Prophylactic effect of administration of human gamma globulins in a mouse model of tuberculosis.

The protective effect of human gamma globulins on Mycobacterium tuberculosis infection was evaluated in a mouse model of intratracheal infection. Animals receiving human gamma globulins intranasally, 2h before intratracheal challenge showed a significant decrease in lung bacilli load compared to non-treated animals in different time intervals of up to 2 months after challenge. The same effect was obtained when M. tuberculosis was pre-incubated with the gamma globulin before challenge. The protective effect of the gamma-globulin formulation was abolished after pre-incubation with M. tuberculosis. These results suggest a potential role of specific antibodies in the defence against mycobacterial infections.

Detección de proteínas de adhesión a fibronectina y colágeno presentesen Leptospira interrogans serovar Canicola / Detection of fibronectin and collagen binding-proteins from Leptospira interrogans serovar Canicola

Como parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra laleptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágeno en Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron extraídas mediante la solubilización con Tritón X-114 y se aplicaron en una columna de afinidad de IgG AntiBSA-Sepharose 2B CL, para eliminar la BSA, contaminante principal del medio de cultivo en que crece el microorganismo. La muestra libre de BSA (no fijado) se aplicó a una columna de afinidad de fibronectina Sepharose 4B-CNBr, que permitió la separación y detección de una fracción que contenía una proteína de unión a fibronectina presente en la cepa 87 de Leptospira interrogans serovar Canicola, cuyo peso molecular fue estimado en 40 kDa. La proteína aislada demostró ser antigénica y conservada en los serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok, en el ensayo de inmunodetección utilizado en este estudio (Dot blot). Para ello se utilizaron sueros específicos obtenidos en ratas infectadas experimentalmente con cada serovar y una mezcla de sueros de humanos convalecientes de leptospirosis. Las proteínas de membrana externa solubilizadas conTritón X-114, libres de BSA, fueron aplicadas también a una columna de afinidad colágeno-Sepharosa 4B-CNBr, que permitió la purificación de una proteína de unión a colágeno con un peso molecular de aproximadamente 25 kDa, la cual resultó ser antigénica frente a sueros de humanos convalecientes de la enfermedad. Ambas proteínas seleccionadas (40 kD y 25 kD) podrían ser evaluadas como posibles inmunógenos en futuros estudios encaminados a la obtención denuevos antígenos vacunales(AU)

As part of the studies conducted to obtain a vaccine formulation by subunits against human leptospirosis, purification and characterization of fibronectin and collagen binding-proteins in Leptospira interrogans was developed. Outer membrane proteins from Leptospira were solubilized with Triton X-114 and were applied in a first step into an IgG AntiBSA- Sepharose 2B CL affinity chromatographic column to eliminate BSA as main contaminant of culture media for this microorganism. TheBSA free fraction was applied into a Fibronectin-Sepharose 4B CNBr affinity column. A fibronectin binding protein from Leptospira interrogans serovar Canicola strain 87, with a molecular weight of 40 kDa was obtained. For this, specific sera obtained from experimentally infected rats with each serovar and mixes of human sera of convalescent patients were used. Thisprotein showed to be antigenic and conserved in Canicola, Copenhageni and Mozdok serovars. Solubilized outer membrane protein by Triton X114 was applied into another affinity column of Collagen-Sepharose 4B CNBr to isolate collagen binding proteins from Leptospira interrogans serovar Canicola strain 87. A collagen binding protein with a molecular weight of 25 kDawhich showed to be antigenic when evaluated by Dot-Blot against human sera of convalescent patients was found(AU)

Consideraciones sobre el empleo de antisueros somáticos en la clasificación por serotipos de cepas de Pseudomonas aeruginosa / Considerations about somatic antisera uses in classifying Pseudomonas aeruginosa strains by serotypes

