First report of vancomycin-resistant Enterococcus faecalis in Uberaba, Minas Gerais state

In this study we report the first isolation of VanA-type vancomycin-resistant Enterococcus faecalis strains from two different patients hospitalized in the same intensive care unit at the hospital of Universidade Federal do Triângulo Mineiro (UFTM), Uberaba, Minas Gerais, Brazil.

Virulence-associated characteristics of Enterococcus faecalis strains isolated from clinical sources

Thirty-two clinical isolates of Enterococcus faecalis were screened for virulence factors. Twenty-four (75%) isolates produced hemolysin on Mueller-Hinton blood agar plates with sheep erythrocytes. However, the cell free heat-stable hemolysin was detected in all isolates (100%) of E. faecalis when grown in BHI-GA (BHI medium supplemented with 1% glucose and 0.03% L-arginine), but not in BHI broth alone. Twenty-four isolates (75%) produced caseinase and 23 (71.9%) lipase, but none of the isolates produced gelatinase. Fifteen (46.9%) culture filtrates caused rounding and membrane alterations with blebbing formation followed by death in HeLa and HEp-2 cells, but not in Vero cells. Thirteen isolates (40.6%) agglutinated rabbit erythrocytes, but did not produce hemagglutination in other bloods, containing or not 1% D-manose. Sixteen (50%) E. faecalis isolates adhered to HeLa cells and thirteen (40.6%) to HEp-2 cells, but all isolates adhered to polypropylene microtiter plates, indicating that clinical E. faecalis possess the ability to form biofilm in vitro. All the isolates were resistant to the bactericidal action of normal serum and did not produce aerobactin. These findings suggest that adherence and consequently biofilm formation on ephitelial host cells are the first steps in the E. faecalis virulence and that hemolysin, lipase, caseinase and other virulence factors act as causative of human epithelial cell damages.

Foram estudados os fatores de virulência de trinta e duas amostras de Enterococcus faecalis, isolados de casos clínicos. Vinte e quatro amostras (75%) produziram hemolisina em ágar sangue preparado com hemácias de carneiro. No sobrenadante da cultura em BHI nenhuma amostra produziu hemolisina, no entanto quando cultivadas em meio BHI suplementado com 1% de glucose e 0,03% de L-arginina (BHI-GA), 100% das amostras lisaram hemácias de carneiro. Vinte e quatro (75%) amostras produziram caseinase e 23 (71,9%) lipase, mas nenhuma amostra produziu gelatinase. Dezesseis (46,9%) causaram arredondamento e alteração na membrana das células, com formação de vesículas e, em seguida, a morte das células HeLa e HEp-2. Treze amostras (40,6) aglutinaram eritrócitos de coelhos, mas não aglutinaram outros eritrócitos na presença ou na ausência de 1% de D-manose. Dezesseis (50%) aderiram em células HeLa e 13 (40,6%) em células HEp-2, mas todas as amostras de E. faecalis aderiram na microplaca de polipropileno, indicando que E. faecalis isolados de casos clínicos possuem capacidade de formar biofilme "in vitro". Todos os isolados mostraram-se resistentes à ação bactericida do soro normal e não produziram aerobactina. Esses resultados sugerem que, inicialmente, a colonização ou infecção por E. faecalis ocorre pela aderência e formação de biofilme nas células epiteliais e a produção de hemolisina, lípase e caseinase pode atuar como fatores de virulência na infecção por E. faecalis.

Emergence of VanB phenotype-vanA genotype in vancomycin-resistant enterococci in Brazilian hospital

In Brazil, vancomycin-resistant enterococci (VRE) have been reported as nosocomial pathogens since 1998. Recently, in a VRE surveillance in a hospital, we detected two Enterococcus faecalis isolates with vanA genotype and susceptible to teicoplanin. This is the first report of VanB phenotype-vanA genotype enterococci isolated from humans in Brazil.

No Brasil, enterococos resistente à vancomicina (VRE) têm sido descritos como patógenos hospitalares, desde 1998. Durante um monitoramento de VRE em um hospital, foram detectadas duas cepas de Enterococcus faecalis com genótipo vanA, e sensibilidade à teicoplanina. Este é o primeiro relato do isolamento de enterococo fenótipo VanB e genótipo vanA de amostra clínica no Brasil.

