RESUMO
Acinetobacter baumannii e Klebsiella pneumoniae são patógenos prioritários globais resistentes a antibióticos, portanto, é relevante encontrar métodos alternativos para controlá-los, e os fitoterápicos têm sido investigados para essa finalidade. Em vista disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana e antibiofilme do extrato glicólico de Hamamelis virginiana (hamamélis) e do extrato hidroalcóolico de Punica granatum (romã) isolados e em combinação sobre cepas ATCC e clínicas de A. baumannii e K. pneumoniae. Primeiramente, foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo teste de microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), após, o potencial antimicrobiano da combinação entre esses extratos foi analisado sobre esses micro-organismos por meio da técnica "checkerboard". Posteriormente, a redução da atividade metabólica dos biofilmes foi avaliada pelo teste de MTT (contato de 5 min e 24h), para tanto a CMM e as duas concentrações acima dela foram utilizadas. A concentração correspondente a 2X a CMM dos extratos combinados foi utilizada no teste de MTT para o tratamento dos biofilmes no tempo de 5 min e 24h. Os extratos isolados e combinados apresentaram ação microbicida contra A. baumannii e K. pneumoniae na forma planctônica. O extrato de romã apresentou CMM de 1,71 a 3,43 mg/mL para A. baumannii e de 3,43 a 13,75 mg/mL para K. pneumoniae, enquanto que Hamamélis exibiu CMM de 12,5 a 25 mg/mL para A. baumannii e de 25 a 50 mg/mL para K. pneumoniae. O uso combinado dos extratos resultou em treze concentrações aditivas para A. baumannii e quinze para K. pneumoniae. A redução de viabilidade em biofilmes de A. baumannii chegou a 64,94% para o extrato de romã, e 83,45% para o extrato de Hamamélis. K. pneumoniae apresentou redução máxima de 75,66% com extrato de Romã e de 76,56% com o extrato de Hamamelis. A redução do biofilme variou conforme a concentração e cepa quando tratado com a combinação dos extratos. Com isso, pode-se concluir que os extratos apresentam importante ação antibacteriana e antibiofilme sobre os patógenos avaliados, podendo ser considerados potenciais agentes terapêuticos para o combate destes patógenos.
Pomegranate and witch hazel extracts: is there antimicrobial action on clinical strains of multiresistant Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae? [dissertation]. São José dos Campos (SP): São Paulo State University (Unesp), Institute of Science and Technology; 2021. ABSTRACT Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae are global priority antibiotic resistant pathogens, therefore, it is relevant to find alternative methods to control them, and herbal medicines have been investigated for this purpose. In view of this, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antibiofilm activity of the glycolic extract of Hamamelis virginiana (witch hazel) and the hydroalcoholic extract of Punica granatum (pomegranate) isolated and in combination on ATCC and clinical strains of A. baumannii and K. pneumoniae. First, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Microbicide Concentration (MMC) were determined by the broth microdilution test, according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), after which the antimicrobial potential of the combination of these extracts was analyzed on these microorganisms through the "checkerboard" technique. Subsequently, the reduction of the metabolic activity of biofilms was evaluated by the MTT test (5 min and 24h contact), for both the CMM and the two concentrations above it were used. The concentration corresponding to 2X the CMM of the combined extracts was used in the MTT test for the treatment of biofilms in a time of 5 min and 24h. The isolated and combined extracts showed microbicidal action against A. baumannii and K. pneumoniae in the planktonic form. The pomegranate extract showed MMC from 1.71 to 3.43 mg/mL for A. baumannii and from 3.43 to 13.75 mg/mL for K. pneumoniae, while Witch Hazel exhibited MMC from 12.5 to 25 mg µg/ml for A. baumannii and from 25 to 50 mg/ml for K. pneumoniae. The combined use of the extracts resulted in thirteen additive concentrations for A. baumannii and fifteen for K. pneumoniae. The viability reduction in A. baumannii biofilms reached 64.94% for the pomegranate extract, and 83.45% for the Witch Hazel extract. K. pneumoniae showed a maximum reduction of 75.66% with Pomegranate extract and 76.56% with Hamamelis extract. Biofilm reduction varied according to concentration and strain when treated with the combination of extracts. Thus, it can be concluded that the extracts have an important antibacterial and antibiofilm action on the evaluated pathogens, and can be considered potential therapeutic agents to combat these pathogens.
