Defensin production by human limbo-corneal fibroblasts infected with mycobacteria.

Epithelial cells of the cornea and the conjunctiva constitutively produce antimicrobial peptides; however, the production of defensins by other cell types located around the eye has not been investigated. We analyzed the production of beta-defensins (hBD) and cathelicidin LL-37 during the infection of primary limbo-corneal fibroblasts with M. tuberculosis (MTB), M. abscessus (MAB), and M. smegmatis (MSM). The intracellular survival of each mycobacterium, the production of cytokines and the changes on the distribution of the actin filaments during the infection were also analyzed. Fibroblasts produce basal levels of hBD1 and LL-37 and under PMA stimulation they produce hBD2, hBD3 and overexpress hBD1 and LL-37. MAB induced the highest levels of hBD1 and LL-37 and intermediate levels of IL-6; however, MAB was not eliminated. In addition, MAB induced the greatest change to the distribution of the actin filaments. MTB also produced changes in the structure of the cytoskeleton and induced low levels of hBD1 and IL-6, and intermediate levels of LL-37. The balance of these molecules induced by MTB appeared to contribute to the non-replicative state observed in the limbo-corneal cells. MSM induced the lowest levels of hBD1 and LL-37 but the highest levels of IL-6; MSM was eliminated. The results suggest that mycobacterial infections regulate the production of antimicrobial peptides and cytokines, which in conjunction can contribute to the control of the bacilli.

Contribution of CYP1B1 mutations and founder effect to primary congenital glaucoma in Mexico.

PURPOSE: The frequency of primary congenital glaucoma (PCG)-causing CYP1B1 mutations varies importantly among distinct populations, ranging from 20% in Indonesians and Japanese to about 100% among the Saudi Arabians and Slovakian Gypsies. Thus, the molecular characterization of large groups of PCG from different ethnic backgrounds is important to establish the actual CYP1B1 contribution in specific populations. In this work, the molecular analysis of the CYP1B1 gene in a group of Mexican PCG patients is reported. MATERIAL AND METHODS: Thirty unrelated Mexican patients fulfilling the clinical criteria for PCG were included. Two cases were familial and with proven consanguinity, originating from distinct regions of the country. Polymerase chain reaction amplification and direct automated sequencing of the CYP1B1 coding region was performed in each participating subject. RESULTS: An identical pathogenic CYP1B1 mutation was demonstrated in 2 unrelated PCG subjects. The mutation consisted of a homozygous G to A transition at nucleotide position 1505 in exon 3, which predicted a substitution of glutamic acid for lysine at residue 387 of the protein (E387K). In the remaining 28 PCG subjects, no deleterious mutations were identified. Both subjects with the E387K mutation shared a same haplotype for 5 CYP1B1 intragenic single nucleotide polymorphisms, indicating a common origin of the allele. CONCLUSIONS: Mexican patients with PCG are rarely (less than 10%) due to CYP1B1 mutations. Available data indicate that most of the non-Brazilian Latin American PCG patients investigated to date are not due to CYP1B1 defects. Populations with low incidence of CYP1B1 mutations are appropriate candidates for the identification of novel PCG-causing genes.

La interleuquina 6 está involucrada en la inmunopatogénesis de la queratoconjuntivitis por adenovirus / Interleukin 6 is a cytokine involved in theimmunopathogenesis of adenoviral keratoconjunctivitis

Los receptores tipo toll (RTT) desempeñan un papel importante en la respuesta inmune innata en las infecciones oculares, particularmente las producidas por adenovirus (Ad). Los objetivos de este estudio fueron determinar si la infección adenoviral induce citocinas proinflamatorias en células epiteliales corneales (CEC) humanas y evaluar la contribución de los RTT al microambiente pro inflamatorio por las células epiteliales limbales (CEL) humanas. Métodos: Las CEC fueron aisladas de córneas humanas sanas y cultivadas en medio epitelial hormonal suplementado hasta su confluencia. Las CEL fueron obtenidas a partir de rodetes limbales humanos y cultivadas en medio KSFM hasta su confluencia. Posteriormente, las CEC fueron infectadas con Ad5 y cultivadas en diferentes tiempos (24 h, 48 h, 72 h). Las CEL fueron estimuladas con agonistas de RTT por 24 h. Los sobrenadantes de cultivo fueron recuperados y analizados por ELISA para determinar las concentraciones de interleucina (IL) 1b, IL-6, factor de necorsis tumoral alfa (FNT-α) e interferón alfa (IFN-α). Resultados: La infección de CEC por Ad5 indujo la producción de IL-6 desde las 24 h. No se detectó IL-1b, FNT-α o IFN-α en los sobrenadantes de cultivo de las células infectadas en ningún tiempo de cultivo. La estimulación por agonistas de RTT en CEL indujo la producción de IL-6 a través de RTT8> RTT4 = RTT2. Conclusiones: La infección por Ad5 indujo la producción de IL-6 por CEC. El RTT8 podría estar implicado con la producción de esta citocina en CEL.

