RESUMO
Assisted reproductive technologies can be viewed as one potential approach for safeguarding wild species. In this study were evaluated the fertility of captivity male jaguar (Panthera onca) and different capacitation media using the golden hamster zona free oocyte penetration assay. We used frozen/thawed semen from 3 animals housed at Bosque dos Jequitibás, Campinas/SP, to test the Percoll gradient, Swim-up and Swim-up + 1 h incubation (5% CO2 / 38C), considering as penetration the spermatozoa head descondensation visualized within the oocyte. The results rate was greater for Percoll (26.5%) as compared to Swim-up (8.1%) (X2 = 19.93; p 0.05). It was not observed penetration with Swim-up + 1 h incubation (5% CO2 / 38C). It is concluded that Percoll and Swim-up are efficient methods to perform the golden hamster zona free oocyte penetration assay using frozen/thawed jaguar (Panthera onca) spermatozoa. The low rate of penetration could be related to the high rate of morphological abnormal spermatozoa observed in the samples examined.
A aplicação de técnicas de reprodução assistida em espécies selvagens ameaçadas de extinção surge como método alternativo com o intuito de minimizar a diminuição da variabilidade genética das populações. Com o objetivo de determinar a fertilidade de onças pintadas (Panthera onca) mantidas em cativeiro e avaliar a eficácia dos meios de capacitação espermática, foi realizado o ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Para a realização do experimento, foi utilizado sêmen congelado de 3 animais do Bosque dos Jequitibás, Campinas/SP. Foram testadas 3 técnicas: Percoll, Swim-up e Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38ºC, considerando como oócitos penetrados aqueles que apresentaram no seu interior a descondensação da cabeça do espermatozóide. A média de penetrações da técnica Percoll (26,5%) foi significativamente maior comparada à técnica Swim-up (8,1%), sendo que não houve penetração utilizando a técnica Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38C (x² = 19,93; p 0,05). Analisando os resultados, concluímos que as técnicas Percoll e Swim-up foram eficientes para a realização do ensaio de penetração, comprovando a capacidade de penetração dos espermatozóides de onças pintadas (Panthera onca), pós-descongelamento, em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Porém, houve uma baixa porcentagem de penetração, a qual pode estar associada ao elevado índice de
RESUMO
An in vitro zona-free hamster oocyte penetration test was utilized in 24 trials in order to evaluate the capacitation media used for ram sperm. A pool of fresh semen was collected from three crossed breed rams. Two semen drops were washed by centrifugation and incubated in high ionic strength treatment (HIS) or in a defined medium with HEPES, on heat ewe serum and heparin. After the incubation to promote capacitation, simplified triple-stain technique was used to evaluate the spontaneous acrosome reaction of the capacitated sperm. Superovulation in 96 golden hamsters was induced by PMSG and hCG. The oocytes were treated with hyaluronidase and trypsin to remove, respectively, the cumulus cells and the zona pellucida. Oocytes and capacitated sperm were incubated during 3 hours for further penetration. Then, oocytes were fixed and stained, being evaluated under phase contrast microscope. No significant statistical difference (p >; 0.05) was found between media, concerning the penetration rate of the capacitated sperm and between number of sperm viable with acrosome reaction after the capacitation treatment using two different media. It was concluded that both media utilized were effective in capacitating ram sperm.
Foram realizados 24 experimentos de penetração de espermatozóides de carneiros em oócitos zona-free de hamster com a finalidade de avaliar dois diferentes meios de capacitação espermática. Foi feito um "pool" do sêmen fresco de três carneiros mestiços, submetido à lavagem por centrifugação para retirada do plasma seminal e incubação em meio altamente iônico (HIS) ou em meio quimicamente definido acrescido de HEPES, soro de ovelha no cio e heparina, a fim de promover a capacitação dos espermatozóides. Foram utilizadas 96 hamsters fêmeas, superovuladas com os hormônios PMSG e hCG, que forneceram 3.069 oócitos, (média de 31,97 oócitos por fêmea). Os oócitos foram tratados em meio TL-HEPES-PVA com hialuronidase, a fim de retirar as células do cumulus. A zona pelúcida foi retirada através de lavagem dos oócitos em meio TL-HEPES-PVA com tripsina. Em seguida, os oócitos foram colocados em placas de fertilização, às quais se adicionaram os espermatozóides capacitados, permanecendo em estufa de CO2 por 3 horas a 38,5ºC, para promover a penetração. A seguir, procedeu-se à fixação e coloração dos oócitos. Foram realizados experimentos de coloração dos espermatozóides capacitados pela técnica de tripla coloração simplificada. Não houve diferença estatisticamente significativa (p >; 0,05) entre os meios utilizados, no que diz respeito à taxa de penetração dos espermatozóides capacitados,