The elimination of apoptotic sperm in IVF procedures and its effect on pregnancy rate.

OBJECTIVE: To identify the effect of apoptotic sperm elimination with MACS in patients that require IVF. METHODS: An experimental, cross-sectional, descriptive, prospective and non-blinded study of diagnostic tests performed in patients who required IVF and ICSI from July 2011 to July 2012. Ninety-two couples participated according to the treatment administered to the semen sample; in the control group: the samples were subjected only to density gradients before ICSI, in the study group: the same procedure was performed plus the addition of the MACS technique. Comparing the groups, we assessed the fertilization, division, viable embryos and clinical pregnancy rates in all cases. RESULTS: We found significant differences when using MACS technique in sperm parameters. We found no differences between the total samples of the control and study groups. When separating the own and donated eggs in each group, we found an improvement in the fertilization rates (p<0.001) of the own eggs. In both groups, the handling of donated eggs lead to a significant improvement in the immunological pregnancy test (IPT) and fetal heart rate (FHR) results. Only in the donated eggs group, where MACS was applied, could we see that all cases with positive IPT had a fetal heart rate, which shows a significant difference (p<0.002) when compared with the control group, where the percentage decreased abruptly. CONCLUSIONS: This study demonstrates the effectiveness of the use of annexins (MACS) in eliminating apoptotic sperm, and when the obtained sperm is applied to good-quality eggs.

[Acrosomic reaction of human spermatozoid demonstrated with clorotetracycline]. / Respuesta acrosomal de espermatozoides humanos demostrada con clorotetraciclina.

BACKGROUND: Sperm preparation and acrosomic reaction have been largely studied to explain the physiology of sperm as reproductive cell. OBJECTIVE: To identify the morphological changes on in vitro prepared human sperm cells and in spontaneous and ionophore A23187 induced acrosome reaction of infertile males, through the application of the chlortetracycline test. DESIGN: Experimental prospective study. MATERIALS AND METHODS: Sperm samples of 17 subfertile males were processed as routine for a sperm analysis, we carried out sperm preparation and induction of the acrosomic reaction by means of calcium ions A23187. The prepared sperm with direct swim-up was assessed at one hour and at four hours. Direct aliquots were taken and processed for the test with CTC, we considered as positive result obtaining more than 15% increase in the induced AR versus spontaneous. RESULTS: The whole population was classified as asthenozoospermic. Eight training morphological patterns were identified and we found four types of responses for the induced AR: Type I had an increase at one and at four hours incubation (47%); type II had an increase only after 1 hour incubation (23.5%); type III had an increase only at 4 hours incubation (17.7%), and type IV did not have increase (11.8%). CONCLUSION: These results suggest that in astenozoospermic patients the training process has variations during the incubation time, demonstrated by the response at A23187. These findings could let us to select better spermatozoa in this group of males at the moment when capacitance is actually attained, thus being able to carry out more effective techniques in assisted reproduction.

[In vivo effect of endometria's and human cervix's secretions on the spermatozoid]. / Efecto in vivo de las secreciones del endometrio y del cuello uterino humano en el espermatozoide.

OBJECTIVE: To demonstrate the capacitance stages acquired by the spermatozoa after the in vivo contact with the endometrium and the human cervical canal. STUDY TYPE: Experimental, prospective, and longitudinal. MATERIALS AND METHODS: Spermatozoa obtained from the cervix and endometrium, plus post-capacitated semen in a 1 and 4 hours process, from couples that have proved fertility, were processed to evaluate motility, morphology, vitality and identification of morphological patterns with chlortetracycline and then inducted to acrosomal reaction with ionophore A23187. RESULTS: A safe, fast and harmless technique to obtain endometrial secretions is described. The spermatozoa capacitated in vitro and in vivo developed specific capacitance stages, applying Perry's patterns with the CTC test. Spermatozoa capacitated in vitro and then recovered in the cervix responded favorably to the induction of the acrosomal reaction with calcium ionophore A23187, differing from the obtained with endometrium wash. CONCLUSIONS: The spermatozoa recovered from the endometrium presented a more advanced capacitance stage than that obtained from the cervix, this is demonstrated with the induction of the acrosomal reaction and the CTC test. These findings suggest that endometrial and cervical tissues promote capacitance, different in each one of them and progressive in their biological route.

Esterilidad masculina y su asociación con patología genital y factores ambientales / Male sterility and its association with genital pathology and environmental facotrs