Toll-like receptors (TLRs) play an important role in theinnate immune response to ocular infections particularlyby adenovirus (Ad). The objectives of this study were todetermine whether adenoviral infection inducesproinflammatory cytokines by human corneal epithelialcells (CEC) and to evaluate TLR contribution to the proinflammatorymicroenvironment by human limbalepithelial cells (LEC). Methods: CEC were isolated fromhuman healthy corneas and grown in supplementedhormonal epithelial medium until confluence. LEC wereobtained from human limbal rims, and cultured in KSFMmedium until confluence. Then CEC were infected withAd5 and cultured at different times (24 h, 48 h, 72 h).LEC were stimulated with TLRs-agonist for 24 h. Culturessupernatants were recovered and analyzed by ELISA todetermine IL-1b, IL-6, TNF-α and IFN-α concentrations.Results: Ad5 infection of CEC induced the production ofIL-6 since 24 h. Nor IL-1b, TNF-α, or IFN-α were detectedin the culture supernatants of infected cells in any timeof culture. TLRs-agonist stimulation of LEC induced IL-6production through TLR8 > TLR4 = TLR2. Conclusions:Ad5 infection induced IL-6 production by CEC. TLR8 couldbe implicated in the production of this cytokine in LEC.

Estudio clínico y molecular de adenovirus que causan conjuntivitis esporádicas / Clinical and molecular study of adenovirus causing sporadic conjunctivitis

Objetivo: identificar adenovirus causantes de conjuntivitis esporádicas en una población mexicana. Métodos: se estudiaron 53 pacientes ebn quienes se evaluaron parámetros compatibles con un diagnóstico de conjuntivitis folicular. Muestras de raspado del saco conjuntival inferior de cada paciente fueron procesadas para identificar adenovirus por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) genérica. Los tipos fueron identificados por PCR genérica. La PCR-RFLP anidada y PCR múltiple. Los resultados se analizaron usando estadística descriptiva y chi cuadrado. Resultados: la quemosis grave tuvo una relación estadísticamente significativa con los datos de positividad por PCR genérica. La PCR-RFLP anidada permitió la identificación de adenovirus 3 (subgénero B) en 11 de las muestras, mientras que la PCR múltiple mostró adenovirus 1 en 2 muestras y en 16 se presentó adenovirus 2, ambas pertenecientes al subgénero C. El estudio estadísticos de los datos clínicos pudo relacionar la existencia de faringitis con tipos pertenecientes al subgénero C (p<0.05). Conclusiones: En México no se han comunicado infecciones esporádicas por adenovirus. En este trabajo se muestra que la presencia de quemosis grave y de faringitis son datos exploratorios que podrían identificar una infección verdadera por adenovirus. Mediante PCR-RFLP y PCR múltiple se identificaron tipo de subgéneros B y C.

Estudio clínico y molecular de adenovirus que causan conjuntivitis esporádicas / Clinical and molecular study of adenovirus causing sporadic conjunctivitis

Objetivo: identificar adenovirus causantes de conjuntivitis esporádicas en una población mexicana. Métodos: se estudiaron 53 pacientes ebn quienes se evaluaron parámetros compatibles con un diagnóstico de conjuntivitis folicular. Muestras de raspado del saco conjuntival inferior de cada paciente fueron procesadas para identificar adenovirus por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) genérica. Los tipos fueron identificados por PCR genérica. La PCR-RFLP anidada y PCR múltiple. Los resultados se analizaron usando estadística descriptiva y chi cuadrado. Resultados: la quemosis grave tuvo una relación estadísticamente significativa con los datos de positividad por PCR genérica. La PCR-RFLP anidada permitió la identificación de adenovirus 3 (subgénero B) en 11 de las muestras, mientras que la PCR múltiple mostró adenovirus 1 en 2 muestras y en 16 se presentó adenovirus 2, ambas pertenecientes al subgénero C. El estudio estadísticos de los datos clínicos pudo relacionar la existencia de faringitis con tipos pertenecientes al subgénero C (p<0.05). Conclusiones: En México no se han comunicado infecciones esporádicas por adenovirus. En este trabajo se muestra que la presencia de quemosis grave y de faringitis son datos exploratorios que podrían identificar una infección verdadera por adenovirus. Mediante PCR-RFLP y PCR múltiple se identificaron tipo de subgéneros B y C.(AU)