RESUMO
INTRODUCTION: fasciolosis is an endemic disease in cattle in Cuba and there is an increase in the number of reported human cases in recent years. The coproparasitological diagnosis of fasciolosis has low sensitivity and is hard-working; for that reason, it is important to use immunoenzymatic methods mainly those that can detect this parasite antigens in the feces. A system for antigen detection called FasciDIG, with a reported sensitivity of 10 ng/mL has been developed in "Pedro Kouri" Institute of Tropical Medicine. OBJECTIVE: to increase the sensitivity of FasciDIG through some modifications to this diagnostic method. METHODS: two foul dilutions (concentrations of antigen 1 000 ng/mL- 1.95ng/mL in H20 Tween-20) were evaluated in a simulated system using FasciDIG and modified FasciDIG. The FasciDiG was modified using the secondary antibody obtained from rabbit against excretory-secretory antigens of Fasciola hepatica combined with biotin and then adding commercial conjugated extravidine peroxidase. Feces were collected from the rectum of 96 animals for slaughter and were evaluated by both methods, FasciDig and modified FasciDig. Kappa index was calculated between both assays. RESULTS: the detection limit for the FasciDIG was 3.9 ng/mL whereas the modified FasciDIG detected up to 1.95 ng/mL. The agreement index calculated between the two tests was 0.6238 corresponding to an index of substantive or good agreement. CONCLUSIONS: the modified method is more sensitive than FasciDIG and it can supplement the diagnosis of fasciolosis. The number of analyzed samples should be increased and the sensitivity and specificity should also be determined using the serial conic-cup sedimentation technique as the gold standard.
Assuntos
Fasciola hepatica/isolamento & purificação , Fasciolíase/diagnóstico , Animais , Fasciola hepatica/imunologia , Fasciolíase/imunologia , Testes Imunológicos , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
INTRODUCCIÓN: la fasciolosis en Cuba es una enfermedad endémica en el ganado y en los últimos años ha tenido un incremento en el número de casos reportados en humanos. OBJETIVOS: por causa de las dificultades para realizar el diagnóstico de esta enfermedad en zonas rurales o alejadas del laboratorio se ha hecho necesario buscar soluciones preservantes, que permitan conservar las muestras de heces hasta el momento de la determinación de antígeno por el método de FasciDIG®. MÉTODOS: se utilizaron diferentes soluciones preservantes (dicromato de potasio 2 por ciento, hibitane acuoso 0,5 por ciento, glutaral 2 por ciento, cloruro de benzalconio 1 por ciento, azida sódica 0,04 por ciento y agua destilada con tween 20 0,05 por ciento) a temperatura ambiente, 4 ºC y - 20 ºC. RESULTADOS: en las muestras preservadas a temperatura ambiente, las que no tenían preservo sufrieron un gran deterioro, mostraron valores superiores a las conservadas con agua tween 20 y con azida sódica. Esta última es un producto altamente tóxico, por ser un inhibidor de la cadena respiratoria y requeriría de un mayor cuidado en su utilización. CONCLUSIONES: se sugiere que la solución preservante de agua destilada con tween 20 0,05 por ciento a temperatura ambiente mostró los mejores resultados en el estudio(AU)
