RESUMO
The VH1-related human protein (VHR) gene was localized to human chromosome 17q21 in a region thought to contain the BRCA1 locus, a locus that confers susceptibility to breast and ovarian cancer. VHR encodes a phosphatase with dual specificity for tyrosine and serine residues. Thus it is a plausible candidate for a tumor suppressor gene such as BRCA1. To test this possibility, the VHR coding sequence was screened in individuals with familial breast cancer and in sporadic breast tumor and breast cancer cell lines. No mutations were detected, suggesting that the VHR gene is not BRCA1.
Assuntos
Cromossomos Humanos Par 17 , Genes Supressores de Tumor , Proteínas de Neoplasias , Proteínas de Neoplasias/genética , Proteínas Tirosina Fosfatases/genética , Fatores de Transcrição , Proteína BRCA1 , Sequência de Bases , Neoplasias da Mama/genética , Neoplasias da Mama/patologia , Análise Mutacional de DNA , DNA Complementar/genética , DNA de Neoplasias/genética , Fosfatase 3 de Especificidade Dupla , Feminino , Genes , Predisposição Genética para Doença , Humanos , Dados de Sequência Molecular , Proteínas de Neoplasias/fisiologia , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo Genético , Polimorfismo Conformacional de Fita Simples , RNA Mensageiro/genética , RNA Neoplásico/genética , Células Tumorais CultivadasRESUMO
The yeast YAP1 gene encodes a transcriptional regulatory protein that utilizes a basic region-leucine zipper (bZip) DNA-binding domain to recognize its cognate DNA element. A synthetic reporter gene containing a SV40 AP-1 response element (ARE) cloned upstream of a TRP5 promoter-lacZ gene fusion shows yAP-1-dependent transactivation in vivo. Recent work has shown that changes in the gene dosage of this factor can dramatically alter the ability of a cell to tolerate a host of toxic agents including cadmium, cycloheximide, and sulfometuron methyl. We have focused on the YAP1-dependent cadmium resistance as cells that lack a functional YAP1 gene are hypersensitive to this metal. Deletion mapping experiments define two domains in the carboxyl-terminal region of the yAP-1 protein that are required for normal cadmium tolerance and ARE-TRP5-lacZ expression. Single amino acid substitutions in the bZip domain of yAP-1 indicate that this region is required for normal DNA binding and in vivo function of the protein. Replacement of a non-canonical asparagine with leucine in the yAP-1 leucine zipper leads to production of a defective protein. A substitution mutation in the basic domain converts this mutant protein into a dominant negative factor. The ability of yAP-1 to act as a positive regulator of transcription is required for its biological action.
Assuntos
Cádmio/toxicidade , Proteínas de Ligação a DNA/metabolismo , Regulação Fúngica da Expressão Gênica , Genes Fúngicos , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae , Saccharomyces cerevisiae/genética , Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Fatores de Transcrição/metabolismo , Transcrição Gênica , Sequência de Bases , Western Blotting , Cicloeximida/toxicidade , Primers do DNA , Proteínas de Ligação a DNA/biossíntese , Proteínas de Ligação a DNA/isolamento & purificação , Resistência Microbiana a Medicamentos/genética , Proteínas Fúngicas/metabolismo , Regulação Fúngica da Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Dados de Sequência Molecular , Mutagênese , Fenótipo , Plasmídeos , Proteínas Recombinantes/biossíntese , Proteínas Recombinantes/isolamento & purificação , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Saccharomyces cerevisiae/efeitos dos fármacos , Deleção de Sequência , Compostos de Sulfonilureia/toxicidade , Fatores de Transcrição/biossíntese , Fatores de Transcrição/isolamento & purificação , Ativação Transcricional , beta-Galactosidase/biossínteseRESUMO
The calphotin protein, encoded by the calphotin (cap) gene, is expressed in the soma and axons of all Drosophila photoreceptor cells. It is expressed early in photo-receptor cell development, at the time when cell-type decisions are being made. Expression of calphotin is not altered by the glass mutation, which blocks photoreceptor cell development. The calphotin protein binds calcium and contains a long C-terminal leucine zipper. Potential implications of these properties are discussed.
