Immunogenetic analysis of variable regions encoding AB1 and gamma-type AB2 antibodies from the NeuGc-containing ganglioside family.

The variable regions from P3, a murine monoclonal antibody (MAb) against NeuGc-containing gangliosides, and two anti-idiotype MAbs directed to P3 MAb were cloned and sequenced. Comparisons with previously reported sequences showed that P3 is a germline antibody encoded by genes from the V(H)Q52 and V(kappa)19 families. Analysis of nucleotides at the heavy chain CDR3 (H-CDR3) showed the presence of an extensive 3' N region that contains almost 50% of the nucleotides of this CDR. In addition, amino acid sequence analysis of the H-CDRs of this MAb revealed the presence of three arginines, two of which are present in the H-CDR3, that could be involved in the interaction of P3 MAb with its electronegative epitope on gangliosides. Anti-idiotype 1E10, which seems to define a "regulatory" idiotope on P3 MAb (it induces Id+ Ab3), represents a germline Ab2 that belongs to the V(H)J558 and V(kappa)10 gene families. By contrary, the anti-idiotype 3B11 is an extensively mutated antibody that belongs to the V(H)3660 and V(kappa)4/5 gene families, defining a "private" idiotope on P3 MAb. Even when different V genes contribute to the variable regions of 1E10 and 3B11 MAbs, they share an acidic motif E/D-D-Y/D-Y-D in H-CDR3, suggesting that both Ab2s recognize paratope positive residues on the Ab1. Therefore, complementary electrostatic interactions involving H-CDR3 from both Ab1 and Ab2, might provide a clue to understand the molecular basis for the generation of gamma-type anti-idiotype antibodies to V regions recognizing glycolylated ganglioside antigens.

Removal of amphipathic epitopes from genetically engineered antibodies: production of modified immunoglobulins with reduced immunogenicity.

Several approaches have been developed to reduce the human immune response to nonhuman antibodies. However, chimeric antibodies and humanized antibodies often have decreased binding affinity. We described a new approach for reducing the immunogenicity of chimeric antibodies while maintaining the affinity. This approach seeks to prevent the recognition of murine immunogenic peptides from the antibody variable region by human lymphocytes. Putative immunogenic epitopes in the variable region are identified and subjected to site directed mutagenesis to make them human and/or to break the amphipathic motifs. The R3 antibody, which blocks the epidermal growth factor (EGF) receptor, was used as a model system to test this approach. Four segments containing possible amphipathic epitopes were found in the heavy variable domain using the program AMPHI. Six amino acids within two of these segments were substituted by the corresponding residues from a homologous human sequence. No mutations were made in the murine light variable domain. Experiments in monkeys suggested that the "detope" R3 antibody was less immunogenic than its chimeric analogue. A search for possible amphipathic epitopes in the Kabat database revealed the presence of conserved patterns in the different families of variable region sequences, suggesting that the proposed method may be of general applicability.

Humanization of a mouse monoclonal antibody that blocks the epidermal growth factor receptor: recovery of antagonistic activity.

BACKGROUND: Antibody humanization by transplanting the complementarity determining regions (CDRs) of a murine antibody to a human framework aims to reduce the response of the human immune system against a foreign molecule. Frequently, however, some murine amino acids from the framework have to be retained to recover binding affinity. OBJECTIVES: To redesign R3, a mouse monoclonal antibody (mAb) that binds the human epidermal growth factor (EGF)-receptor and inhibits the binding of EGF, to be a human IgG1. STUDY DESIGN: The light and heavy chains of REI and Eu, respectively, were selected as human immunoglobulin (Ig) frameworks for CDR-grafting based on their high homology with the corresponding sequences of murine R3. Molecular modeling was used to analyze the possible effects of mutating murine residues that underlie the CDRs. RESULTS: CDR-grafting dramatically reduced the binding capability of the antibody. Molecular modeling suggested that two amino acids (Thr 76 and Thr 93), among five immunoglobulin heavy chain variable region (VH) residues underlying the CDRs, were critical for antigen binding. The five residues were mutated back to the original murine amino acids in different combinations contained in six variants of humanized antibodies. In agreement with molecular modeling analysis. The variant in which three murine residues were retained (Ser 75, Thr 76 and Thr 93) exhibited a similar capacity to inhibit the binding of 125I-labeled EGF to its receptor as compared with the original antibody. This humanized antibody was at least 2-fold less immunogenic in African Green monkeys than the chimeric antibody. CONCLUSIONS: Only very few mutations in the frameworks may be necessary to recover the binding capability of a humanized antibody. Molecular modeling can serve as a powerful tool to identify residues critical for binding.

