Esculentin 1-21: a linear antimicrobial peptide from frog skin with inhibitory effect on bovine mastitis-causing bacteria.

Mastitis, or inflammation of the mammary gland, is the most common and expensive illness of dairy cows throughout the world. Although stress and physical injuries may give rise to inflammation of the udders, infections by bacteria or other microorganisms remain the major cause, and infusion of antibiotics is the main treatment approach. However, the increased emergence of multidrug-resistant pathogens and the production of milk contaminated with antibiotics has become a serious threat in the livestock. Hence, there is an urgent need for the discovery of new therapeutic agents with a new mode of action. Gene-encoded AMPs, which represent the first line of defence in all living organisms, are considered as promising candidates for the development of new anti-infective agents. This paper reports on the antibacterial activities in vitro and in an animal model, of the frog skin AMP esculentin 1-21 [Esc(1-21)], along with a plausible mode of action. Our data revealed that this peptide (i) is highly potent against the most common mastitis-causing microbes (e.g. Streptococcus agalactiae); and (ii) is active in vivo, causing a visible regression of the clinical stage of mastitis in dairy cows, after 1 week of peptide treatment. Biophysical characterisation revealed that the peptide adopts an alpha-helical structure in microbial mimicking membranes and is able to permeate the membrane of S. agalactiae in a dose-dependent manner. Overall, these data suggest Esc(1-21) as an attractive AMP for the future design of new antibiotics to cure mastitis in cattle.

Effect of phorbol myristate acetate (PMA) and ionophore A23187 on interleukin-2 levels and proliferation of activated T lymphocytes from patients with lepromatous leprosy

The immunodeficiency present in patients with lepromatous leprosy is characterized by the limited proliferation of T lymphocytes, and is explained in part by the impaired synthesis of interleukin-2 (IL-2). Diacylglycerol (DAG) and calcium produce the activation of PKC, ERK and JNK kinases, implying a normal IL-2 response. Phorbol esters, such as PMA, can substitute for DAG and are mitogenic to human T and B cells activating several cytokine-encoding genes. Ionophore A23187 increases calcium permeability across the cellular membrane to the cytosol of lymphoid cells and is considered a co-mitogen of T lymphocytes. Here we report that: 1) PHA-activated T lymphocytes from LL patients can be separated in vitro into two groups: a) responders (R) with a stimulation index (SI) of > 10 and (b) nonresponders (NR) with a SI of < 10. 2) The proliferative responses of cells from LL(R), LL(NR) and normal subjects were measured after being stimulated with: I, PHA, PMA, PMA + I PHA + PMA and PHA + PMA + ionophore (PPI). The most important result occurs in LL(NR) patients whose cells did not respond to PHA stimulation but increased to normal levels of proliferation when they were stimulated with PMA. Furthermore, the three groups, (NR, R and normals) strongly increased their responses when they were incubated with PPi. 3) Finally, Il-2 concentrations in the supernatants of cultures of T lymphocytes from LL(NR), LL(R) and controls were relatively low when they were incubated with PHA or PMA, but the addition of ionophore to PMA and the combination of PHA + PMA strongly increased the production of IL-2 in all of them, reaching the optimum IL-2 concentration when PPI is used. It can be concluded that the use of PMA, analogous to DAG, and ionophore A23187 (calcium increaser) in cultures of mitogen-activated T lymphocytes from LL patients induced the expression of the IL-2 gene, thus correcting the inadequate proliferation of T cells from LL patients.

Efecto de la infección in vitro del virus del dengue (DEN-2) sobre algunas funciones de la respuesta inmune celular del ratón / Effect of in vitro infection by the dengue virus (DEN-2) upon certain functions of the cellular immune respoinsa in the mouse

Al poner en contacto al virus del Dengue serotipo 2 (DEN-2), en un sismeta de espenocitos de ratón DBA/2 estímulados con Concanavalina A, se observó una disminución en la incorporación de (3H) Timidina. Además se encontró que en cultivos de esplenocitos murinos (DBA/2) estímulados con eritrocitos de carnero e infectados con virus DEN-2, había una dismunución en el número de células formadoras de anticuerpo. Por último, cuando una línea establecida de macrófagos (P388D1) proveniente también de ratones DBA/2 fue puesta en contacto con el virus DEN-2 y se cuantificó la síntesis de interleuquina 1 (IL-1) en un sistema de timocitos murinos, se observó que los macrófagos sectetaron altos niveles de IL-1 respecto a sus controles y que estos niveles podían ser similares a los producidos cuando los macrófagos fueron estímulados con Lipopolisacárido de E. coli. Los resultados anteriormente descritos, sugieren que el virus DEN-2 es capaz de alterar algunas funciones de la Respuesta Inmune a nivel del linfocito T y del linfocito B. Por otro lado la interacción del virus DEN-2 con la línea de macrófagos P388D1, produjo en éstos un efecto de sobreproducción de IL-1, que puede ser análogo a lo que sucede en el modelo natural humano en su etapa febril en el inicio de la viremia del paciente con Dengue ya que una de las actividades fisiológicas de la IL-1 en el humano es la de ser pirógeno endógeno

Lepra lepromatosa: estudio de algumas subpoblaciones de linfocitos y su análisis funcional / Lepromatous leprosy: study of some subpopulations of lymphocytes and its functional analysis

Se investigaron en un grupo de pacientes de lepra lepromatosa y en otro de sujetos clínicamente sanos los niveles de linfocitos T totales por medio de formación de rosetas E, determinación de linfocitos T supresores Fc-gamma y de la capacidad de transformación blastoide de sus células linfoides cuando se estimularon con concanavalina A. La determinación de linfocitos T por medio de rosetas E mostró que los pacientes tenían disminución en comparación con el grupo testigo de sujetos normales. La determinación de linfocitos T supresores Fc-gamma evaluados por la formación de rosetas con eritrocitos de pollo sensibilizados con IgG, demostró en los enfermos un incremento significativo en los niveles de dichos linfocitos T supresores. En el cultivo de linfocitos de sangre periférica, la transformación blastoide inducida por estimulación con concanavalina A y medida por incorporación de timidina tritiada presentó niveles bajos en los pacientes leprosos. Los estudios mencionados demostraron que los enfermos de lepra lepromatosa presentan un número significativamente superior de linfocitos T supresores que los mostrados en sujetos clínicamente sanos, y que aquéllos pueden ser los causantes de la transformación insuficiente de sus células linfoides tras el estímulo mitogénico de linfocitos T