Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Perfil de proteases de lesões cutâneas experimentais em camundongos tratadas com a lectina isolada das sementes de Canavalia brasiliensis

The objective of the present study was determining the proteases profile of cutaneous healings treated with free and conjugated lectin of Canavalia brasiliensis (ConBr) and their specific sugar. An aseptic wound was produced in the thoracic area of the mice (n=120), divided according to the employed treatment: NaCl Group (150mM NaCl), manose Group (100mM manose), ConBr Group (100µg mL-1 ConBr) and ConBr/manose Group (solution containing 100µg mL-1 ConBr prepared in 100mM manose). Samples of the injured area were collected for determination of proteases profile and collagenolytic activity on 2nd, 7th e 12th days after the surgery. Electrophoresis SDS-PAGE demonstrated proteins with molecular mass of 67kDa in all groups. Group IV presented the highest collagenolytic activity on the 12th day post surgery. ConBr lectin influenced proteases expression with collagenolytic activity thus being able to intervene on skin wound healing in mice.

O objetivo deste estudo foi determinar o perfil de proteases em lesões cutâneas experimentais tratadas com a lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis (ConBr) livre e conjugada com o seu açúcar específico. Lesões cirúrgicas foram produzidas assepticamente na região dorsal de camundongos (n=120), divididos de acordo com o tratamento empregado: Grupo NaCl (NaCl 150mM), Grupo manose (manose 100mM), Grupo ConBr (ConBr 100µg mL-1) e Grupo ConBr/manose (solução contendo ConBr 100µg mL-1 preparada em manose 100mM). Amostras da área lesada foram coletadas para determinação do perfil de proteases e atividade colagenolítica no 2°, no 7° e no 12° dia de pós-operatório. O perfil das proteínas realizado através de eletroforese SDS-PAGE demonstrou a presença de proteínas com massa molecular de 67kDa em todos os grupos. O Grupo ConBr/manose apresentou a maior atividade colagenolítica no 12° dia de pós-operatório. A lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis influenciou a expressão de proteases com atividade colagenolítica podendo assim interferir no processo cicatricial das lesões cutâneas em camundongos.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P 0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P 0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372µg mL-1, respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494µg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

Perfil de proteases de lesões cutâneas experimentais em camundongos tratadas com a lectina isolada das sementes de Canavalia brasiliensis

The objective of the present study was determining the proteases profile of cutaneous healings treated with free and conjugated lectin of Canavalia brasiliensis (ConBr) and their specific sugar. An aseptic wound was produced in the thoracic area of the mice (n=120), divided according to the employed treatment: NaCl Group (150mM NaCl), manose Group (100mM manose), ConBr Group (100µg mL-1 ConBr) and ConBr/manose Group (solution containing 100µg mL-1 ConBr prepared in 100mM manose). Samples of the injured area were collected for determination of proteases profile and collagenolytic activity on 2nd, 7th e 12th days after the surgery. Electrophoresis SDS-PAGE demonstrated proteins with molecular mass of 67kDa in all groups. Group IV presented the highest collagenolytic activity on the 12th day post surgery. ConBr lectin influenced proteases expression with collagenolytic activity thus being able to intervene on skin wound healing in mice.

O objetivo deste estudo foi determinar o perfil de proteases em lesões cutâneas experimentais tratadas com a lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis (ConBr) livre e conjugada com o seu açúcar específico. Lesões cirúrgicas foram produzidas assepticamente na região dorsal de camundongos (n=120), divididos de acordo com o tratamento empregado: Grupo NaCl (NaCl 150mM), Grupo manose (manose 100mM), Grupo ConBr (ConBr 100µg mL-1) e Grupo ConBr/manose (solução contendo ConBr 100µg mL-1 preparada em manose 100mM). Amostras da área lesada foram coletadas para determinação do perfil de proteases e atividade colagenolítica no 2°, no 7° e no 12° dia de pós-operatório. O perfil das proteínas realizado através de eletroforese SDS-PAGE demonstrou a presença de proteínas com massa molecular de 67kDa em todos os grupos. O Grupo ConBr/manose apresentou a maior atividade colagenolítica no 12° dia de pós-operatório. A lectina isolada das sementes da Canavalia brasiliensis influenciou a expressão de proteases com atividade colagenolítica podendo assim interferir no processo cicatricial das lesões cutâneas em camundongos.

Protoplast formation and regeneration from Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 and clavulanic acid production

Protoplasts of the wild type Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 (ATCC 27064) were formed from spores cultures obtained in the lag, exponential and stationary growth phases by using 0.5% glycine in the culture medium. The protoplasts were obtained by treatment of the cells with lysozyme (EC-3.2.1.17) 40,000 U (1mg/mL), in an osmotic solution for 90 min at 28ºC. The frequency of regenerated protoplasts in the lag phase was 1.7x10³ CFU/mL (28.97%), in the beginning of the exponential phase 0.4x10² CFU/mL (31.67%), in the exponential growth phase 2.5x10³ CFU/mL (46.30%) and 1.0x10(5) CFU/mL in stationary phase (48.45%). Antibiotic production and activity of regenerated protoplasts were observed in all phases, except in the lag phase. The protoplast formation and regeneration techniques resulted in a new isolate strain of Streptomyces clavuligerus that produced approximately 2.5 fold more clavulanic acid.