An Escherichia coli protein consisting of a domain homologous to FK506-binding proteins (FKBP) and a new metal binding motif.

Initially detected as a persistent contaminant in immobilized metal affinity chromatography of recombinant proteins in Escherichia coli, a 196-amino acid protein was isolated, cloned, overexpressed, and characterized. It consists of two domains, of which the first (146 amino acids) shows some homology to the FK506-binding proteins. The second domain (50 amino acids) is extremely rich in potentially metal-binding amino acids, such as histidine, cysteine, and acidic amino acids. The protein binds Ni2+ and Zn2+ tightly with 1:1 stoichiometry, Cu2+ and Co2+ with lower affinity, and Mn2+, Fe2+, Fe3+, Mg2+, and Ca2+ hardly at all.

Synergistic inhibitory effect of gamma-interferon and EGF on A431 cells.

Addition of high concentrations (100ng/ml) of epidermal growth factor (EGF) to cultures of the epidermoid-carcinoma cell-line A431, which expresses high levels of the EGF receptor, resulted in 50 percent reduction in growth rate. At a lower level (10 ng/ml) of EGF no such inhibitory effect was observed. Addition of gamma-interferon at a concentration of 100 u/ml, but not alpha-interferon at the same concentration. inhibited the growth rate of A431 cells by 50 percent. Incubation of the cells in medium containing both 10 ng/ml of EGF and 1000 u/ml of gamma-interferon led to a complete growth arrest. After 48 hours this inhibition was not reversible and resulted in excessive cell-death after approximately seven days. The human lung cancer cell-line U-1752, which expresses low levels of the EGF receptor, was not inhibited by EGF even at high concentrations. Gamma-interferon did not increase the sensitivity of these cells to EGF. The results show that the modulating effect of gamma-interferon on EGF activity is variable and probably depends on cell line, receptor concentration as well as the primary effect of EGF on different cells.

El factor de crecimiento epidérmico inhibe el crecimiento de carcinomas epidermoides humanos en ratones atímicos / Epidermal growth factor inhibits the growth of human epidermoid carcinomas in athymic mice

El factor de crecimiento epidérmico (EGF), polipéptido mitogénico para células de origen epitelial y mesenquimatoso tiene, sin embargo, un efecto inhibidor de la proliferación in vitro de las células de muy alto contenido de receptores. Los resultados previos de nuestro laboratorio habían demostrado que el EGF podía inhibir in vivo la incorporación de timidina en células del tumor ascítico de Ehrlich. En este artículo presentamos una evaluación directa del efecto del EGF (humano, recombinante) en el crecimiento de tumores trasplantables de ratón y de xenotrasplantes de tumores humanos en ratones atímicos. Los tumores de Ehrlich (carcinoma mamario), RL-67 (carcinoma de pulmón) y CETA (carcinoma epidermoide de labio), fueron los tumores con mayor contenido de receptores de EGF dentro de nuestro banco de tumores trasplantables. En estos modelos, no obstante, el EGF (20 mg/kg/día, subcutáneo, 10 días) no mostró efecto inhibidor del crecimiento tumoral. Sin embargo, en los tumores humanos obtenidos por xenotrasplantes en ratones atímicos de células de carcinoma de vulva (A431) y fragmentos de carcinoma epidermoide de pulmón (CPH3), la administración de EGF produjo una inhibición del crecimiento tumoral. Este efecto fue reversible cuando se interrumpió el tratamiento. Estos resultados indican la posibilidad de regular in vivo el crecimiento de tumores con receptores de EGF, mediante la administración de este factor en dosis muy superiores a las concentraciones fisiológicas, lo cual constituye potencialmente una nueva modalidad de hormonoterapia

El factor de crecimiento epidérmico inhibe el crecimiento de carcinomas epidermoides humanos en ratones atímicos / Epidermal growth factor inhibits the growth of human epidermoid carcinomas in athymic mice

