Identification and Molecular Characterization of Norovirus in São Paulo State, Brazil

Norovirus (NoV), previously called Norwalk-like virus, represents an important group of human pathogens associated with outbreaks of nonbacterial gastroenteritis. Epidemiological surveys of outbreaks have shown that the most important routes of transmission are person-to-person contacts and contaminated food and water, with the virus affecting adults and children. NoV is classified into genogroups, being genogroups GI, GII and GIV found in humans. In view of the high genetic diversity of NoV and the lack of information about this virus in Brazil, the aim of the present study was the molecular characterization of NoV isolated from diarrheic stool samples of patients from São Paulo State. In this study, 204 stool specimens collected during diarrhea outbreaks were analyzed by RT-PCR, and 12 were sequenced for genogroup confirmation. One-step PCR was performed in order to amplify the B region of ORF 1 using the MON 431, 432, 433 and 434 primer pool. From total, 32 (15.7%) stool specimens were positive for NoV genogroup GII. Comparison of the sequences of the PCR products to GenBank sequences showed 88.8% to 98.8% identity, suggesting the presence of genogroup GII in gastroenteritis outbreaks in São Paulo State.

Norovírus (NoV), anteriormente chamado Norwalk-like vírus, constituem um importante grupo de patógeno humano associado a surtos de gastroenterites não bacterianas. Levantamentos epidemiológicos de surtos demonstram que as mais importantes vias de transmissão são contatos pessoa-pessoa, água e alimentos contaminados, afetando adultos e crianças. Os NoV são classificados em genogrupos, sendo os genogrupos GI, GII e GIV encontrados em humanos. A grande diversidade genética dos NoV e a falta de informação sobre esses vírus no Brasil determinaram o tema deste estudo que teve como objetivo a identificação e caracterização molecular de NoV em amostras fecais de pacientes com gastroenterites, provenientes de surtos de diarréia no estado de São Paulo. Neste estudo, 204 amostras de fezes coletadas durante surto de diarréia foram analisadas por RT-PCR, e 12 foram seqüenciadas para confirmar o genogrupo. O método one step PCR foi empregado para a amplificação da região B da ORF1 com o pool de primers MON 431, 432, 433 e 434. Do total, 32 (15,7%) amostras foram positivas para norovírus genogrupo GII. A comparação das seqüências dos produtos de PCR às seqüências do GenBank demonstrou 88,8% a 98,8% de identidade, sugerindo a presença de norovírus genogrupo GII em surtos de gastroenterites no Estado de São Paulo.

Echovirus 6 associated to aseptic meningitis outbreak, in São Joaquim da Barra, São Paulo, Brazil

An aseptic meningitis outbreak occurred during a period from February to May 2004 in São Joaquim da Barra, a town in the northern region of São Paulo State. A total of 40 cases were reported to the Epidemiological Surveillance Center of São Paulo State. Cerebrospinal fluid samples obtained from 23 patients were sent to the Adolfo Lutz Institute for isolation of the virus. These samples were inoculated into RD, HEp2 and Vero cell lineages and those presenting a cytopathogenic effect were selected for analysis by indirect immunofluorescence assay (IFA), neutralization testing (Nt) and reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cytopathogenic effects were observed in 52.2% (12/23) of these samples. All isolated viruses were identified as human enterovirus by IFA and RT-PCR and echovirus 6 was typed by IFA and Nt. Our results confirmed the participation and importance of echovirus as the etiological agent responsible for this outbreak and the serotype diversity of human enteroviruses circulating in São Paulo State.

Entre fevereiro e maio de 2004, em São Joaquim da Barra, Estado de São Paulo, foi notificado ao Centro de Vigilância Epidemiológica (CVE) um surto de meningite asséptica (MA) envolvendo 40 indivíduos. Foram enviadas ao Instituto Adolfo Lutz amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) de 23 pacientes com MA para tentativa de isolamento viral. Estas amostras foram inoculadas em 3 linhagens celulares: RD, HEp2 e Vero. Culturas celulares que apresentaram efeito citopático (ECP) foram submetidas a ensaio de Imunofluorescência Indireta (IFI), reação de Neutralização (Nt) e RT-PCR (Transcrição Reversa Reação em Cadeia da Polimerase). Em 52,2% (12/23) das amostras foi observado ECP. Todos os vírus isolados foram identificados como gênero HEV por IFI e RT-PCR e o sorotipo echovirus 6 (E-6) por IFI e Nt. Nossos resultados confirmam a participação e importância dos echovirus como agente etiológico responsável pelo surto ocorrido e a diversidade de sorotipos circulantes no Estado de São Paulo.

Rotavirus in south-americans indians communities / Rotavírus em comunidades indígenas sul-americanas

Rotaviruses are the most important etiologic agents of acute gastroenteritis in children under five years old. These viruses are responsible for several diarrhea outbreaks in both developed and developing countries. Acute diarrhea diseases are the foremost health problem in Indians communities. Serological survey among Brazilian Indians demonstrated seropositivity for rotavirus raged from 17% to 74%. Outbreaks investigations among these populations are extremely rare, especially in Brazilian southwestern region, standing out the importance in identifying the source of ongoing outbreaks, and for preventing the hereafter and/or most severe cases. The poor sanitation conditions and hygiene practices, as well as the possibility of native contact with wild virus reservoirs, account for enteropathogens spreading within Indian communities. Special precautions should currently be taken with respect to diarrhea monitoring among Amerindians, especially in the South American populations.

Rotavírus são os agentes etiológicos mais importantes das gastroenterites em crianças menores de cinco anos, responsáveis por vários surtos de diarréia em países desenvolvidos e em desenvolvimento. As doenças diarréicas agudas são os principais problemas de saúde dentro das comunidades indígenas. Vigilâncias sorológicas em índios brasileiros demonstraram 17% a 74% de soropositividade para rotavírus. A investigação de surtos entre essas populações são raras, principalmente na região sudeste do Brasil. A identificação da fonte original de tais surtos é importante para a prevenção de casos futuros, além de contribuir para o estabelecimento de um perfil epidemiológico. As precárias condições sanitárias e de práticas de higiene, assim como a possibilidade de contato dos índios com reservatórios selvagens, levam a dispersão de enteropatógenos dentro das comunidades indígenas. Atenções especiais devem ser adotadas em relação ao monitoramento de diarréia entre Ameríndios, especialmente os sul-americanos.