INTRODUCTION: fascioliasis is an endemic disease in cattle in Cuba, but in the last few years, there has been an increase in the number of reported human cases. OBJECTIVES: the difficulties in diagnosing this disease in rural areas or in zones far away from the laboratory make it necessary to find adequate solutions that allow preserving the stool specimens until the antigen is detected by the FasciDIG® method. METHODS: several preserving solutions were used (2 percent potassium dichromate, 0,5 percent aqueous hibitane, 2 percent glutaral, 1 percent benzalkonium chloride, 0,04 percent sodic azide and 0,05 percent distilled water with 20 tween) at room temperature, 4 ºC and - 20 ºC. RESULTS: among the samples kept at room temperature, those with no preserve suffered a significant deterioration, and their values were higher than the ones of the samples conserved with distilled water with tween 20 and with sodium azide. The latter is a very toxic product and its use would require a greater care. CONCLUSIONS: 0,05 percent distilled water with 20 tween at room temperature was the preserving solution with the best results in this study(AU)
Assuntos
Humanos , Técnicas de Laboratório Clínico , Fasciola hepatica/microbiologia , Fasciola hepatica/parasitologia , FezesRESUMO
INTRODUCCIÓN: la fasciolosis en Cuba es una enfermedad endémica en el ganado y en los últimos años ha tenido un incremento en el número de casos reportados en humanos. OBJETIVOS: por causa de las dificultades para realizar el diagnóstico de esta enfermedad en zonas rurales o alejadas del laboratorio se ha hecho necesario buscar soluciones preservantes, que permitan conservar las muestras de heces hasta el momento de la determinación de antígeno por el método de FasciDIG®. MÉTODOS: se utilizaron diferentes soluciones preservantes (dicromato de potasio 2 por ciento, hibitane acuoso 0,5 por ciento, glutaral 2 por ciento, cloruro de benzalconio 1 por ciento, azida sódica 0,04 por ciento y agua destilada con tween 20 0,05 por ciento) a temperatura ambiente, 4 ºC y - 20 ºC. RESULTADOS: en las muestras preservadas a temperatura ambiente, las que no tenían preservo sufrieron un gran deterioro, mostraron valores superiores a las conservadas con agua tween 20 y con azida sódica. Esta última es un producto altamente tóxico, por ser un inhibidor de la cadena respiratoria y requeriría de un mayor cuidado en su utilización. CONCLUSIONES: se sugiere que la solución preservante de agua destilada con tween 20 0,05 por ciento a temperatura ambiente mostró los mejores resultados en el estudio.
INTRODUCTION: fascioliasis is an endemic disease in cattle in Cuba, but in the last few years, there has been an increase in the number of reported human cases. OBJECTIVES: the difficulties in diagnosing this disease in rural areas or in zones far away from the laboratory make it necessary to find adequate solutions that allow preserving the stool specimens until the antigen is detected by the FasciDIG® method. METHODS: several preserving solutions were used (2 percent potassium dichromate, 0,5 percent aqueous hibitane, 2 percent glutaral, 1 percent benzalkonium chloride, 0,04 percent sodic azide and 0,05 percent distilled water with 20 tween) at room temperature, 4 ºC and - 20 ºC. RESULTS: among the samples kept at room temperature, those with no preserve suffered a significant deterioration, and their values were higher than the ones of the samples conserved with distilled water with tween 20 and with sodium azide. The latter is a very toxic product and its use would require a greater care. CONCLUSIONS: 0,05 percent distilled water with 20 tween at room temperature was the preserving solution with the best results in this study.
