Investigando a fragmentação não induzida e a susceptibilidade à fragmentação do DNA espermático: refinamento da avaliação espermática. Parte 2 / Investigating not induced fragmentation and susceptibility of sperm DNA: refinement of sperm evaluation. Second part

A integridade do DNA espermático está intimamente relacionada com a fertilidade. Técnicas queavaliam o DNA espermático possuem grande importância e potencial de serem aplicadas nas rotinas dasavaliações andrológicas. No entanto, são necessários maiores conhecimentos sobre as técnicas e seus princípiospara permitir que sejam empregadas apropriadamente de acordo com os objetivos e resultados esperados. Dessaforma, assim como abordado na Parte 1, nesta Parte 2 serão abordadas técnicas de avaliação do DNAespermático: TUNEL, laranja de acridina e Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA). A técnica de TUNELfundamenta-se na adição de nucleotídeos modificados marcados com fluorescência às fitas fragmentadas. Atécnica avalia, portanto, diretamente a fragmentação de DNA da amostra. A sonda laranja de acridina é capaz dediferenciar, por meio de diferentes colorações, o DNA fragmentado do não fragmentado. Já a técnica de SCSAbaseia-se na imposição de um desafio ao espermatozoide; esta técnica avalia a susceptibilidade dosespermatozoides à fragmentação de DNA, sendo, portanto, uma avaliação indireta. A presente revisão permiteexpor a opinião dos autores sobre as diferentes técnicas e suas aplicações, mostrando o potencial emprego delasnos exames de rotina e nas pesquisas.(AU)

Sperm DNA integrity is directly related to male fertility. Techniques to assess sperm DNA are importantand have potential to be applied in routine evaluation of semen. However, the techniques and principles need tobe further studied to apply they correctly and to get relevant results. Thus, as discussed in Part 1, Part 2 willaddress evaluation techniques of sperm DNA: TUNEL, acridine orange and Sperm Chromatin Structure Assay(SCSA). TUNEL is based on addition of modified nucleotides labeled with fluorescence to fragmented tapesevaluating, therefore, directly, the DNA fragmentation of the sample. Acridine orange differentiates fragmentedDNA by different colors. On the other hand, SCSA are based on the imposition of a challenge to sperm. Thus,this technique assesses the susceptibility of sperm DNA fragmentation constituting indirect assessment. Thereview allows showing opinion of the authors about different techniques and their applications. Therefore,potential use of these techniques in routine exams and researches are addressed.(AU)

Investigando a fragmentação não induzida e a susceptibilidade à fragmentação do DNA espermático: refinamento da avaliação espermática. Parte 2 / Investigating not induced fragmentation and susceptibility of sperm DNA: refinement of sperm evaluation. Second part

A integridade do DNA espermático está intimamente relacionada com a fertilidade. Técnicas queavaliam o DNA espermático possuem grande importância e potencial de serem aplicadas nas rotinas dasavaliações andrológicas. No entanto, são necessários maiores conhecimentos sobre as técnicas e seus princípiospara permitir que sejam empregadas apropriadamente de acordo com os objetivos e resultados esperados. Dessaforma, assim como abordado na Parte 1, nesta Parte 2 serão abordadas técnicas de avaliação do DNAespermático: TUNEL, laranja de acridina e Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA). A técnica de TUNELfundamenta-se na adição de nucleotídeos modificados marcados com fluorescência às fitas fragmentadas. Atécnica avalia, portanto, diretamente a fragmentação de DNA da amostra. A sonda laranja de acridina é capaz dediferenciar, por meio de diferentes colorações, o DNA fragmentado do não fragmentado. Já a técnica de SCSAbaseia-se na imposição de um desafio ao espermatozoide; esta técnica avalia a susceptibilidade dosespermatozoides à fragmentação de DNA, sendo, portanto, uma avaliação indireta. A presente revisão permiteexpor a opinião dos autores sobre as diferentes técnicas e suas aplicações, mostrando o potencial emprego delasnos exames de rotina e nas pesquisas.

Sperm DNA integrity is directly related to male fertility. Techniques to assess sperm DNA are importantand have potential to be applied in routine evaluation of semen. However, the techniques and principles need tobe further studied to apply they correctly and to get relevant results. Thus, as discussed in Part 1, Part 2 willaddress evaluation techniques of sperm DNA: TUNEL, acridine orange and Sperm Chromatin Structure Assay(SCSA). TUNEL is based on addition of modified nucleotides labeled with fluorescence to fragmented tapesevaluating, therefore, directly, the DNA fragmentation of the sample. Acridine orange differentiates fragmentedDNA by different colors. On the other hand, SCSA are based on the imposition of a challenge to sperm. Thus,this technique assesses the susceptibility of sperm DNA fragmentation constituting indirect assessment. Thereview allows showing opinion of the authors about different techniques and their applications. Therefore,potential use of these techniques in routine exams and researches are addressed.

