Covariates of vaginal microbiota and pro-inflammatory cytokine levels in women of reproductive age.

This study aimed to assess the correlation between covariates of the vaginal microbiota and local levels of proinflammatory cytokines in women of reproductive age presenting four molecularly defined bacterial community-state types (CSTs). We enrolled 133 non-pregnant women who attended primary care health clinics for routine Pap-testing. Molecular profiling of vaginal microbiota was performed by V3-V4 16S rRNA sequencing. The covariates of vaginal microbiota included were: vaginal pH, total bacterial cell count, diversity (Shannon index), -richness and dominant taxa abundances. Levels of interleukin (IL)-1ß, IL-6, IL-8, and tumour necrosis factor (TNF-α) were measured by enzyme-linked immunosorbent assays in supernatants of cervicovaginal fluids. Nonparametric Kruskal-Wallis test was used to compare microbiota covariates and cytokines among different CSTs. Spearman's tests were performed to assess correlations across the measured parameters. A total of 96 (72.2%) participants had CSTs dominated by Lactobacillus spp. (Lactobacillus crispatus CST I, n=38; Lactobacillus gasseri CST II, n=20; and Lactobacillus iners CST III, n=38). A total of 37 (27.8%) presented the Lactobacillus-depleted CST IV. Total bacterial count was higher in CST II (1.29E+05, 3.40E+04-6.69E+05) compared to other Lactobacillus-dominated CSTs (p=0.0003). The highest values of microbiota diversity (1.85; 0.23-2.68) and richness (27.0; 5.0-37.0) were observed in CST IV (P<0.0001). Lower levels of IL-1ß were observed in CST I (5.4; 0.0-3,256) when compared to CST III (51.7; 0.0-2,616) and to CST IV (56.2; 0.0-3,407) (P=0.008). Levels of IL-6 were higher in CST II (4.13; 0-131.4) than in CST IV (0.0-58.27) (P=0.02). Correlation tests showed an overall distinct profile of CST II when compared to other Lactobacillusdominated CSTs, particularly regarding the correlation between total bacterial load and cytokines (r>0.39). In conclusion, this study provides evidence of a single pro-inflammatory signature of L. gasseri-dominated microbiota in response to bacterial load. Further studies evaluating a broader range of inflammation markers are warranted.

Sialidase activity in aerobic vaginitis is equal to levels during bacterial vaginosis.

OBJECTIVE: To evaluate levels of proinflammatory cytokines and sialidase activity in aerobic vaginitis (AV) in relation to normal vaginal flora and bacterial vaginosis (BV). STUDY DESIGN: In this cross-sectional study, a total of 682 consecutive non-pregnant women attending the gynecology service were assessed and 408 women were included. Vaginal rinsing samples were collected from 223 women with microscopic finding of BV (n=98), aerobic vaginitis (n=25) and normal flora (n=100). Samples were tested for interleukin (IL)-1ß, IL-6, IL-8, tumor necrosis factor (TNF)-α, and sialidase activity. RESULTS: Compared to women with normal flora, vaginal levels of IL-1ß were highly increased in both BV and AV (p<0.0001). Significantly higher vaginal IL-6 was detected in AV (p<0.0001) but not in BV, in relation to normal flora. Women with AV also presented increased IL-8 levels (p<0.001), while those with BV presented levels similar to normal flora. Sialidase was increased in BV and AV compared with the normal group (p<0.0001) but no difference in sialidase activity was observed between BV and AV. CONCLUSION: A more intense inflammatory host response occurs for AV than for BV when compared with normal flora. Furthermore, the increased sialidase activity in AV and BV indicates that both abnormal vaginal flora types can be harmful to the maintenance of a healthy vaginal environment.

COMPARAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE CITOCINAS NO LÍQUIDO AMNIÓTICOS DE BEZERROS NELORE CONCEBIDOS POR MEIO DE DIFERENTES BIOTECNOLOGIAS DA REPRODUÇÃO

O objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações de TNF-a, IFN-g, IL-6 e IL-8 no fluido amniótico de bezerros concebidos por meio de PIV, TE e IA no momento do parto. Utilizaram-se sessenta animais divididos em grupos: 1- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de doadoras superovuladas (TE); 2- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de PIV; 3- vinte vacas Nelore gestando bezerros de IA. Durante a fase de expulsão, realizou-se a colheita do líquido amniótico que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Realizou-se ELISA para a dosagem das citocinas, cujas concentrações foram submetidas ao teste de Kruskal-Wallis, com p0,05). Contudo no grupo IA, a concentração de TNF-a foi inferior ao do grupo PIV (p0,05). Apenas duas amostras do grupo PIV apresentaram concentração detectável de IL-6 e para IL-8 apenas uma amostra do mesmo grupo. Os resultados desse experimento podem ser adotados como padrões para gestação normal de bovinos. Entretanto novas pesquisas na área da imunologia da gestação são necessárias para melhor descrever o papel das citocinas na manutenção da gestação e no desencadeamento do trabalho de parto em bovinos. PALAVRAS-CHAVE: Bezerros Nelore. Líquido amniótico. Citocinas. Biotecnologias

Comparação da concentração de citocinas no líquido amnióticos de bezerros nelore concebidos por meio de diferentes biotecnologias da reprodução

O objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações de TNF-a, IFN-g, IL-6 e IL-8 no fluido amniótico de bezerros concebidos por meio de PIV, TE e IA no momento do parto. Utilizaram-se sessenta animais divididos em grupos: 1- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de doadoras superovuladas (TE); 2- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de PIV; 3- vinte vacas Nelore gestando bezerros de IA. Durante a fase de expulsão, realizou-se a colheita do líquido amniótico que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Realizou-se ELISA para a dosagem das citocinas, cujas concentrações foram submetidas ao teste de Kruskal-Wallis, com p0,05). Contudo no grupo IA, a concentração de TNF-a foi inferior ao do grupo PIV (p0,05). Apenas duas amostras do grupo PIV apresentaram concentração detectável de IL-6 e para IL-8 apenas uma amostra do mesmo grupo. Os resultados desse experimento podem ser adotados como padrões para gestação normal de bovinos. Entretanto novas pesquisas na área da imunologia da gestação são necessárias para melhor descrever o papel das citocinas na manutenção da gestação e no desencadeamento do trabalho de parto em bovinos. PALAVRAS-CHAVE: Bezerros Nelore. Líquido amniótico. Citocinas. Biotecnologias

Comparação da concentração de citocinas no líquido amnióticos de bezerros Nelore concebidos por meio de diferentes biotecnologias da reprodução / Comparison of the cytokines concentration in amniotic fluid of the Nelore calves conceived by reproduction biotechnologies

O objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações de TNF-α, IFN-y, IL-6 e IL-8 no fluido amniótico de bezerros concebidos por meio de PIV, TE e IA no momento do parto. Utilizaram-se sessenta animais divididos em grupos: 1-vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de doadoras superovuladas (TE); 2-vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de PIV; 3- vinte vacas Nelore gestando bezerros de IA. Durante a fase de expulsão, realizou-se a colheita do líquido amniótico que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Realizou-se ELISA para a dosagem das citocinas, cujas concentrações foram submetidas ao teste de Kruskal-Wallis, com p<0.05. Para TNF-a verificou-se que o grupo TE não apresentou diferença na concentração em relação ao grupo PIV e IA (p>0,05). Contudo no grupo IA, a concentração de TNF-α foi inferior ao do grupo PIV (p<0,05). Para IFN-y não foi observada diferença significativa entre as concentrações nos diferentes grupos (p>0.05). Apenas duas amostras do grupo PIV apresentaram concentração detectável de IL-6 e para IL-8 apenas uma amostra do mesmo grupo. Os resultados desse experimento podem ser adotados como padrões para gestação normal de bovinos. Entretanto novas pesquisas na área da imunologia da gestação são necessárias para melhor descrever o papel das citocinas na manutenção da gestação e no desencadeamento do trabalho de parto em bovinos.

This study aimed to determine the levels of TNF-α, IFN-Y, IL-6 and IL-8 in amniotic fluid of calves from IVP compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis with 5% significance. The TNF-a levels in the animals of the ET group showed no significant difference the concentration of this cytokine in the group AI and IVP. However for group AI were statistically lower than the IVP group (p<0.05). Furthermore, the median of the INF wasn't different significantly between the groups (p>0.05). Only samples 15 and 18 of the IVP group had detectable concentrations of IL-6 and to IL-8 only 15 of the sample the same group. The results of this experiment can be adopted as standards for normal pregnancy in cattle, since there is no report of such literature. However new researches in immunology of pregnancy are necessary to describe the role of cytokines in both the maintenance of pregnancy and in the delivery labor for the bovine specie.

COMPARAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE CITOCINAS NO LÍQUIDO AMNIÓTICOS DE BEZERROS NELORE CONCEBIDOS POR MEIO DE DIFERENTES BIOTECNOLOGIAS DA REPRODUÇÃO

O objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações de TNF-a, IFN-g, IL-6 e IL-8 no fluido amniótico de bezerros concebidos por meio de PIV, TE e IA no momento do parto. Utilizaram-se sessenta animais divididos em grupos: 1- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de doadoras superovuladas (TE); 2- vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de PIV; 3- vinte vacas Nelore gestando bezerros de IA. Durante a fase de expulsão, realizou-se a colheita do líquido amniótico que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Realizou-se ELISA para a dosagem das citocinas, cujas concentrações foram submetidas ao teste de Kruskal-Wallis, com p0,05). Contudo no grupo IA, a concentração de TNF-a foi inferior ao do grupo PIV (p0,05). Apenas duas amostras do grupo PIV apresentaram concentração detectável de IL-6 e para IL-8 apenas uma amostra do mesmo grupo. Os resultados desse experimento podem ser adotados como padrões para gestação normal de bovinos. Entretanto novas pesquisas na área da imunologia da gestação são necessárias para melhor descrever o papel das citocinas na manutenção da gestação e no desencadeamento do trabalho de parto em bovinos. PALAVRAS-CHAVE: Bezerros Nelore. Líquido amniótico. Citocinas. Biotecnologias

Standardization the PCR technique for the detection of delta toxin in Staphylococcus spp

Coagulase-negative staphylococci (CNS), components of the normal flora of neonates, have emerged as important opportunistic pathogens of nosocomial infections that occur in neonatal intensive care units. Some authors have reported the ability of some CNS strains, particularly Staphylococcus epidermidis, to produce a toxin similar to S. aureus delta toxin. This toxin is an exoprotein that has a detergent action on the membranes of various cell types resulting in rapid cell lysis. The objectives of the present study were to standardize the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique for the detection of the gene responsible for the production of delta toxin (hld gene) in staphylococcal species isolated from catheters and blood cultures obtained from neonates, and to compare the results to those obtained with the phenotypic synergistic hemolysis method. Detection of delta toxin by the phenotypic and genotypic method yielded similar results for the S. aureus isolates. However, in S. epidermidis, a higher positivity was observed for PCR (97.4 por cento) compared to the synergistic hemolysis method (86.8 por cento). Among CNS, S. epidermidis was the most frequent islate and was a delta toxin producer. Staphylococcus simulans and S. warneri tested positive by the phenotypic method, but their positivity was not confirmed by PCR for the hld gene detection. These results indicate that different genes might be responsible for the production of this toxin in different CNS species, requiring highly specific primers for their detection. PCR was found to be rapid and reliable method for the detection of the hld gene in S. aureus and S. epidermidis

Standardization of the PCR technique for the detection of delta toxin in Staphylococcus spp.

Coagulase-negative staphylococci (CNS), components of the normal flora of neonates, have emerged as important opportunistic pathogens of nosocomial infections that occur in neonatal intensive care units. Some authors have reported the ability of some CNS strains, particularly Staphylococcus epidermidis, to produce a toxin similar to S. aureus delta toxin. This toxin is an exoprotein that has a detergent action on the membranes of various cell types resulting in rapid cell lysis. The objectives of the present study were to standardize the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique for the detection of the gene responsible for the production of delta toxin (hld gene) in staphylococcal species isolated from catheters and blood cultures obtained from neonates, and to compare the results to those obtained with the phenotypic synergistic hemolysis method. Detection of delta toxin by the phenotypic and genotypic method yielded similar results for the S. aureus isolates. However, in S. epidermidis, a higher positivity was observed for PCR (97.4%) compared to the synergistic hemolysis method (86.8%). Among CNS, S. epidermidis was the most frequent isolate and was a delta toxin producer. Staphylococcus simulans and S. warneri tested positive by the phenotypic method, but their positivity was not confirmed by PCR for the hld gene detection. These results indicate that different genes might be responsible for the production of this toxin in different CNS species, requiring highly specific primers for their detection. PCR was found to be a rapid and reliable method for the detection of the hld gene in S. aureus and S. epidermidis.