Assuntos
Proteínas de Neoplasias/antagonistas & inibidores , Inibidores de Serina Proteinase/farmacologia , Serpinas/fisiologia , Ativador de Plasminogênio Tipo Uroquinase/antagonistas & inibidores , Amidinas/síntese química , Amidinas/farmacologia , Amilorida/química , Amilorida/farmacologia , Animais , Benzamidinas/química , Benzamidinas/farmacologia , Guanidinas/química , Guanidinas/farmacologia , Camundongos , Camundongos Knockout , Modelos Biológicos , Estrutura Molecular , Invasividade Neoplásica , Proteínas de Neoplasias/metabolismo , Fenótipo , Inibidor 1 de Ativador de Plasminogênio/deficiência , Inibidor 1 de Ativador de Plasminogênio/genética , Inibidor 1 de Ativador de Plasminogênio/farmacologia , Inibidor 1 de Ativador de Plasminogênio/fisiologia , Inibidor 2 de Ativador de Plasminogênio/deficiência , Inibidor 2 de Ativador de Plasminogênio/genética , Inibidor 2 de Ativador de Plasminogênio/farmacologia , Inibidor 2 de Ativador de Plasminogênio/fisiologia , Receptores de Superfície Celular/efeitos dos fármacos , Receptores de Superfície Celular/metabolismo , Receptores de Ativador de Plasminogênio Tipo Uroquinase , Inibidores de Serina Proteinase/síntese química , Relação Estrutura-Atividade , Tiofenos/síntese química , Tiofenos/farmacologiaRESUMO
We have developed a protocol to isolate a gene from which only limited (amino-acid) sequence information is available. It involves two PCR amplifications using one constant primer and a set of nested primers and subsequent crosswise Southern hybridization. The amplified DNA giving a signal in both lanes is further processed for use in gene bank screening by applying standard procedures. In this way the structural gene for a thiol protease, BLH1, the homologue of the bleomycin A (a cancerostatic drug) resistance gene of rabbit (and man), was isolated from yeast genomic DNA.
Assuntos
Southern Blotting , Sondas de DNA/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Leveduras/genética , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Clonagem Molecular/métodos , Biblioteca Gênica , Dados de Sequência MolecularRESUMO
We have purified bleomycin hydrolase from yeast (molecular mass 55,000 Da). Using protein sequence-derived degenerate oligonucleotide primers and amplification by polymerase chain reaction, the yeast gene BLH1 was isolated and characterized. The deduced amino acid sequence (483 amino acids) exhibits surprisingly high homology to vertebrate bleomycin hydrolase (43% identical residues and 22% conserved exchanges). It contains three blocks of sequences found conserved in other members of the thiol proteinase family and thought to be associated with the catalytic centre. BLH1 is non-essential under all growth conditions tested. However, in the presence of 3.5 mg bleomycin/ml medium wild-type cells have a slight growth advantage compared to blh1 mutant cells.
Assuntos
Cisteína Endopeptidases/genética , Genes Fúngicos , Peptídeos/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sequência de Bases , Cisteína Endopeptidases/isolamento & purificação , Fígado/enzimologia , Dados de Sequência Molecular , Peptídeos/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase , Coelhos , Homologia de Sequência do Ácido NucleicoRESUMO
We present the complete cDNA and derived amino acid sequence of the non-collagenous domain NC1 of alpha 2(IV). Comparison with the corresponding NC1 domain of alpha 1(IV) reveals a high degree of homology at the protein level, in contrast to the barely homologous triple-helical sequences of both chains.