RESUMO
Se reportó la producción de 4 anticuerpos monoclonales anti-idiotipos (3G5, 5G1, 3H4 y 1H6) que inhiben la reacción antígeno-anticuerpo monoclonal ES-78, el cual reconoce antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica y se emplea para el diagnóstico en heces de la fasciolosis en el ganado bovino y en humanos. Cuando se utilizó en conejos el 3G5, como inmunógeno, se produjo una respuesta de anticuerpos contra antígeno de excreción-secreción de Fasciola hepatica sin un previo contacto con este. El empleo como inmunógeno de este anticuerpo monoclonal anti-idiotipo, que mimetiza un epítope protector contra la fasciolosis, junto a adyuvantes apropiados puede ser una manera novedosa de disminuir la carga parasitaria en modelos experimentales de fasciolosis(AU)
Assuntos
Anticorpos Monoclonais/imunologia , Fasciola hepatica/patogenicidadeRESUMO
Se reportó la producción de 4 anticuerpos monoclonales anti-idiotipos (3G5, 5G1, 3H4 y 1H6) que inhiben la reacción antígeno-anticuerpo monoclonal ES-78, el cual reconoce antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica y se emplea para el diagnóstico en heces de la fasciolosis en el ganado bovino y en humanos. Cuando se utilizó en conejos el 3G5, como inmunógeno, se produjo una respuesta de anticuerpos contra antígeno de excreción-secreción de Fasciola hepatica sin un previo contacto con este. El empleo como inmunógeno de este anticuerpo monoclonal anti-idiotipo, que mimetiza un epítope protector contra la fasciolosis, junto a adyuvantes apropiados puede ser una manera novedosa de disminuir la carga parasitaria en modelos experimentales de fasciolosis
Assuntos
Fasciola hepatica , Anticorpos MonoclonaisRESUMO
The ES-78 monoclonal antibodiy recognizes excretory-secretory antigens of Fasciola hepatica. This monoclonal antibody is used for diagnosis of humans and cattle fasciolosis. The production of 4 anti-idiotype monoclonal antibodies (3G5, 5G1, 3H4 and 1H6) inhibiting the antigen-monoclonal antibody ES 78 reaction was reported. This antibody recognizes excretion-secretion antigens of Fasciola hepatica and it is used for the diagnosis in faeces of fascioliasis in the bovine cattle and in humans. When the 3G5 was used in rabbits as an immunogen there was a response of antibodies against the excretion-secretion antigen of Fasciola hepatica without a previous contact wih it. The utilization of this anti-idiotype monoclonal antibody as an immunogen mimmicking a protective epitope against fascioliasis together with appropriate adjuvants may be a new way of reducing the parasitic burden in experimental models of fascioliasis.
Assuntos
Anticorpos Anti-Idiotípicos/imunologia , Anticorpos Anti-Helmínticos/imunologia , Anticorpos Monoclonais/imunologia , Antígenos de Helmintos/imunologia , Epitopos/imunologia , Fasciola hepatica/imunologia , Animais , Anticorpos Anti-Idiotípicos/química , Anticorpos Anti-Helmínticos/química , Anticorpos Monoclonais/química , Avaliação de Medicamentos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Epitopos/química , Fasciolíase/prevenção & controle , Feminino , Hibridomas/imunologia , Fragmentos Fab das Imunoglobulinas/química , Fragmentos Fab das Imunoglobulinas/imunologia , Masculino , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB C , Mimetismo Molecular , Conformação Proteica , Coelhos , VacinaçãoRESUMO
Se reportó recientemente que el anticuerpo monoclonal ES-78 es capaz de conferir protección pasiva contra fasciolosis. Se realizó la identificación de uno de los mecanismos mediante el cual ejerce su acción protectora contra la enfermedad. Este anticuerpo monoclonal fue capaz de realizar citotoxicidad mediada por anticuerpo tanto sobre células Raji marcadas con el antígeno de excreción-secreción de Fasciola hepatica como sobre parásitos recién desenquistados. Este anticuerpo monoclonal no inhibió la actividad de cisteíno proteinasa utilizando azocaseína como sustrato(AU)
Assuntos
Animais , Camundongos , Fasciolíase/terapia , Anticorpos Monoclonais/farmacologia , Anticorpos Monoclonais/uso terapêutico , Anticorpos Monoclonais/toxicidade , Camundongos Endogâmicos BALB CRESUMO
Se reportó recientemente que el anticuerpo monoclonal ES-78 es capaz de conferir protección pasiva contra fasciolosis. Se realizó la identificación de uno de los mecanismos mediante el cual ejerce su acción protectora contra la enfermedad. Este anticuerpo monoclonal fue capaz de realizar citotoxicidad mediada por anticuerpo tanto sobre células Raji marcadas con el antígeno de excreción-secreción de Fasciola hepatica como sobre parásitos recién desenquistados. Este anticuerpo monoclonal no inhibió la actividad de cisteíno proteinasa utilizando azocaseína como sustrato.