Outbreaks associated to bloodstream infections with Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus spp in premature neonates in a university hospital from Brazil

Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci (CoNS) are among the most important nosocomial pathogens in patients from neonatal intensive care units, mainly in bloodstream infections. The main objective of this study is to determine the occurrence of nosocomial infections by these microorganisms using two surveillance systems (Laboratorial Surveillance and National Nosocomial Infection Surveillance System) and to determine the most important risk factors during a two-year period (2001-2002). Two outbreaks by both methicillin susceptible S. aureus (MSSA) (1.5%) and methicillin resistant CoNS (MRCoNS) (1.0%) were observed, from January to February/02 and August to September/02. Endemic incidence rates of 3.77% and 5.16% of S. aureus and CoNS, respectively were detected. Risk factors included age =7 days, hospitalization > or = 7 days and utilization of polietilene central vascular catheter (CVC) through vein dissection (phlebotomy), but none of these independent factors were confirmed by the multivariate analysis. However, oxacillin resistant CoNS prevailed (66.0%) in the epidemic episodes. Molecular analysis by pulsed field gel electrophoresis showed the polyclonal nature of S. aureus isolates. In conclusion, two outbreaks were identified of mixed etiology by MSSA and MRCoNS associated to the lack of an adequate material (central venous catheter) for neonates, related invasive procedure. The outbreaks were controlled with the substitution of polietilene CVC for peripherally inserted central catheter.

Staphylococcus aureus e Estafilococos coagulase-negativa (ECN) estão entre os patógenos hospitalares mais importantes em pacientes de unidades de terapia intensiva neonatal, principalmente em infecções da corrente sanguínea. O principal objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de infecções hospitalares por estes microrganismos usando dois sistemas de vigilância (laboratorial e "National Nosocomial Infection Surveillance" - NNIS) e determinar os fatores de risco mais importantes durante o período de dois anos (2001-2002). Dois surtos por ambos S. aureus suscetível a meticilina (1.5%) e ECN resistente à meticilina (1.0%) foram observados, de janeiro a fevereiro/02 e agosto a setembro/02. Taxas de incidência endêmica de 3.77% e 5.16% para S.aureus e ECN foram detectadas respectivamente. Fatores de risco incluíram idade =7 dias, hospitalização > ou = 7 dias e utilização de cateter vascular central (CVC) de polietileno através de dissecação de veia (flebotomia), mas, nenhum desses fatores independentes foram confirmados pela análise multivariada. Por outro lado, ECN resistente à oxacilina prevaleceu (66.0%) nos episódios epidêmicos. Análise molecular através de gel de eletroforese em campo pulsátil mostrou a natureza policlonal das amostras de S. aureus. Em conclusão, nós identificamos dois surtos de etiologia mista por S. aureus suscetível à meticilina e ECN resistente à meticilina associados à falta de material adequado (cateter vascular central) para neonatos, relacionados a procedimento invasivo. Os dois surtos foram controlados com a substituição de CVC de polietileno pelo cateter central de inserção periférica.

Conventional versus molecular tests (Multiplex PCR and PCR mecA gene) for detection of methicillin resistant Staphylococcus aureus

In this study, for detection of methicillin-resistant S. aureus (MRSA), a mecA multiplex PCR-based amplification was compared with the 1 µg oxacillin disk diffusion test, detection of minimal inhibitory concentration (MIC), and screening in agar with 4% NaCl and 6 µg/mL oxacillin. Among 24 isolates obtained from blood, mecA gene was detected in only 16 (66.7%) isolates by multiplex PCR. The MIC test showed a range of resistance to oxacillin from 0.19 to 512 µg/mL, among these isolates. Data obtained by screening and dilution tests showed that sensitivity to methicillin was 80.0% and 72.8%, respectively, when compared with the presence of mecA gene (multiplex). All isolates, including the negatives, when revaluated for mecA gene by PCR were positive. beta-lactamase production was positive for 20/25 isolates (80.0%). About » of patients died dispite most of them (83.3%) were adequately treated. The simultaneous identification of the bacteria and determination of this susceptibility to antibiotics are necessary for the choice of empiric antibiotic therapy in suspected staphylococcal sepse, but is important to considering the sensibility, specificity and validation of the available kits.