El lipopolisacárido (LPS) de bacterias gramnegativas se emplea en el desarrollo de candidatos vacunales, como antígeno expuesto en la preparación o formando parte de esta para aumentar su poder inmunogénico. Sin embargo, esta estructura química de la membrana externa puede ser también utilizada para clasificar bacterias. Según el LPS, presente en la membrana externa bacteriana, Pseudomonas aeruginosa se puede clasificar en 20 tipos somáticos diferentes, clasificación muy útil para estudios epidemiológicos. P aeruginosa expone sus LPS en la membrana de forma estable, pero ocurren cambios en el fenotipo del LPS bacteriano durante la infección, sucesos que dificultan su clasificación. En estos momentos, los estudios que se desarrollan en el Instituto Finlay necesitan del empleo de tecnologías modernas de clasificación y del diagnóstico molecular para poder establecer patrones más precisos deexpresión de los LPS por métodos que junto a los ya existentes permitan diferenciar cepas bacterianas de la misma especie en cualquier tipo de infección(AU)

Lipopolysaccharides (LPS) of gramnegative bacteria are used for developing vaccine candidates as a complete exposed antigen in the preparation or as essential part of vaccines to improve its immunogenic power. Nevertheless, this outer membrane structure can also be used in bacterial classification according to the LPS chemical structure in outer membrane structure. Twenty different LPS have been reported as somatic antigens useful in P aeruginosa strains classification in epidemiologicalstudies. Current studies of Finlay Institute need the introduction of up-dated classification technologies and molecular diagnosis tools to establish more accurate epidemiological standards to improve the reports about the presence of new strains at theinfection site(AU)

Evaluación en animales del efecto protector de una inmunoglobulina anti Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico / Evaluation in animals of the protective effect of an anti Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa constituye uno de los agentes patógenos oportunistas de mayor frecuencia de aislamiento en los diversos procesos infecciosos, por lo que es reconocido como un gran problema de salud a nivel mundial. Al no existir un fármaco de alta efectividad ni vacunas disponibles contra esta bacteria, se emplea una terapia con inmunoglobulinas polivalentes comerciales que de forma combinada con los antibióticos contribuyen a eliminar la infección, aunque los preparados disponibles en el mercado no contienen concentraciones suficientemente elevadas de anticuerpos específicos contra este microorganismo. En este trabajo se llevó a cabo la evaluación en un modelo animal de una inmunoglobulina anti-Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico mediante un ensayo de reto con una cepa virulenta. Se evaluó dosis y vía de administración de la misma, así como el valor profiláctico o terapéutico de los anticuerpos. Esta gammaglobulina resultó ser protectora en animales mostrando una sobreviviencia cercana a un 75 por ciento en comparación con el grupo control no protegido y además se logra eliminar el estado de portador en los individuos infectados(AU)

Evaluación de la respuesta de anticuerpos hacia antígenos de Pseudomonas aeruginosa / Evaluation of antibodies response to Pseudomonas aeruginosa antigens

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno extracelular que genera una respuesta de anticuerpos específicos con utilidad para el diagnóstico y vacunas. En el presente estudio nos propusimos evaluar en suero humano los niveles de anticuerpos contra antígenos relevantes de P aeruginosa. Realizamos la determinación de anticuerpos IgG contra tres exoenzimas, consideradas como factores de virulencia de mayor importancia en infecciones. Este resultado dio paso a la evaluación del reconocimiento de IgG e IgA hacia antígenos de la envoltura celular bacteriana por ELISA de células enteras. Todos los sueros evaluados mostraron títulos de IgG e IgA superiores a los individuos sanos, con excepción de dos muestras de pacientes que no mostraron alto título. Este ensayopermitió analizar el nivel de reconocimiento hacia los antígenos más expuestos de la bacteria que incluyen principalmente LPS y proteínas de membrana externa. Se encontró diferencias entre los valores de densidad óptica a 450 nm de individuos sanos y enfermos. El método usado permitió seleccionar dos sueros de pacientes de diferentes tipos de infecciones que fueron comparados por Western blot. Se observó que aunque los sueros tenían reacción hacia distintos serotipos de P aeruginosa, la intensidad del reconocimiento variaba según el tipo de infección(AU)

Papel de los anticuerpos en la protección contra Micobacterium tuberculosis / Role of antibodies in protecting against Micobacterium tuberculosis

