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Proteínas/história , Animais , História do Século XX , Biossíntese de Proteínas , Estados UnidosRESUMO
The aminoacylation of tRNA has been investigated in relation to protein aynthesis in living HeLa cells. In cells growing normally, the rates of tRNA charing are compatible with the observed entry of amino acids into protein. In contrast, when protein synthesis is inhibited 95--98% by either reduced temperature or cycloheximide, aminoacylation of tRNA is relatively unaffected. We conclude that, under these conditions, the aminoacylation of tRNA is uncoupled from subsequent steps in protein synthesis. These results provide for the first time a possible biological role for the observed aminoacyl-tRNA hydrolase activities of the tRNA synthetases.
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Aminoácidos/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , RNA de Transferência/metabolismo , Aminoacil-tRNA Sintetases/metabolismo , Cicloeximida/farmacologia , Células HeLa/metabolismo , Cinética , Membranas/metabolismo , Microssomos/metabolismo , Precursores de Proteínas/biossíntese , Solubilidade , TemperaturaRESUMO
A simple reaction system was developed to examine the binding of polysomes to membranes of the endoplasmic reticulum and to investigate the fate of ribosomes and nascent chains during protein synthesis in vitro. The system conssited of Sephadex G-25 treated post-mitochondrial fraction prepared from rat liver (Sephadex-PM) as a source of membranes, and radioactive free polysomes prepared from another rat liver. The following results were obtained. 1. Nascent chains on free polysomes labeled in vivo were transferred to membranes in vitro. The process required protein synthesis. 2. This reaction occurred in two steps: a) Binding of the free polysomes to membranes in the absence of protein synthesis. b) Release of ribosomes, leaving nascent chains on the membranes, requiring protein syntehsis. 3. A portion of the ribosomes found on membranes in vivi (membrane-bound ribosomes) was also released from the membranes during incubation in vitro, leaving their nascent chains on the membranes. The significance of the transfer of nascent chains from free polysomes to membranes in vitro is discussed in the light of known polysome-membrane interaction in vivo.
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Membrana Celular/metabolismo , Fígado/metabolismo , Polirribossomos/metabolismo , Animais , Sítios de Ligação , Fracionamento Celular , Membrana Celular/ultraestrutura , Cicloeximida/farmacologia , Retículo Endoplasmático/metabolismo , Retículo Endoplasmático/ultraestrutura , Feminino , Cinética , Pactamicina/farmacologia , Polirribossomos/ultraestrutura , Biossíntese de Proteínas/efeitos dos fármacos , Puromicina/farmacologia , Ratos , Ribossomos/metabolismo , Ribossomos/ultraestruturaAssuntos
Regeneração Hepática/efeitos dos fármacos , Fígado/metabolismo , Fenobarbital/farmacologia , Polirribossomos/metabolismo , Animais , Sítios de Ligação , Radioisótopos de Carbono , Membrana Celular/efeitos dos fármacos , Membrana Celular/metabolismo , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Cromatografia em Gel , Citoplasma/efeitos dos fármacos , Citoplasma/metabolismo , Estradiol/farmacologia , Etanol/farmacologia , Feminino , Fígado/citologia , Fígado/efeitos dos fármacos , Ácido Orótico , Polirribossomos/efeitos dos fármacos , Testosterona/farmacologiaAssuntos
Retículo Endoplasmático/metabolismo , Fígado/citologia , Biossíntese de Proteínas , Aminoácidos/antagonistas & inibidores , Aminoácidos/metabolismo , Animais , Isótopos de Carbono , Sistema Livre de Células , Feminino , Glutationa/farmacologia , Concentração de Íons de Hidrogênio , Técnicas In Vitro , Microssomos Hepáticos/efeitos dos fármacos , Microssomos Hepáticos/metabolismo , Ratos , InaniçãoAssuntos
Albuminas/biossíntese , Microssomos Hepáticos/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , Aminoácidos/metabolismo , Sulfato de Amônio , Animais , Isótopos de Carbono , Precipitação Química , Cromatografia em Gel , Eletroforese Descontínua , Hepatectomia , Imunoeletroforese , Fígado/citologia , Fígado/fisiologia , Regeneração Hepática , Coelhos/imunologia , Ratos , Albumina Sérica/isolamento & purificação , Frações Subcelulares/metabolismoAssuntos
