Detección de anticuerpos y antígenos para el diagnóstico de Fasciola hepatica en alpacas naturalmente infectadas / Detection of antibodies and antigens for diagnosis of Fasciola hepatica in naturally infected alpacas

El propósito de este trabajo fue estandarizar la prueba de ELISA indirecta para la detec ción de anticuerpos y evaluar una prueba inmunoenzimática de detección de coproantígenos (ES-78 sandwich ELISA) para el diagnóstico de Fasciola hepatica en alpacas. En la prueba de ELISA indirecta se emplearon los productos de excreción y secreción (ES) como antígenos y se obtuvo un inmunoconjugado de peroxidasa anti-IgG de alpacas por cromatografía de afinidad a proteína A. La prueba de ensayo inmunoenzimática de detección fue evaluada mediante el kit de diagnóstico FASCIDIG, el cual detecta antígenos metabólicos usando el anticuerpo monoclonal AcM-ES78 de la subclase IgG 2a. En el ELISA Indirecto se obtuvieron valores de densidad óptica (DO) entre 0.075 a 1.435 donde el punto de corte fue de 0.226. Los animales del grupo control positivo fueron positivos a la prueba con valores entre 0.331 y 1.435. Los animales del grupo control negativo resultaron negativos a la prueba con valores de 0.075 a 0.226. En el ELISA para coproantígenos se obtuvieron valores de DO entre 0.060 y 1.532, donde el punto de corte fue de 0.240. Los animales del grupo control positivo resultaron positivos con valores de DO de 0.244 a 1.532 y los animales del grupo control negativo resultaron negativos a la prueba con valores entre 0.060 a 0.240. Los valores de sensibilidad, especificidad y valores predictivos positivo y negativo fueron del 100 por ciento para las dos pruebas de ELISA. Ambas pruebas pueden sustituir al examen coproparasitológico, tanto en el diagnóstico individual, como en rebaños con infección por F. hepatica. El ELISA indirecto demostró ser un método sensible y útil para el diagnóstico de fasciolosis pasiva en alpacas. El ELISA para la detección de coproantígenos es un método simple, rápido y eficaz en la detección de infección activa por F. hepatica.

The aim of this study was to standardize the indirect ELISA test for the detection of antibodies and to evaluate a coproantigen detection test (ES-78 sandwich ELISA) for the Fasciola hepatica diagnoses in alpacas. For the indirect ELISA, the excretion–secretion products (ES) were used as antigens and a peroxidasa anti IgG immunoconjugate of alpaca was obtained through protein A affinity cromatography. The detection ELISA was tested with the FASCIDIG diagnostic kit, which detects metabolics antigens using an AcM-ES78 monoclonal antibody of the IgG 2a sub class. Optical Density (OD) values between 0.075 and 1.435 were obtained using the indirect ELISA, where the cut-off point was 0.226. The positive control group animals were positive to the test with values between 0.331 and 1.435. The negative control group animals were negative to the test with values between 0.075 and 0.226. OD values between 0.060 and 1.532 were obtained using the coproantigen detection ELISA, where the cut-off point was 0.240. The positive control group animals were positive to the test with OD values between 0.244 and 1.532 and the negative control group animals were negative to the test with values between 0.060 and 0.240. The sensitivity, specificity and positive and negative predictive values were 100 per cent for both ELISA tests. Both test can replace the coproparasitologic test. They are suitable for individual diagnosis and for herd diagnosis infections with F. hepatica. The indirect ELISA has demonstrated to be a useful and sensitive tool for the pasive fasciolosis diagnosis in alpacas. The coproantigen detection ELISA is a simple, fast and efficient method in the detection of active F. hepatica infection.

Infección experimental de primates no humanos (Saimiri boliviensis) y voluntarios humanos con micro y macro quistes de sarcocystis de alpacas

Non-human primates (Saimiri boliviensis) and human volunteers were experimentally infected with micro and macrocystis to evaluate the pathogenic characteristics and their role as definitive hosts. Nine monkeys were equally distributed in 3 groups. Group A was inoculated three times (days 1, 3 and 6) with 20g/day of cardic muscle massively infected with mycrocysts of S. lamacanis; Group B was inoculated in a similar manner with 20 macrocysts of S. aucheniae per data that were collected from skeletal muscle; and Group C was kept as control. Simultaneously, 12 persons were equally divided in 4 groups. Group 1 was fed three times (days 1, 3 and 6) with 50g/day of cardic muscle massively infected with microcysts of S. lamacanis; group 2 was inoculated in a similar manner with 50 macrocysts of S. aucheniae per day that were collected from skeletal muscle (in both cases, the meat was slightly cooked in a pan without oil); Group 3 was inoculated in a similar manner with 50g/day of cardic muscle massively infected with microcysts of S. lamacanis and 50 macrocysts of S. aucheniae that were cooked at 100°C x 20 min; and Group 4 was kept as control. Both animals and persons were under a controlled diet to avoid infections due to other Sarcocystis species. Fecal analysis by the flotation method using saturated saline solution were done in samples collected at every other day basis 30 days before and after infection. The results showed that human primates and human beings are not definitive hosts of S. lamacanis and S. aucheniae. Fecal analyses were negative to oocysts and sporocysts of Sarcocystis. However, the intake of macrocysts and raw or badly cooked cardic muscle infected with microcysts caused gastro-enteric disorders such as diarrhea, abdominal colic and nausea, probably linked to an enzyme in the cysts, and for this a previous sensitization would be required.

Se infectó experimentalmente a primates no humanos (Saimiri boliviensis y personas voluntarias con micro y macro quistes de sarcocystis de alpacas, a fin de investigar su patogenicidad y su rol como hospedero definitivos. Nuevo monos fueron distribuidos en 3 grupos de 3 animales cada uno. El grupo A fue inoculado en tres oportunidades (días 1, 3 y 6) con 20 g/día de músculo cardiaco crudo masivamente infectado por microquistes de S. lamacanis; el Grupo B fue inoculado en forma similar con 20 quistes macroscópicos por día de DS. Aucheniae, recolectado de la musculatura esquelética; y el Grupo C fue el control (no infectado). Paralelamente, 12 personas voluntarias se dividieron en 4 grupos de 3 personas cada uno. El Grupo 1 fue inoculado en tres oportunidades microscópicos de S. lamacanis; el Grupo 2 fue inoculado en forma similar con 50 macroquistes frescos por día de S. aucheniae, recolectado de la musculatura esquelética (en ambos casos el músculo fue sometido a una ligera cocción en una sartén a fuego lento sin aceite); el grupo 3 fue inoculado en forma similar con 50 g de músculo cardíaco masivamente infectado con microquistes de S. lamacanis y 50 microquistes de S. aecheniae, sometidos previamente a cocción a 100° x 20 minutos; y el Grupo 4 fue el control (no infectado). Los grupos de primates y de los voluntarios fueron sometidos a regímenes alimenticios especiales a fin de evitar la infección por otras especies de Sarcocystis. Se realizaron exámenes coprológicos por el método de flotación con solución saturada de sal en forma intermediaria en los 30 días pre y post infección. Los resultados obtenidos descartan a primates no humanos y humanos como hospederos definitivos de S. lamacanis y S. auchenie de alpacas, ya que los exámenes coprológicos en ambos grupos fueron negativos a la presencia de ooquistes u esporoquistes de Sarcocystis. Sin embargo, el consumo de macroquistes o músculo cardíaco infectado en humanos...