e com baixo potencial zoonótico. O presente relato refere-se a um cão da raça Yorkshire Terrier, fêmea, com um ano de idade, sem histórico de contato com felinos, que apresentou lesão cutânea em membro torácico direito, resistente ao tratamento com antibiótico. A amostra obtida da biópsia excisional da lesão foi enviada para realização de exame histopatológico (H&E, PAS e Grocott) e análise imuno-histoquímica para a investigação de dermatozoonoses. Os resultados confirmaram o diagnóstico de Sporothrix spp. O animal foi tratado com itraconazol (10 mg/kg/dia via oral durante 120 dias). Não foram observadas lesões após 11 meses do início do tratamento. Atualmente, a esporotricose não é considerada como doença de notificação compulsória. Entretanto, é importante conscientizar os profissionais veterinários quanto ao potencial zoonótico da doença, e quanto às características clínicas, que podem ser sutis e semelhantes à outras dermatopatias comuns...

Occurrence of Chlamydophila felis in a cattery in Osasco city, São Paulo state / Ocorrência de Chlamydophila felis em um gatil na região de Osasco, São Paulo

Chlamydophila felis is associated with upper respiratory tract infections. In the present study, 31 cats from a noncommercial shelter located in Osasco, SP, Brazil, were examined. The cats presented with clinical manifestations, which were classified from grade 1 to 4, with 4 indicating severe manifestations. In total, 16.13% of the cats presented with grade 1 severity of clinical manifestations, 25.81% presented with grade 2, 38.71% presented with grade 3, and 19.35% presented with grade 4. PCR was used to detect C. felis in samples taken from the oral mucosa and ocular conjunctiva of both eyes using sterile, dry cotton swabs. Overall, 58% of the samples were positive for C. felis. Of these animals, none showed clinical manifestations that were classified as grade 1, whereas 5.56% of cats were classified as grade 2, 61.11% were classified as grade 3, and 33.33% were classified as grade 4. The median clinical manifestation intensity score for the first group was 3 and ranged from 2 to 4. In the second group not positive for C. felis, 38.45% of the animals (5/13) presented with manifestations classified as grade 1, 53.85% (7/13) were classified as grade 2, 7.69% (1/13) were classified as grade 3, and no animals were classified as grade 4. The median clinical manifestation intensity score for the second group was 2 and ranged from 1 to 3. In this study, there was a high occurrence of C. felis in animals with clinical manifestations.

A Chlamydophila felis está associada à infecção de trato respiratório superior. No presente estudo, foram utilizados 31 felinos de um gatil não comercial, localizado em Osasco/SP. Os gatos apresentavam manifestações clínicas, classificadas de 1 a 4, sendo 4 atribuído àqueles que apresentavam pior manifestação clínica. Foi observada a intensidade de manifestação clínica grau 1 em 16,13% dos gatos, a 2 em 25,81%, a 3 em 38,71% e a 4 em 19,35%. A detecção de C. felis foi realizada por técnica de PCR em amostras obtidas com suabes de algodão, seco e estéril, de mucosa oral e de conjuntiva ocular de ambos os olhos. Verificou-se que 58% das amostras para C. felis foram positivas, entre esses animais, nenhum apresentou manifestação clínica classificada como grau 1, o grau 2 foi observado em 5,56% dos gatos, 61,11% para o 3 e 33,33% dos animais apresentava a intensidade 4. Verificou-se que para o primeiro grupo a mediana dos escores de intensidade das manifestações clínicas observadas foi de 3, variando de 2 a 4. No segundo grupo, foi observado 38,45% (5/13) dos animais para a intensidade 1, 53,85% (7/13) para a 2 e 7,69% (1/13) para a 3, nenhum animal deste grupo apresentou o grau 4. Verificou-se para o segundo grupo, a mediana dos escores de intensidade das manifestações clínicas observadas foi de 2, variando de 1 a 3. Neste trabalho foi observada uma elevada ocorrência de C. felis em animais com manifestação clínica.