El factor de crecimiento epidérmico (EGF), polipéptido mitogénico para células de origen epitelial y mesenquimatoso tiene, sin embargo, un efecto inhibidor de la proliferación in vitro de las células de muy alto contenido de receptores. Los resultados previos de nuestro laboratorio habían demostrado que el EGF podía inhibir in vivo la incorporación de timidina en células del tumor ascítico de Ehrlich. En este artículo presentamos una evaluación directa del efecto del EGF (humano, recombinante) en el crecimiento de tumores trasplantables de ratón y de xenotrasplantes de tumores humanos en ratones atímicos. Los tumores de Ehrlich (carcinoma mamario), RL-67 (carcinoma de pulmón) y CETA (carcinoma epidermoide de labio), fueron los tumores con mayor contenido de receptores de EGF dentro de nuestro banco de tumores trasplantables. En estos modelos, no obstante, el EGF (20 mg/kg/día, subcutáneo, 10 días) no mostró efecto inhibidor del crecimiento tumoral. Sin embargo, en los tumores humanos obtenidos por xenotrasplantes en ratones atímicos de células de carcinoma de vulva (A431) y fragmentos de carcinoma epidermoide de pulmón (CPH3), la administración de EGF produjo una inhibición del crecimiento tumoral. Este efecto fue reversible cuando se interrumpió el tratamiento. Estos resultados indican la posibilidad de regular in vivo el crecimiento de tumores con receptores de EGF, mediante la administración de este factor en dosis muy superiores a las concentraciones fisiológicas, lo cual constituye potencialmente una nueva modalidad de hormonoterapia

Acción radioprotectora local del factor de crecimiento epidérmico humano recombinante: reporte preliminar / Local radioprotective action of recombinant human epidermal growth factor: preliminary report

La radioterapia es una de las modalidades terapéuticas más empleadas en las neoplasias malignas. Una de las complicaciones más frecuentes es la radiodermitis, que obliga frecuentemente a interrumpir el tratamiento. En este trabajo presentamos una evaluación del efecto del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en la prevención de la radiodermitis. Se incluyeron 59 pacientes con diagnóstico histològico de carcinoma de piel, los cuales recibieron 2 Gy diarios de roentgenterapia superficial (80 kV) hasta completar 60 Gy. Los pacientes fueron asignados, al azar, a tres grupos: el primer grupo recibió aplicación tópica del EGF (10 *g/g en crema de sulfadiazina de plata al 1

) en el área irradiada, dos veces al día durante todo el tiempo de tratamiento; el segundo recibió aplicaciones de la crema de sulfadiazina de plata sin EGF y el tercer grupo no recibió tratamiento local. El porcentaje de aparición de radiodermitis fue de 4

, 41

y 64

en los tres grupos, respectivamente. La diferencia en la frecuencia de aparición de radiodermitis entre el grupo tratado con EGF y los restantes fue estadísticamente significativa (p<0,001). Otro grupo de pacientes -en este caso cinco niños que recibieron radioterapia sobre ojo y órbita-, fue tratado con colirio de kanamicina que contenía, además, EGF humano recombinante (10 *g/ml), aplicando 2 gotas cada 4-6 horas durante todo el período de tratamiento. Solamente uno de estos pacientes presentó conjuntivitis radiógena ligera, a una dosis acumulada de radiaciones de 50 Gy, lo cual se compara favorablemente con la experiencia histórica en que la mayoría de estos pacientes padecen conjuntivitis radiógena. Estos resultados constituyen la primera evidencia clínica de efecto radioprotector del EGF humano recombinante, en la piel y en el epitelio ocular, lo cual tiene importancia práctica en el tratamiento radiante de los tumores malignos

Efecto del factor de crecimiento epidérmico humano recombinante sobre úlceras cutáneas: reporte preliminar / Effects of recombinant human epidermal growth factor on cutaneous ulcers: preliminary report

Las úlceras cutáneas producidas por las radiaciones ionizantes o por extravasación de citostáticos, son una complicación frecuente en el tratamiento de los pacientes con neoplasias malignas. Estas lesiones son frecuentemente difíciles de tratar e introducen morbilidad adicional y deterioro de la calidad de vida. En este trabajo presentamos las primeras evidencias clínicas del efecto cicatrizante del factor de crecimiento epidérmico en úlceras cutáneas. Se trataron ocho pacientes(dos con úlceras radiógenas, cinco con úlceras por extravasación de citostáticos y uno con úlcera varicosa) mediante aplicación tópica dos veces al día, de una crema de factor de crecimiento epidérmico (EGF, 10*g/g en crema de sulfadiazina de plata al 1

