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J Virol Methods ; 108(1): 41-7, 2003 Mar.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-12565152

RESUMO

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and transmissible gastroenteritis virus (TGEV) were detected and differentiated in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues from experimentally and naturally infected pigs by multiplex reverse transcription-nested polymerase chain reaction (RT-nPCR). The results of this new method were compared with in situ hybridization. A method based on xylene deparaffinization followed by proteinase K digestion yielded RNA of a suitable quality for reliable and consistent multiplex RT-nPCR analyses. PEDV and TGEV cDNAs were detected in jejunal tissues from experimentally and naturally infected pigs by multiplex RT-nPCR. Distinct positive signals for PEDV and TGEV were also detected in the same jejunal tissues by in situ hybridization. The rate of conformity between multiplex RT-nPCR and in situ hybridization was 100% for the detection of PEDV and TGEV in formalin-fixed paraffin-embedded jejunal tissues.


Assuntos
Coronavirus/genética , Coronavirus/isolamento & purificação , Vírus da Gastroenterite Transmissível/genética , Vírus da Gastroenterite Transmissível/isolamento & purificação , Virologia/métodos , Animais , Sequência de Bases , Coronavirus/classificação , Proteínas M de Coronavírus , Primers do DNA/genética , DNA Viral/genética , DNA Viral/isolamento & purificação , Formaldeído , Gastroenterite Suína Transmissível/epidemiologia , Gastroenterite Suína Transmissível/virologia , Hibridização In Situ , Jejuno/virologia , Epidemiologia Molecular , Inclusão em Parafina , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Sensibilidade e Especificidade , Sus scrofa , Fixação de Tecidos , Vírus da Gastroenterite Transmissível/classificação , Proteínas da Matriz Viral/genética , Virologia/estatística & dados numéricos
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