Protoplastos foram formados a partir de esporos da amostra selvagem de Streptomyces clavuligerus durante a fase lag, exponencial e estacionária de crescimento, utilizando glicina a 0.5% como meio de cultura. Os protoplastos foram obtidos pelo tratamento das células com lisozima (EC-3.2.1.17) 40.000 U (1mg/mL) em solução osmótica de sorbitol e TES, por 90 min a 28ºC. A freqüência de protoplastos regenerados na fase lag foi de 1,7x10³ UFC/mL (28,97%), no início da fase exponencial correspondeu a 0,4x10² UFC/mL (31,67%), no final da fase exponencial observou-se 2,5x10³ UFC/mL (46,30%) e para a fase estacionária de crescimento apresentou 1,0x10(5) UFC/mL (48,45%). A produção do antibiótico e a atividade antibiótica dos protoplastos regenerados foram observadas em todas as fases de crescimento, exceto na fase lag. As técnicas de formação de protoplastos e regeneração resultaram em uma nova linhagem de Streptomyces clavuligerus produzindo 2,5 vezes mais ácido clavulânico.

PARTIAL CHARACTERIZATION OF PROTEASES FROM STREPTOMYCES CLAVULIGERUS USING AN INEXPENSIVE MEDIUM

The partial characterization of extracellular proteases from Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 and 644 mutant was investigated. The enzyme production was carried out in batch fermentation using soy bean filtrate as nitrogen source. Maximum activity was obtained after 96h of fermentation with an initial pH of 7.0. The enzyme was partially purified by ammonium sulphate precipitation. Enzymes from the two strains retained 37% of their initial activities at pH 8.0 after 2 h incubation at 25ºC. Enzyme half-life at pH 8.0 and 60ºC was 40.30 and 53.32 min, respectively for both strains (partially purified extract). The optimum pH was obtained at pH 7.0-8.0 and 8.4 for enzymes produced for 3585 and 644 strains (crude extract), respectively, and 8.4 and 8.0 for enzymes from the partially purified extract 3585 and 644 strains, respectively. The optimum temperature for the crude extract was 21ºC for both strains. However, for the partially preparation the optimum temperature was 50ºC and 40°C for S. clavuligerus NRRL 3585 and 644 strains respectively.

A caracterização parcial de proteases extracelulares de Streptomyces clavuligerus foi investigada. A produção da enzima foi realizada pela fermentação em batelada utilizando farinha de soja como fonte de nitrogênio. O máximo rendimento foi obtido após 96 horas de fermentação com um pH inicial de 7,0. A enzima foi purificada parcialmente por precipitação com sulfato de amônia. Ambas enzimas reteram 37% de sua atividade inicial a pH 8,0, após 2 horas de incubação a 25ºC. O tempo de meia-vida das enzimas foi de 40,30 e 53,32 minutos, respectivamente para ambos 3585 e 644 (extrato parcialmente purificado) a pH 8,0 e 60ºC. Com relação ao pH, a atividade ótima foi alcançada a pH 7,0-8,0 e 8,4 para enzimas produzidas pelas amostras 3585 e 644 (extrato bruto) respectivamente e 8,4 e 8,0 para as enzimas obtidas a partir dos extratos parcialmente purificados das amostras 3585 e 644, respectivamente. A temperatura ótima para o extrato bruto foi de 21ºC para S. clavuligerus NRRL 3585 e 644. Contudo, para a preparação parcialmente purificada, a temperatura ótima foi de 50 e 40ºC para amostras S. clavuligerus NRRL 3585 e 644 respectivamente.

Immobilization of lipase from Fusarium solani FS1

Lipase from Fusarium solani FS1 was immobilized by covalent attachment to polyacrylamide beads and onto magnetized Dacron, retaining 12% and 97% of activity, respectively. Lipase was also entrapped within polyacrylamide beads, retaining 53% of activity. Investigations of the kinetic characteristics of the immobilized derivatives using triolein as substrate showed that lipase immobilized onto polyacrilamide beads and Dacron did not follow Michaelis-Menten kinetics.

Lipase de Fusarium solani FS1 foi imobilizada por ligação covalente usando esferas de poliacrilamida e Dacron magnetizado, retendo 12%, e 97% de atividade, respectivamente. A lipase foi também enclausurada em esferas de poliacrilamida e reteve 53% de sua atividade específica. Investigações sobre o comportamento cinético usando trioleína como substrato mostraram que as lipases imobilizadas não seguem a cinética de Michaelis-Menten.