). Los dos pacientes con úlcera radiógena de larga evolución cicatrizaron 100

y 70

respectivamente. Igualmente, tres pacientes con úlceras por extravasación de epiadriamicina y mostaza nitrogenada tuvieron una respuesta parcial. En otros dos pacientes se pudo detectar precozmente la ulceración por extravasación de vincristina y en estos se logró una re-epitelización completa. La paciente tratada de úlcera varicosa crónica también logró una cicatrización completa en tres meses de tratamiento. Estos resultados constituyen el primer reporte de tratamiento de las úlceras cutáneas en pacientes oncológicos, empleando el factor de crecimiento epidérmico. Esta nueva modalidad puede tener importancia práctica en el tratamiento de tales complicaciones

Efecto del factor de crecimiento epidérmico humano recombinante sobre úlceras cutáneas: reporte preliminar / Effects of recombinant human epidermal growth factor on cutaneous ulcers: preliminary report

Las úlceras cutáneas producidas por las radiaciones ionizantes o por extravasación de citostáticos, son una complicación frecuente en el tratamiento de los pacientes con neoplasias malignas. Estas lesiones son frecuentemente difíciles de tratar e introducen morbilidad adicional y deterioro de la calidad de vida. En este trabajo presentamos las primeras evidencias clínicas del efecto cicatrizante del factor de crecimiento epidérmico en úlceras cutáneas. Se trataron ocho pacientes(dos con úlceras radiógenas, cinco con úlceras por extravasación de citostáticos y uno con úlcera varicosa) mediante aplicación tópica dos veces al día, de una crema de factor de crecimiento epidérmico (EGF, 10*g/g en crema de sulfadiazina de plata al 1 %). Los dos pacientes con úlcera radiógena de larga evolución cicatrizaron 100 % y 70 % respectivamente. Igualmente, tres pacientes con úlceras por extravasación de epiadriamicina y mostaza nitrogenada tuvieron una respuesta parcial. En otros dos pacientes se pudo detectar precozmente la ulceración por extravasación de vincristina y en estos se logró una re-epitelización completa. La paciente tratada de úlcera varicosa crónica también logró una cicatrización completa en tres meses de tratamiento. Estos resultados constituyen el primer reporte de tratamiento de las úlceras cutáneas en pacientes oncológicos, empleando el factor de crecimiento epidérmico. Esta nueva modalidad puede tener importancia práctica en el tratamiento de tales complicaciones

Acción radioprotectora local del factor de crecimiento epidérmico humano recombinante: reporte preliminar / Local radioprotective action of recombinant human epidermal growth factor: preliminary report

La radioterapia es una de las modalidades terapéuticas más empleadas en las neoplasias malignas. Una de las complicaciones más frecuentes es la radiodermitis, que obliga frecuentemente a interrumpir el tratamiento. En este trabajo presentamos una evaluación del efecto del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en la prevención de la radiodermitis. Se incluyeron 59 pacientes con diagnóstico histològico de carcinoma de piel, los cuales recibieron 2 Gy diarios de roentgenterapia superficial (80 kV) hasta completar 60 Gy. Los pacientes fueron asignados, al azar, a tres grupos: el primer grupo recibió aplicación tópica del EGF (10 *g/g en crema de sulfadiazina de plata al 1 %) en el área irradiada, dos veces al día durante todo el tiempo de tratamiento; el segundo recibió aplicaciones de la crema de sulfadiazina de plata sin EGF y el tercer grupo no recibió tratamiento local. El porcentaje de aparición de radiodermitis fue de 4 %, 41 % y 64 % en los tres grupos, respectivamente. La diferencia en la frecuencia de aparición de radiodermitis entre el grupo tratado con EGF y los restantes fue estadísticamente significativa (p<0,001). Otro grupo de pacientes -en este caso cinco niños que recibieron radioterapia sobre ojo y órbita-, fue tratado con colirio de kanamicina que contenía, además, EGF humano recombinante (10 *g/ml), aplicando 2 gotas cada 4-6 horas durante todo el período de tratamiento. Solamente uno de estos pacientes presentó conjuntivitis radiógena ligera, a una dosis acumulada de radiaciones de 50 Gy, lo cual se compara favorablemente con la experiencia histórica en que la mayoría de estos pacientes padecen conjuntivitis radiógena. Estos resultados constituyen la primera evidencia clínica de efecto radioprotector del EGF humano recombinante, en la piel y en el epitelio ocular, lo cual tiene importancia práctica en el tratamiento radiante de los tumores malignos

Efecto antitumoral del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en carcinomas de piel humanos: reporte preliminar / Anti-tumoral effect of epidermal growth factor (EGF) in human skin carcinomas: preliminary report

