Evaluation of adipose-derived stromal vascular fraction from the lateral tailhead, inguinal region, and mesentery of horses.

Use of mesenchymal stem cells (MSCs) found in the stromal vascular fraction (SVF) of equine adipose tissue has promising applications for regenerative therapies. The most commonly used source of equine adipose tissue is the subcutaneous tailhead. The objective of this study was to compare 3 adipose depot sites in horses and determine the viability and cellular yield, capillary density, gene expression for selected markers, and colony-forming unit fibroblasts (CFU-Fs) in adipose tissue taken from these sites. Adipose tissue was excised from the area lateral to the tailhead, the inguinal region, and the small colon mesentery of 6 horses. Lipoaspirate was also collected from the area lateral to the tailhead. Stromal vascular fraction (SVF) was prepared in duplicate from the 3 different adipose tissue depots. The total nucleated and dead cell counts was determined manually using a hemocytometer and percent viability was calculated. Mass and volume of adipose were determined in order to calculate density and factor-VIII immunohistochemical staining was used to determine vascular density in the excisional adipose tissue samples from each horse. Quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was used to quantify gene expression for selected cellular markers from each site. There were significant differences in viability, yield of nucleated cells/gram of adipose tissue, vascular density, gene expression, and CFU-Fs among adipose depots. Adipose from the mesentery yielded the highest number of nucleated cells/gram of tissue and the highest vascular density and percentage of CFU-Fs. In the horse, both the anatomical site of collection and the method of tissue collection significantly impact the yield and composition of cells in the SVF. Further study is needed to assess whether one adipose source is superior for harvesting mesenchymal stem cells (MSCs) and whether the differences among sources are clinically relevant for in-vivo treatment of musculoskeletal injuries in horses.

L'utilisation de cellules souches mésenchymateuses (CSMs) retrouvées dans la fraction du stroma vasculaire (FSV) du tissu adipeux équin a des applications prometteuses pour les thérapies régénératrices. La source la plus fréquemment utilisée de tissu adipeux équin est le tissu sous-cutané de la base de la queue. L'objectif de la présente étude était de comparer trois sites de dépôts adipeux chez le cheval et de déterminer la viabilité et la récolte cellulaire, la densité capillaire, l'expression génique de marqueurs sélectionnés, et le nombre de fibroblastes formateur des colonies (FFC) dans le tissu adipeux prélevés de ces sites. Le tissu adipeux a été excisé de la région latérale à la base de la queue, de la région inguinale, et du mésentère du petit colon de six chevaux. Des aspirations de lipide ont également été prélevées de la région latérale de la base de la queue. La FSV a été préparée en duplicata à partir de chacun des trois dépôts différents de tissu adipeux. Les dénombrements totaux des cellules nucléées et mortes ont été déterminés manuellement à l'aide d'un hémocytomètre et le pourcentage de viabilité calculé. La masse et le volume de tissu adipeux ont été déterminés afin de calculer la densité et la coloration par immunohistochimie du facteur VIII a été utilisée afin de déterminer la densité vasculaire dans les échantillons de tissu adipeux excisé de chaque cheval. Une réaction d'amplification en chaine par la polymérase quantitative (ACPq) a été utilisée pour quantifier l'expression génique pour des marqueurs cellulaires sélectionnés de chaque site. Il y avait des différences significatives dans la viabilité, le rendement de cellules nucléées/gramme de tissu adipeux, la densité vasculaire, l'expression génique, et les FFCs entre les dépôts adipeux. Le tissu adipeux provenant du mésentère a généré le plus grand nombre de cellules nucléées/gramme de tissu et la plus haute densité vasculaire et pourcentage de FFCs. Chez le cheval, le site anatomique de prélèvement et la méthode de prélèvement du tissu ont un impact significatif sur le rendement et la composition cellulaire dans la FSV. Des études additionnelles sont requises pour évaluer si une source de tissu adipeux est supérieure pour récolter des cellules souches mésenchymateuses et si les différences entre les sources sont cliniquement pertinentes pour le traitement in vivo de blessures morpho-squelettiques chez les chevaux.(Traduit par Docteur Serge Messier).

High yield recovery of equine mesenchymal stem cells from umbilical cord matrix/Wharton's jelly using a semi-automated process.

Umbilical cord is an abundant source of perinatal, plastic adherent mesenchymal stem cells (UC-MSCs). UC-MSCs exhibit robust stemness and strong immunosuppressive and regenerative effects in vivo. This protocol describes enzymatic and mechanical dissociation of umbilical cord matrix (Wharton's jelly) that results in efficient isolation of large numbers of fresh nucleated umbilical cord regenerative cells (UC-RCs) that, when cultured on plastic, exhibit similar characteristics of UC-MSCs. This protocol potentially alleviates the need for culture expansion to obtain large numbers of cells required for clinical application. Dissociation is achieved with a blend of collagenase and neutral proteases with agitation at 37 °C in a semi-automatic system. Average expected yield is 1.65 × 10(6) cells/g tissue with 93 % viability. This protocol has been successfully used to isolate an uncultured nucleated regenerative cell population (also referred to as stromal vascular fraction or SVF) from surgically debrided skin and from human, equine, and canine adipose tissue. The procedure requires less than 30 min for tissue dissection and less than 100 min for cell extraction. Quickly obtaining a large number of UC-RCs that have pluripotent differentiation capacity without the complexity and risks of culture expansion could simplify and expand the use of UC-RCs in clinical as well as research applications.