La calidad del semen puede ser afectada por una gran serie de factores pues existe evidencia de que, padecimientos como el varicocele, criptorquidia, orquistis e infecciones bacterianas, así como la exposición a agentes físicos como el calor, o sustancias químicas, o la ingesta de alcohol y drogas, pueden afectar la calidad del semen. El objetivo del presente trabajo es investigar el riesgo que implica la exposición a estos factores en la calidad del semen. El estudio se efectuó en forma prospectiva en un grupo de varones de la Clínica de Infertilidad de la Unidad de Biología de la Reproducción del Hospital Universitario "Dr. J.E. González". Se estudiaron 99 pacientes a quienes se les aplicó un cuestionario intencionado sobre antecedentes de exposición a factores ambientales y de patología urológica ya resuelta. Se practicó espermatobioscopia y se clasificó conforme a los parámetros de la OMS. Se formaron dos grupos: los que tenían espermatobioscopia normal (n=25) y los que fueron anormales (n=74). Se aplicó el estadístico de razón de incidencias, Xi cuadrada y riesgo atribuible para determinar el impacto que los diferentes factores pudieran tener sobre la calidad del semen. Las alteracione encontradas en el semen fueron: astenozoospermia (n=58), hipospermia (n=22), oligozoospermia (n=18), teratozoospermia (n=7), polizospermia (n=7) y azoospermia (n=6). Los resultados de las pruebas estadísticas mencionadas indican que en estas alteraciones existe factor de riesgo asociado al uso del tabaco, exposición a químicos, a agresores físicos y de anomalías anatómicas corregidas anteriormente. Se considera que la obtención de esta información es de gran ayuda ya que al eliminar factores desfavorables, se mejora el ambiente para lograr una espermatogénesis en circunstancias óptimas

Método simplificado para medir 17-OH progesterona plasmática por radioinmunoanálisis / SImplified method to measure 17-OH plasmatic progesterone by radioimmunoanálysis

La 17-hidroxiprogesterona (17-OHP4) es una hormona esteroide que se sintetiza en glándulos suprarrenales, ovarios y testículos. En la mujer normal durante la fase luteínica, los niveles periféricos reflejan la actividad secretora de ovarió, sin embargo, esta ciclicidad puede verse afectada por patologías como la hiperplasia adrenal congénita o la poliquistosis ovárica, por lo que el poder medir esta hormona es de gran utilidad en las clínicas de endocrinología ginecológica, endocrinología y andrología. En el presente trabajo se describe un método práctico para medir 17-OHP4 en sangre periférica por radioinmunoanálisis al utilizar un antisuero altamente específico. La utilidad del método, descrita con estudios de confiabilidad apropiados presentan una sensibilidad de la curva patrón de 10 picogramos, la precisión muestra un coeficiente de variación intra-análisis < ó = 11.9 por ciento e inter-análisis < ó = 10.0 por ciento, la exactitud fue > ó = 95 por ciento y la especificidad es demostrada por la caracterización del antisuero frente a otros esteroides. Al medir la 17-OHP4 en ng/ml en plasma de mujeres bajo diferentes condiciones fisiológicas, encontramos que los niveles de esta hormona en el día -5 de la fase proliferativa fueron de 0.31 ñ 0.24 nanogramos (ng)/ml y en el dia +7 de la fase secretora de 1.47 ñ 0.65 ng/ml. En las pacientes sometidas a estimulación con ACTH muestran, con respecto a la muestra basal, un incremento del doble de los niveles a los 30 minutos y que continúa en aumento hasta los 90 min. con cierta tendencia a la baja a los 120 minutos. Los resultados de este estudio permiten medir 17-OHP4 en plasma humano con buen grado de seguridad y facíl manejo, logrando además reducir el costo operativo

Obtención de óvulos de Hamster Dorado (Mesocricetus Auratus Weterhouse) libres de zona pelúcida / Ova obtention from golden hamsters (Mesocricetus Auratus Waterhouse) zona-free

El presente estudio describe la técnica utilizada para la obtención de óvulos de Hámster Dorado (mesocricetus Aurratus Waterhouse) libres de zona pelúcida útiles para estudios de Biología Reproductiva. Cinco grupos de Hámster Dorado con 5 hembras cada uno fueron inducidas a superovular al administrar por vía intraperitoneal gonadotropina sérica de yegua preñada a diferentes dosis, el grupo testigo recibió solo 0.25 ml de agua estéril. Las hembras estimuladas produjeron en total 653 óvulos con un promedio de 32.65 y un rango de 16 a 52, en cambio el grupo testigo produjo en total 50 óvulos con un promedio de 10.0 y un rango de 0 a 14. Por parte, la dosis de 25 U.I. degonadotropina sérica de yegua preñada (GSYP) fue la óptima en cuanto a la mayor producción de óvulos maduros, al obtener un promedio de 39.0 (D.E. ñ10.93)(n = 195 óvulos). Así mismo, fueron determinadas las condiciones favorables para la denudación de los óvulos. El cumulus oophorus fue degradado con hialuronidasa al 0.01 por ciento por un tiempo medio de 10'00" (D.E. ñ 03'56") y la zona pelúcida fue disuesta con tripsina al 0.20 por ciento en 03'20" (D.E. ñ 01'19"). Conjuntamente se determinó por tincipon supravital con Eosina Y, que el 100 por ciento de los óvulos maduros (n = 681) no resultaron afectados por los procesos enzimáticos y de manipulación utilizados para su denudación. finalmente los óvulos libres de zona pelúcida fueronfijados con ácido acético al 1 por ciento y teñidos con Azul de metileno al 0.01 por ciento ambos por un tiempo de 1 a 3 minutos.ñ Con ésto se establece que la técnica implementada produce un número de óvulos suficientes para llevar a cabo ensayos biológicos y que los óvulos permanecen viables aún después de su denundación. Estos gametos brindan la posibilidad de substituir a los óvulos humanos cuando se estudian algunos aspectos de la biología reproductiva humana evitando con ello problemas de tipo práctico, ético y moral.