Assuntos
Proteínas de Ligação ao Cálcio/genética , Proteínas de Ligação ao Cálcio/metabolismo , Cálcio/metabolismo , Proteínas de Drosophila , Hormônios de Inseto/genética , Proteínas de Insetos , Zíper de Leucina/genética , Células Fotorreceptoras/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Animais , Anticorpos Monoclonais , Sequência de Bases , Proteínas de Ligação ao Cálcio/análise , Proteínas de Ligação ao Cálcio/isolamento & purificação , Clonagem Molecular , DNA/genética , DNA/isolamento & purificação , Drosophila/genética , Drosophila/fisiologia , Escherichia coli/genética , Immunoblotting , Hormônios de Inseto/análise , Hormônios de Inseto/metabolismo , Zíper de Leucina/fisiologia , Dados de Sequência Molecular , Peso Molecular , Oligodesoxirribonucleotídeos , Células Fotorreceptoras/ultraestrutura , Estrutura Secundária de Proteína , Mapeamento por Restrição , Transcrição GênicaRESUMO
The jun family of transcriptional activators includes mammalian AP-1 as well as the yeast regulatory protein GCN4. Recently, an additional transcriptional activator has been found in yeast that recognizes the TGACTCA sequence element common in GCN4/AP-1 sites. This factor was designated yAP-1. The structural gene for yAP-1 has now been isolated and characterized. The deduced amino acid sequence predicts a protein of 650 residues, considerably larger than GCN4 or c-Jun. The amino terminus of yAP-1 is homologous to the carboxy-terminal DNA-binding domains of GCN4 and c-Jun. Disruption of the YAP1 gene demonstrates this gene is not essential but is required for AP-1 recognition element-dependent transcriptional activation. DNA-affinity blots of proteins from YAP1 cells suggest the presence of additional TGACTCA-binding proteins other than GCN4 and yAP-1. Furthermore, expression of at least one of these related DNA-binding proteins appears to be under control of yAP-1.
Assuntos
Proteínas Fúngicas/genética , Genes Fúngicos , Proteínas Proto-Oncogênicas/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae , Saccharomyces cerevisiae/genética , Fatores de Transcrição/genética , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Sítios de Ligação , Clonagem Molecular , DNA Fúngico , Endonucleases , Dados de Sequência Molecular , Mutação , Endonucleases Específicas para DNA e RNA de Cadeia SimplesRESUMO
The consensus recognition element for the mammalian transcription factor AP-1 is very similar to that of the transcriptional activator GCN4. Here, we show that the AP-1 recognition element (ARE) found in the SV40 enhancer can activate transcription from a heterologous promoter in S. cerevisiae. This activation, however, is not dependent on the presence of GCN4 as evidenced by ARE-dependent transcription in a gcn4 yeast strain. A previously unknown yeast transcription factor that is probably responsible for this activation was identified and highly purified. The yeast factor, designated yAP-1, shares remarkably similar biochemical and DNA-binding characteristics with mammalian AP-1. These data suggest that the yeast and mammalian AP-1 are evolutionarily conserved and perhaps functionally related. Also note-worthy is that GCN4 can bind to a GCN4 recognition element (GCRE) and to the ARE with approximately equal affinities; yAP-1, however, has a much lower affinity for the GCRE than the ARE, suggesting that yAP-1 can discriminate between these elements in vivo.
Assuntos
Evolução Biológica , Proteínas de Ligação a DNA/genética , Proteínas Fúngicas/genética , Proteínas Quinases , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae , Saccharomyces cerevisiae/genética , Vírus 40 dos Símios/genética , Fatores de Transcrição/genética , Transcrição Gênica , Anticorpos Monoclonais , Sequência de Bases , Núcleo Celular/metabolismo , Proteínas de Ligação a DNA/análise , Elementos Facilitadores Genéticos , Proteínas Fúngicas/análise , Genes Fúngicos , Genes Virais , Células HeLa/metabolismo , Humanos , Plasmídeos , Regiões Promotoras Genéticas , Proteínas Proto-Oncogênicas c-jun , Especificidade da Espécie , Fatores de Transcrição/análiseAssuntos
Proteínas de Ligação a DNA/genética , Proteínas Fúngicas/genética , Regulação da Expressão Gênica , Genes Fúngicos , Genes , Proteínas Proto-Oncogênicas/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae , Saccharomyces cerevisiae/genética , Fatores de Transcrição/genética , Transcrição Gênica , Sequência de Aminoácidos , Clonagem Molecular , Dados de Sequência Molecular , Mutação , Plasmídeos , Proteínas Proto-Oncogênicas c-jun , Homologia de Sequência do Ácido Nucleico , Transdução de SinaisRESUMO
The binding sites of Hoechst 33258, netropsin and distamycin on three DNA restriction fragments from plasmid pBR322 were compared by footprinting with methidiumpropyl-EDTA X Fe(II) [MPE X Fe(II)]. Hoechst, netropsin and distamycin share common binding sites that are five +/- one bp in size and rich in A X T DNA base pairs. The five base pair protection patterns for Hoechst may result from a central three base pair recognition site bound by two bisbenzimidazole NHs forming a bridge on the floor of the minor groove between adjacent adenine N3 and thymine O2 atoms on opposite helix strands. Hydrophobic interaction of the flanking phenol and N-methylpiperazine rings would afford a steric blockade of one additional base pair on each side.