Investigando a compactação e a fragmentação não induzida do DNA espermático: refinamento da avaliação espermática parte 1 / Investigating condensation and not induced fragmentation of sperm DNA: Refinement of sperm evaluation first part

O DNA espermático possui papel essencial na reprodução, visto que danos no material genético podemprejudicar os processos de fecundação e desenvolvimento embrionário. Ademais, há evidências de que danos aoDNA podem ser causados por alterações epigenéticas. Entretanto, embora ainda não seja aplicada nas avaliaçõesandrológicas de rotina, faz-se essencial a avaliação do status de integridade do DNA espermático. Existemdiversas técnicas de avaliação com diferentes princípios e objetivos. A aplicação destas irá depender dosequipamentos disponíveis, do treinamento da equipe e das respostas a serem obtidas. Ainda, para a interpretaçãodos resultados obtidos, é necessário o conhecimento do princípio de análise de cada técnica. Assim, a presenterevisão, dividida em duas partes, tem por objetivo abordar diferentes técnicas de avaliação. As técnicasabordadas na parte 1 estão relacionadas às avaliações de compactação da cromatina (azul de toluidina, azul deanilina e cromomicina A3) e à avaliação direta da fragmentação de DNA (ensaio Cometa e teste de dispersão dacromatina modificado). Na parte 2, serão abordadas as técnicas de TUNEL, laranja de acridina e “SpermChromatin Structure Assay” (SCSA). Nesta revisão, serão abordados os princípios dos testes e a interpretaçãodos resultados baseados na literatura e nas pesquisas do grupo.(AU)

Sperm DNA has an important role on reproduction. Injuries in genetic material can impair thefertilization processes and embryonic development. Furthermore, there is evidence that DNA damage can becaused by epigenetic alterations. Although DNA evaluation in sperm analysis routine assessments is essential, itis not yet performed. There are numerous techniques of DNA evaluation with different principles and objectives.Application of these techniques will depend on the equipment available, the staff training and answers to berequired. To interpret the results, however, knowledge of each analysis technique is required. Therefore, thisreview, divided in two parts, aims to consider different techniques. The techniques that will be consideredthroughout the first part of review are: toluidine blue, aniline blue, A3 chromomycyn, Comet assay anddispersion test of modified chromatin. In the second part, it will be approached TUNEL, acridine orange andSperm Chromatin Structure Assay (SCSA) techniques. We will discuss the testes and the main results based onliterature and researches of our group.(AU)

Investigando a compactação e a fragmentação não induzida do DNA espermático: refinamento da avaliação espermática – parte 1 / Investigating condensation and not induced fragmentation of sperm DNA: Refinement of sperm evaluation – first part

O DNA espermático possui papel essencial na reprodução, visto que danos no material genético podemprejudicar os processos de fecundação e desenvolvimento embrionário. Ademais, há evidências de que danos aoDNA podem ser causados por alterações epigenéticas. Entretanto, embora ainda não seja aplicada nas avaliaçõesandrológicas de rotina, faz-se essencial a avaliação do status de integridade do DNA espermático. Existemdiversas técnicas de avaliação com diferentes princípios e objetivos. A aplicação destas irá depender dosequipamentos disponíveis, do treinamento da equipe e das respostas a serem obtidas. Ainda, para a interpretaçãodos resultados obtidos, é necessário o conhecimento do princípio de análise de cada técnica. Assim, a presenterevisão, dividida em duas partes, tem por objetivo abordar diferentes técnicas de avaliação. As técnicasabordadas na parte 1 estão relacionadas às avaliações de compactação da cromatina (azul de toluidina, azul deanilina e cromomicina A3) e à avaliação direta da fragmentação de DNA (ensaio Cometa e teste de dispersão dacromatina modificado). Na parte 2, serão abordadas as técnicas de TUNEL, laranja de acridina e “SpermChromatin Structure Assay” (SCSA). Nesta revisão, serão abordados os princípios dos testes e a interpretaçãodos resultados baseados na literatura e nas pesquisas do grupo.

Sperm DNA has an important role on reproduction. Injuries in genetic material can impair thefertilization processes and embryonic development. Furthermore, there is evidence that DNA damage can becaused by epigenetic alterations. Although DNA evaluation in sperm analysis routine assessments is essential, itis not yet performed. There are numerous techniques of DNA evaluation with different principles and objectives.Application of these techniques will depend on the equipment available, the staff training and answers to berequired. To interpret the results, however, knowledge of each analysis technique is required. Therefore, thisreview, divided in two parts, aims to consider different techniques. The techniques that will be consideredthroughout the first part of review are: toluidine blue, aniline blue, A3 chromomycyn, Comet assay anddispersion test of modified chromatin. In the second part, it will be approached TUNEL, acridine orange andSperm Chromatin Structure Assay (SCSA) techniques. We will discuss the testes and the main results based onliterature and researches of our group.