El factor de crecimiento epidérmico (EGF), es un polipéptido mitogénico para células de origen epitelial y mesenquimatoso; sin embargo, tiene un efecto inhibitor de la proliferación in vitro de las células que tienen un número muy elevado de receptores de EGF en su superficie. Resultados precedentes de nuestro laboratorio demostraron que este efecto inhibidor también puede obtenerse in vivo, en tumores humanos creciendo como xenotransplantes en ratones atímicos. En este artículo presentamos las primeras evidencias clínicas del efecto del EGF en carcinomas humanos. Se trataron 10 carcinomas de piel (9 pacientes) mediante la aplicación diaria tópica de una crema que contenía 10*g/g de EGF humano recombinante. Durante las tres semanas de tratamiento no se obtuvo ninguna evidencia de progresión tumoral, al contrario, la mitad de las lesiones mostraron una respuesta objetiva favorable. Cuatro pacientes refirieron mejoría subjetiva intensa, dada por alivio del dolor y recuperación funcional de las estructuras afectadas por el tumor. En cuatro pacientes se registraron notables cambios histológicos, dados por una disminución en la proporción de células tumorales en el tejido, un aumento en la reacción estromal y la aparición de infiltrado inflamatorio. La ampliación del concepto de hormono-dependencia, para incluir la regulación de tumores por factores de crecimiento, implica como corolario la aplicación del campo de la terapia hormonal, para incluir el tratamiento con factores de crecimiento o sus análogos. Estos resultados preliminares son la primera evidencia de que estos conceptos pueden ser aplicables en la clínica.

Efecto antitumoral del factor de crecimiento epidérmico (EGF) en carcinomas de piel humanos: reporte preliminar / Anti-tumoral effect of epidermal growth factor (EGF) in human skin carcinomas: preliminary report

El factor de crecimiento epidérmico (EGF), es un polipéptido mitogénico para células de origen epitelial y mesenquimatoso; sin embargo, tiene un efecto inhibitor de la proliferación in vitro de las células que tienen un número muy elevado de receptores de EGF en su superficie. Resultados precedentes de nuestro laboratorio demostraron que este efecto inhibidor también puede obtenerse in vivo, en tumores humanos creciendo como xenotransplantes en ratones atímicos. En este artículo presentamos las primeras evidencias clínicas del efecto del EGF en carcinomas humanos. Se trataron 10 carcinomas de piel (9 pacientes) mediante la aplicación diaria tópica de una crema que contenía 10*g/g de EGF humano recombinante. Durante las tres semanas de tratamiento no se obtuvo ninguna evidencia de progresión tumoral, al contrario, la mitad de las lesiones mostraron una respuesta objetiva favorable. Cuatro pacientes refirieron mejoría subjetiva intensa, dada por alivio del dolor y recuperación funcional de las estructuras afectadas por el tumor. En cuatro pacientes se registraron notables cambios histológicos, dados por una disminución en la proporción de células tumorales en el tejido, un aumento en la reacción estromal y la aparición de infiltrado inflamatorio. La ampliación del concepto de hormono-dependencia, para incluir la regulación de tumores por factores de crecimiento, implica como corolario la aplicación del campo de la terapia hormonal, para incluir el tratamiento con factores de crecimiento o sus análogos. Estos resultados preliminares son la primera evidencia de que estos conceptos pueden ser aplicables en la clínica.

Estudios sobre el factor de crecimiento epidérmico (EGF) IV: efecto del EGF sobre la incorporación de timidina en células tumorales in vivo / Studies on EGF IV: effect of EGF on timidine incorporation in tumoral cells in vivo

La presencia de receptores para el EGF en los tumores humanos más indiferenciados y el hecho de que el EGF inhibe la proliferación de las células de carcinoma A431 in vitro, nos sugirió la posibilidad de evaluar los efectos del EGF in vivo, en animales portadores de tumores. El tumor ascítico de Ehrlich en ratones fue el modelo escogido. El EGF inyectado en región subcutánea tuvo una rápida distribución, alcanzando el peritoneo y reconociendo los receptores específicos en las células tumorales. Los valores pico se obtuvieron en una hora. La expresión de receptores para el EGF en las células disminuye, durante, al menos, cinco horas. La inyección de EGF inhibió la incorporación de timidina al material ácido-insoluble de las células tumorales. Este efecto fue dependiente de la dosis y se obtuvo tanto con EGF murino como EGF humano. Estos resultados plantean la posibilidad de extender el concepto de dependencia hormonal en los tumores al control de la proliferación por los factores de crecimiento