Regeneração Hepática , Microssomos Hepáticos/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , Amidas/farmacologia , Animais , Isótopos de Carbono , Sistema Livre de Células , Cromatografia em Camada Fina , Dissulfetos/farmacologia , Eletroforese Descontínua , Feminino , Guanosina Trifosfato/farmacologia , Hepatectomia , Leucina/metabolismo , Microssomos Hepáticos/análise , Microssomos Hepáticos/efeitos dos fármacos , Microssomos Hepáticos/enzimologia , Oxirredução , Perfusão , Monoéster Fosfórico Hidrolases/análise , RNA/análise , RNA de Transferência/metabolismo , Ratos , Compostos de Sulfidrila/farmacologiaAssuntos
Regeneração Hepática , Microssomos Hepáticos/metabolismo , Oxirredução , Biossíntese de Proteínas , Aminoácidos/metabolismo , Animais , Compostos Azo/farmacologia , Formamidas/farmacologia , Guanosina Trifosfato/farmacologia , Microssomos Hepáticos/efeitos dos fármacos , RNA de Transferência/metabolismo , Ratos , Estimulação QuímicaAssuntos
Leucina/metabolismo , Fígado/metabolismo , Biossíntese Peptídica , RNA de Transferência/metabolismo , Ribossomos/metabolismo , Cloreto de Amônio/farmacologia , Animais , Antibacterianos/farmacologia , Antibióticos Antineoplásicos/farmacologia , Isótopos de Carbono , Cloretos/farmacologia , Cromatografia em Gel , Ácido Fusídico/farmacologia , Nucleotídeos de Guanina/farmacologia , Fígado/citologia , Fígado/efeitos dos fármacos , Magnésio/farmacologia , Puromicina/farmacologia , Ratos , Ribossomos/efeitos dos fármacos , TrítioAssuntos
Fígado/análise , Microssomos/análise , RNA/análise , Aminoácidos , Animais , Isótopos de Carbono , Centrifugação com Gradiente de Concentração , Centrifugação Zonal , Cromatografia , Cromatografia em Gel , Cromatografia por Troca Iônica , Feminino , Hidroxiapatitas , Membranas , Peso Molecular , Nucleotídeos/análise , Purinas/análise , RNA de Transferência , Ratos , Ribossomos , EspectrofotometriaRESUMO
Certain qualitative aspects of protein synthesis in the livers of starved, starved-re-fed and actinomycin D-treated rats have been examined by polyacrylamide-gel electrophoresis. Animals were exposed to a mixture of (14)C-labelled acids for 18-20min. and killed, and an ultrasonic extract of newly formed protein in microsomal vesicles was prepared and examined by gel electrophoresis. In normal and starved-re-fed animals, 27% of the newly synthesized protein was albumin. During starvation, when RNA synthesis was decreased, the percentage of newly formed protein as albumin rose. After actinomycin D treatment of starved-re-fed rats, when only stable messenger RNA persisted in the cytoplasm, albumin synthesis increased to 63% of the total. This finding suggested that albumin was the primary protein synthesized on stable messenger RNA.
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Albuminas/biossíntese , Fígado/metabolismo , Biossíntese de Proteínas , Ribossomos/metabolismo , Animais , Isótopos de Carbono , Dactinomicina/farmacologia , Dieta , Eletroforese , Feminino , Imunodifusão , Injeções Intraperitoneais , Microssomos/análise , RNA Mensageiro , Ratos , Inanição , UltrassomRESUMO
Starvation of rats for several days led to marked decrease in cytoplasmic polysomes and accumulation of breakdown products having S values less than 200s. Re-feeding of the starved animals induced a rapid reassembly of polysomes. These newly formed polysomes, in the presence of actinomycin D, decayed in a biphasic fashion: about two-thirds decayed with an apparent half-life of 3-3(1/2)hr. but the other one-third were much more stable. Evidence that polysome decay is an accurate reflexion of messenger RNA stability is presented, and it is concluded that in the presence of large doses of actinomycin D, rat-liver cytoplasm contains messenger RNA classes of widely varying stability, the more stable class having a half-life of at least 80hr. The half-life of liver ribosomes was also determined and was found to be 110-127hr.