Nesse estudo, para detecção de S. aureus resistente à meticilina (MRSA), a amplificação do gene mecA baseada no multiplex PCR foi comparada com os testes de difusão com disco para 1 µg/mL de oxacilina, detecção da concentração inibitória mínima (CIM), meio de triagem com 4% de NaCl e 6 µg/mL de oxacilina. Na investigação de 24 isolados obtidos de sangue, o genótipo mecA foi detectado em apenas 16 (66,7%) dos isolados pelo multiplex PCR. A CIM apresentou valores variando de 0,19 a 512 µg/mL entre os isolados de MRSA. Os dados obtidos pelos testes de triagem e diluição em ágar apresentaram sensibilidades de 80,0% e 72,8% respectivamente, quando comparados com a presença do gene mecA (multiplex). Todos os isolados, incluindo os negativos, quando reavaliados com a técnica de PCR exclusivo para este gene, o resultado foi positivo. A produção de beta-lactamase foi positiva em 20/25 (80,0%) dos isolados. Cerca de » dos pacientes evoluiu para óbito apesar da maioria (83,3%) ter sido tratada adequadamente. A identificação simultânea da bactéria e sua susceptibilidade aos antibióticos é necessária para a escolha de uma terapia adequada para casos de sepse estafilocócica, mas é importante considerar a sensibilidade, especificidade e validação dos kits disponíveis.

Nosocomial outbreaks due to Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii in a Neonatal Intensive Care Unit (NICU) of the Uberlândia Federal University Hospital

The study documents the occurrence of two subsequent outbreaks in the NICU of HC-UFU, caused by epidemic strains of multiresistant Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii, that occurred between March/01 and September and between October/01 and March/02, respectively. The P. aeruginosa outbreak included seven neonates with conjunctivitis and three with bacteremia. A case-control study was conducted for the A. baumannii outbreak, with 11 and 22 neonates, respectively. The isolates of A. baumannii were resistant to gentamacin and ciprofloxacin. P. aeruginosa isolates were resistant to ampicillin/sulbactam gentamicin and ciprofloxacin. The hands of healthcare workers and environmental cultures were negative. The outbreak of P. aeruginosa resulted in the increase of use of imipenem, which could have favoured the emergence of a A. baumannii epidemic strain, despite of its susceptibility to this antibiotic. The risk factors for A. baumannii infection were: weight 1500g, age 7 days, hospitalization > 7 days and use of carbapenems. Containment of the two outbreaks was achieved by introduction of strict hygiene measures and careful nursing care of the infected infants. The reservatory and the route of transmission were not found.

O objetivo foi relatar a ocorrência de dois surtos subseqüentes na UTIN do HC-UFU, por amostras epidêmicas de P. aeruginosa e A. baumannii multirresistentes nos períodos de Mar - Set/01 e Out - Mar/02, respectivamente. O surto por P. aeruginosa incluiu sete neonatos com conjuntivite e três com bacteremia e um estudo caso-controle foi realizado no surto por A. baumannii com 11 e 22 neonatos respectivamente. Os isolados de A. baumannii foram resistentes a gentamicina e ciprofloxacina e os de P. aeruginosa a ampicilina/sulbactam além de gentamicina e ciprofloxacina. As culturas ambientais e das mãos dos profissionais de saúde foram negativas. O surto por P. aeruginosa resultou no aumento do uso de imipenem o que pode ter favorecido a emergência do surto por A. baumannii que embora suscetível a este beta-lactâmico apresentou uma multiresistência importante. A análise univariada relacionou os fatores de risco predisponentes para infecção por A. baumannii: peso 1500g, idade 7 dias, hospitalização > 7 dias e uso de carbapenema. O término dos surtos foi alcançado através medidas de controle de infecção e isolamento de coorte dos neonatos infectados, não sendo possível definir o reservatório e a via de transmissão.

Nosocomial outbreaks due to Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii in a Neonatal Intensive Care Unit (NICU) of the Uberlândia Federal University Hospital

The study documents the occurrence of two subsequent outbreaks in the NICU of HC-UFU, caused by epidemic strains of multiresistant Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii, that occurred between March/01 and September and between October/01 and March/02, respectively. The P. aeruginosa outbreak included seven neonates with conjunctivitis and three with bacteremia. A case-control study was conducted for the A. baumannii outbreak, with 11 and 22 neonates, respectively. The isolates of A. baumannii were resistant to gentamacin and ciprofloxacin. P. aeruginosa isolates were resistant to ampicillin/sulbactam gentamicin and ciprofloxacin. The hands of healthcare workers and environmental cultures were negative. The outbreak of P. aeruginosa resulted in the increase of use of imipenem, which could have favoured the emergence of a A. baumannii epidemic strain, despite of its susceptibility to this antibiotic. The risk factors for A. baumannii infection were: weight 1500g, age 7 days, hospitalization > 7 days and use of carbapenems. Containment of the two outbreaks was achieved by introduction of strict hygiene measures and careful nursing care of the infected infants. The reservatory and the route of transmission were not found.