It was recently reported that the ES-78 monoclonal antibody is capable of giving passive protection against fasciolosis. One of the mechanisms by which it exerts its protective action against the disease was identified. We also demonstrated in this report the capability of this monoclonal antibody to produce antibody dependent cell citotoxicity on Raji cells coated with excretory-secretory antigens, as well as on newly disencysted parasites.. No inhibition of proteinase activity was found in presence of this monoclonal antibody when azocasein substrate was used.
RESUMO
Se demostró mediante un ensayo de incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU), que un anticuerpo monoclonal murino, de la subclase IgG1 contra la proteína de superficie SAG2 de Toxoplasma gondii, es capaz de reducir la invasión y multiplicación del parásito en células de la línea altamente diferenciada secretora de mucina HT29-18N2, proveniente de un adenocarcinoma de colon humano. Este resultado demuestra la importancia de la proteína de superficie SAG2 de T. gondii en la invasión y posterior multiplicación del parásito en la célula hospedera(AU)
Assuntos
Animais , Camundongos , Toxoplasma/crescimento & desenvolvimento , Bromodesoxiuridina , Anticorpos Monoclonais , Proteínas de Membrana , Animais de Laboratório , Células Epiteliais , Toxoplasmose , Neoplasias do ColoRESUMO
Se demostró mediante un ensayo de incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU), que un anticuerpo monoclonal murino, de la subclase IgG1 contra la proteína de superficie SAG2 de Toxoplasma gondii, es capaz de reducir la invasión y multiplicación del parásito en células de la línea altamente diferenciada secretora de mucina HT29-18N2, proveniente de un adenocarcinoma de colon humano. Este resultado demuestra la importancia de la proteína de superficie SAG2 de T. gondii en la invasión y posterior multiplicación del parásito en la célula hospedera
Assuntos
Animais de Laboratório , Anticorpos Monoclonais , Neoplasias do Colo , Células Epiteliais , Proteínas de Membrana , Toxoplasma , ToxoplasmoseRESUMO
Se reporta la obtención de 2 anticuerpos monoclonales que reconocen un epitope único presente en la subunidad B de la toxina termolábil de Vibrio cholerae y otro que muestra reacción cruzada con aquélla producida por algunas toxinas enteropatógenas. Se realizó la estandarización de un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) indirecto para el tamizaje primario y selección de los híbridos, además se le determinó el isotipo.
Assuntos
Animais , Coelhos , Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Vibrio cholerae , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Enterotoxinas , Diarreia/etiologiaRESUMO
En este trabajo se reporta la purificación de los diferentes serotipos del virus dengue a partir de un anticuerpo monoclonal que reconoce un etiope presente en los 4 serotipos, acoplado a una matriz de Sepharose 4B activada con bromuro de cianógeno. Los resultados demuestran que el método empleado permite realizar el proceso de purificación con rapidez y alto grado de pureza.
Assuntos
Técnicas In Vitro , Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Dengue/microbiologia , Vírus da Dengue/isolamento & purificaçãoRESUMO
En este trabajo se reporta la purificación de los diferentes serotipos del virus dengue a partir de un anticuerpo monoclonal que reconoce un etiope presente en los 4 serotipos, acoplado a una matriz de Sepharose 4B activada con bromuro de cianógeno. Los resultados demuestran que el método empleado permite realizar el proceso de purificación con rapidez y alto grado de pureza
Assuntos
Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Vírus da Dengue/isolamento & purificação , Dengue/microbiologia , Técnicas In VitroRESUMO
Se reporta la obtención de 2 anticuerpos monoclonales que reconocen un epitope único presente en la subunidad B de la toxina termolábil de Vibrio cholerae y otro que muestra reacción cruzada con aquélla producida por algunas toxinas enteropatógenas. Se realizó la estandarización de un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) indirecto para el tamizaje primario y selección de los híbridos, además se le determinó el isotipo