Convencionalmente se asume que la defensa del hospedero contra Mycobacterium tuberculosis se basa en los mecanismos de inmunidad celular exclusivamente y se descarta el papel de los anticuerpos en la protección. En este trabajo se analizan evidencias recientes que retan este dogma y sugieren la importancia de considerar la manipulación de la respuesta inmune humoral como una alternativa en la investigación de vacunas contra la tuberculosis(AU)

Determinación de las condiciones de ensayo óptimas en un / ELISA para la detección de anticuerpos séricos IgG anti-LPS / de Pseudomonas aeruginosa O11 / Determination of the optimal assay conditions for an ELISA to detect serum IgG antibodies of Pseudomonas aeruginosa O11

La selección de sueros de donantes sanos para la obtención de una gamma hiperinmune contra la infección por Pseudomona aeruginosa, así como la evaluación de la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal contra este microorganismo necesita contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas. En este trabajo se realizaron los ensayos necesarios para el montaje y laoptimización de un ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos séricos de clase IgG anti-LPS de P. aeruginosa O11. Se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo, dilución de trabajo de las muestras a evaluar y del conjugado con el fin de seleccionar en cada caso las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco del ensayo. Una concentración de 1,5 µg/mL de LPS O11 en PBS toda la noche a 4 °C como recubrimiento, lanecesidad de no incluir un paso adicional de bloqueo y el conjugado humano anti IgG-HRP diluido 1:3000, 1 h a 37 °C resultaron las variables óptimas para el ensayo. Por otra parte, se estableció el rango lineal de la curva del control positivo y se seleccionó la dilución de trabajo 1:100 para las muestras de sueros a evaluar(AU)

Reconocimiento de antígenos lipopolisacarídicos de Pseudomonas aeruginosa por sueros humanos

En este trabajo se procedió al reconocimiento de lipopolisacáridos de diferentes serotipos de Pseusodomas aeruginosa por sueros humanos. Los lipopolisacáridos fueron aislados por el método Wespthal y Jann. Se utilizaron un total de 104 sueros de pacientes infectados y donantes voluntarios, provenientes de instalaciones hospitalarias y del Banco de Sangre, para el reconocimiento de antígenos lipopolisacarídicos, mediante el ensayo de Dott Blot. Los resultados mostraron que los serotipos de mayor reconocimiento, por los sueros testados, fueron el O11, O13, O16 y el O15, existiendo diferencias significativas entre ellos (p< 0,05)(AU)

Pseudomonas aeruginosa: Vacunas: un reto a la investigación

Pseudomonas aeruginosa, patógeno gramnegativo versátil y oportunista debido a su gran adaptabilidad fisiológica, potencial metabólico y mecanismos de virulencia, es causa frecuente a escala mundial de severas o letales infecciones en pacientes hospitalizados. El empeño por lograr terapias alternativas para prevenir o combatir las infecciones producidas por P. aeruginosa ha ocupado a investigadores de todo el mundo desde la segunda mitad del pasado siglo y actualmente se continúan reportando trabajos que respaldan los ensayos de candidatos vacunales, fundamentalmente a partir de antígenos proteicos, mayoritariamente basados en la construcción de vacunas recombinantes. En este artículo se presenta una revisión de trabajos publicados sobre las investigaciones desarrolladas en diferentes países, con el objetivo de obtener candidatos vacunales para la prevención o tratamiento de las infecciones causadas por Pseudomonas aeruginosa, a partir de la década de los años 50 del siglo XX hasta el 2003(AU)

Serotipificación y susceptibilidad antibacteriana de cepas de pseudomonas aeurinosa ailada de pacientes quemados infectados / Serotyping and antibiotic susceptibility of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from infected burnt patients

Se ailaron 11 cepas de Pseudonomas aeruginosa en 10 pacientes quemados que se encontraban hospitalizados y se les realizó tipificación serológica y antibíotica para determinar los serotipos más frecuentes en este tipo de pacientes, Los serotipos de mayor frecuencia de aislamiento fueron O4 y el O5. Observamos una marcada resistencia frente a los antibíoticos: carbenicilina 81,8 (por ciento) y la aziocilina 72,7 (por ciento)(AU)