Estudios sobre el factor de crecimiento epidérmico (EGF) IV: efecto del EGF sobre la incorporación de timidina en células tumorales in vivo / Studies on EGF IV: effect of EGF on timidine incorporation in tumoral cells in vivo

La presencia de receptores para el EGF en los tumores humanos más indiferenciados y el hecho de que el EGF inhibe la proliferación de las células de carcinoma A431 in vitro, nos sugirió la posibilidad de evaluar los efectos del EGF in vivo, en animales portadores de tumores. El tumor ascítico de Ehrlich en ratones fue el modelo escogido. El EGF inyectado en región subcutánea tuvo una rápida distribución, alcanzando el peritoneo y reconociendo los receptores específicos en las células tumorales. Los valores pico se obtuvieron en una hora. La expresión de receptores para el EGF en las células disminuye, durante, al menos, cinco horas. La inyección de EGF inhibió la incorporación de timidina al material ácido-insoluble de las células tumorales. Este efecto fue dependiente de la dosis y se obtuvo tanto con EGF murino como EGF humano. Estos resultados plantean la posibilidad de extender el concepto de dependencia hormonal en los tumores al control de la proliferación por los factores de crecimiento

Receptors for EGF and oestradiol and thymidinekinase activity in different histological subgroups of human mammary carcinomas.

The cellular content of receptors for epidermal growth factor (EGF) was measured in different histological subgroups of human mammary carcinomas. EGF receptors were detected in 36% of the ductal and all the medullary carcinomas. In contrast lobular and pure colloid tumours did not contain measurable amounts of the receptor. The receptor was found both among tumours with an euploid and aneuploid DNA pattern. The EGF receptor is thus found in carcinomas with a varying degree of differentiation as judged by the cellular DNA pattern. There was no correlation between the proliferative activity of the tumours as measured by thymidinekinase activity and the amount of EGF receptors in the tumour. Tumours with detectable EGF receptor often had low levels of oestrogen receptor. This finding could only partly be explained by the menstrual status of the patients.

Epidermal growth factor inhibits thymidine incorporation in Ehrlich ascites tumor cells in vivo.

The effects of in vivo injection of epidermal growth factor (EGF) on mice bearing Ehrlich ascites tumors have been studied. Epidermal growth factor was rapidly distributed, reached tumor cells and recognized specific cell membrane receptors. The effects of the subcutaneous injection of EGF were manifested by a decrease of measurable membrane receptors and inhibition of thymidine incorporation to TCA-insoluble material. The effect on thymidine incorporation was dose-dependent and independent on the source (murine or human) of EGF. These results suggest that high doses of EGF could eventually be used for inhibition of the cell proliferation in some tumors.

[Isolated hypoplasia of the right ventricle. Study of 3 cases]. / Hipoplasia aislada del ventrículo derecho. Estudio de tres casos.

Right ventricular hypoplasia without additional congenital heart disease is an uncommon abnormality. It is characterized by partial absence of right ventricular inflow tract, both tricuspid and pulmonary valves being normally shaped. We report three cases; a newborn, an infant and a twelve years old boy. All of them had cyanosis and right atrial enlargement and both of the younger patients had electrocardiographic signs suggesting right ventricular hypoplasia. Right atrial mean pressure were raised. A differential diagnosis should be stablished with all sorts of right ventricular hypoplasia with cyanosis and with restrictive myocardiopathyes. Surgery for symptomatic patient should be palliative during first months of life and corrective from age one year onwards.

Early effects of medium change in cultured cells: evidences for the existence of negative modulators of cell proliferation.

Serum deprivation of cells in culture leads usually to an arrest of DNA synthesis and cell proliferation but the transfer of cultured cells from serum-containing to serum-free medium results in a transient stimulation of the incorporation of radioactive thymidine to macromolecules. This stimulation effect produced by medium change can be separated into two different phenomena: a stimulation of thymidine incorporation induced by transfer of cells from conditioned serum-containing medium to fresh serum-containing medium and an additional stimulation induced by transfer of cells from serum-containing medium to serum-free medium. Experimental results indicate that the first effect is probably due to the removal of inhibitors released by the cells even in exponentially growing cultures, and that the second effect is probably due to the removal of inhibitory molecules coexisting in serum with stimulatory factors.