O objetivo foi relatar a ocorrência de dois surtos subseqüentes na UTIN do HC-UFU, por amostras epidêmicas de P. aeruginosa e A. baumannii multirresistentes nos períodos de Mar - Set/01 e Out - Mar/02, respectivamente. O surto por P. aeruginosa incluiu sete neonatos com conjuntivite e três com bacteremia e um estudo caso-controle foi realizado no surto por A. baumannii com 11 e 22 neonatos respectivamente. Os isolados de A. baumannii foram resistentes a gentamicina e ciprofloxacina e os de P. aeruginosa a ampicilina/sulbactam além de gentamicina e ciprofloxacina. As culturas ambientais e das mãos dos profissionais de saúde foram negativas. O surto por P. aeruginosa resultou no aumento do uso de imipenem o que pode ter favorecido a emergência do surto por A. baumannii que embora suscetível a este beta-lactâmico apresentou uma multiresistência importante. A análise univariada relacionou os fatores de risco predisponentes para infecção por A. baumannii: peso 1500g, idade 7 dias, hospitalização > 7 dias e uso de carbapenema. O término dos surtos foi alcançado através medidas de controle de infecção e isolamento de coorte dos neonatos infectados, não sendo possível definir o reservatório e a via de transmissão.

Conventional versus molecular tests (Multiplex PCR and PCR mecA gene) for detection of methicillin resistant Staphylococcus aureus

In this study, for detection of methicillin-resistant S. aureus (MRSA), a mecA multiplex PCR-based amplification was compared with the 1 µg oxacillin disk diffusion test, detection of minimal inhibitory concentration (MIC), and screening in agar with 4% NaCl and 6 µg/mL oxacillin. Among 24 isolates obtained from blood, mecA gene was detected in only 16 (66.7%) isolates by multiplex PCR. The MIC test showed a range of resistance to oxacillin from 0.19 to 512 µg/mL, among these isolates. Data obtained by screening and dilution tests showed that sensitivity to methicillin was 80.0% and 72.8%, respectively, when compared with the presence of mecA gene (multiplex). All isolates, including the negatives, when revaluated for mecA gene by PCR were positive. beta-lactamase production was positive for 20/25 isolates (80.0%). About » of patients died dispite most of them (83.3%) were adequately treated. The simultaneous identification of the bacteria and determination of this susceptibility to antibiotics are necessary for the choice of empiric antibiotic therapy in suspected staphylococcal sepse, but is important to considering the sensibility, specificity and validation of the available kits.

Nesse estudo, para detecção de S. aureus resistente à meticilina (MRSA), a amplificação do gene mecA baseada no multiplex PCR foi comparada com os testes de difusão com disco para 1 µg/mL de oxacilina, detecção da concentração inibitória mínima (CIM), meio de triagem com 4% de NaCl e 6 µg/mL de oxacilina. Na investigação de 24 isolados obtidos de sangue, o genótipo mecA foi detectado em apenas 16 (66,7%) dos isolados pelo multiplex PCR. A CIM apresentou valores variando de 0,19 a 512 µg/mL entre os isolados de MRSA. Os dados obtidos pelos testes de triagem e diluição em ágar apresentaram sensibilidades de 80,0% e 72,8% respectivamente, quando comparados com a presença do gene mecA (multiplex). Todos os isolados, incluindo os negativos, quando reavaliados com a técnica de PCR exclusivo para este gene, o resultado foi positivo. A produção de beta-lactamase foi positiva em 20/25 (80,0%) dos isolados. Cerca de » dos pacientes evoluiu para óbito apesar da maioria (83,3%) ter sido tratada adequadamente. A identificação simultânea da bactéria e sua susceptibilidade aos antibióticos é necessária para a escolha de uma terapia adequada para casos de sepse estafilocócica, mas é importante considerar a sensibilidade, especificidade e validação dos kits disponíveis.