A Crystallographic Snapshot of SARS-CoV-2 Main Protease Maturation Process.

SARS-CoV-2 is the causative agent of COVID-19. The dimeric form of the viral Mpro is responsible for the cleavage of the viral polyprotein in 11 sites, including its own N and C-terminus. The lack of structural information for intermediary forms of Mpro is a setback for the understanding its self-maturation process. Herein, we used X-ray crystallography combined with biochemical data to characterize multiple forms of SARS-CoV-2 Mpro. For the immature form, we show that extra N-terminal residues caused conformational changes in the positioning of domain-three over the active site, hampering the dimerization and diminishing its activity. We propose that this form preludes the cis and trans-cleavage of N-terminal residues. Using fragment screening, we probe new cavities in this form which can be used to guide therapeutic development. Furthermore, we characterized a serine site-directed mutant of the Mpro bound to its endogenous N and C-terminal residues during dimeric association stage of the maturation process. We suggest this form is a transitional state during the C-terminal trans-cleavage. This data sheds light in the structural modifications of the SARS-CoV-2 main protease during its self-maturation process.

A role for fruit structure in seed survival and germination of Swartzia langsdorffii Raddi beyond dispersal.

Diaspore structure has been hypothesised to play a role in seed viability and/or germination of recalcitrant seeds, especially for Swartzia langsdorffii. Thus, this work aims to (i) investigate the in situ contribution of pericarp and aril on seed viability and germination, and (ii) identify morphoanatomical traits of S. langsdorffii diaspores that allow its desiccation-sensitive seeds to remain viable. The role of the pericarp and aril in seed survival and germination was investigated by placing the whole fruit, whole seeds (arillate seed) and bare seeds (without aril) in soil in the forest understorey, assessing germination, emergence, dead, firm and predated seeds, and water content of pericarps, arils and seeds. Correlation analysis was performed between environmental variables and physiological parameters. Histochemical features of diaspores were also investigated. Pericarp water content fell after several months, while the aril maintained its water content. Seeds did not lose water even without the presence of the pericarp and aril. However, presence of the pericarp promoted seed water content, viability and germination long after dispersal. The embryo had a thickened outer periclinal cell wall. Pericarp and aril are not essential to prevent water loss in seeds, but do help to retain seed moisture, favouring viability maintenance and promoting germination during the rainy season. Morphoanatomical features of seeds are suggested as main factors that reduce water loss. Survival of these desiccation-sensitive seeds upon dispersal during the dry season appears to be facilitated by multiple diaspore features that prevent viability loss.

Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em criações comerciais brasileiras de coelhos / Molecular characterization of Cryptosporidium spp. in Brazilian rabbit farms

A criptosporidiose é uma importante zoonose que pode ser transmitida por meio de alimentos, água de bebida e por contato com animais e pessoas infectadas. Além disso, trata-se de uma enfermidade clínica ou subclínica frequente em diversas espécies de animais, incluindo coelhos domésticos. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp., realizar sua classificação molecular e relacionar a presença do parasito às diferentes fases de criação em 21 criações comerciais de coelhos, localizadas nos estados de Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul e São Paulo. Quinhentas e catorze amostras de fezes foram colhidas e armazenadas em solução de dicromato de potássio 5%. Os oocistos foram purificados por centrífugo-flutuação em solução de Sheather e visualizados por microscopia, utilizando-se a coloração negativa com verde malaquita. Cinquenta e cinco amostras foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (nested PCR) e ao sequenciamento de fragmentos amplificados, referentes aos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicloproteína GP60, visando à caracterização molecular de Cryptosporidium spp. Oito amostras foram positivas para Cryptosporidium spp. pela microscopia (1,56%; 8/514) e sete foram positivas pela nested PCR (12,73%; 7/55). Pela análise molecular, foi possível identificar Cryptosporidium cuniculus (18S rRNA) e C. cuniculus subtipo VbA21 (gp60) em coelhos jovens e em matrizes.(AU)

Cryptosporidiosis is an important zoonotic disease that can be transmitted via water, food and contact with infected animals and people. Furthermore, clinical and subclinical disease occur in many animal species, including the domestic rabbit. The objective of this study was to determine the occurrence of Cryptosporidium spp., perform its molecular classification and correlate the presence of the parasite to the different animal categories in Brazilian rabbits farms. A total of 514 fecal samples from 21 rabbits farms located in the states of Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul and São Paulo were collected and stored in 5% potassium dichromate. Fecal samples were purified by centrifugal-flotation in Sheather solution and screened for Cryptosporidium spp. oocysts using the negative malachite green staining. Aiming the molecular characterization of Cryptosporidium spp., nested PCR targeting the 18S rRNA gene and gp60 gene followed by sequencing of amplified fragments were accomplished in 55 samples. Eight samples were positive for Cryptosporidium spp. by microscopy (1.56%; 8/514) and seven samples were positive by PCR (12.73%; 7/55). Molecular analysis revealed Cryptosporidium cuniculus for the 18S rRNA gene and C. cuniculus subtype VbA21 for the gp60 gene in kits and does.(AU)

Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em criações comerciais brasileiras de coelhos / Molecular characterization of Cryptosporidium spp. in Brazilian rabbit farms

Cryptosporidiosis is an important zoonotic disease that can be transmitted via water, food and contact with infected animals and people. Furthermore, clinical and subclinical disease occur in many animal species, including the domestic rabbit. The objective of this study was to determine the occurrence of Cryptosporidium spp., perform its molecular classification and correlate the presence of the parasite to the different animal categories in Brazilian rabbits farms. A total of 514 fecal samples from 21 rabbits farms located in the states of Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul and São Paulo were collected and stored in 5% potassium dichromate. Fecal samples were purified by centrifugal-flotation in Sheather solution and screened for Cryptosporidium spp. oocysts using the negative malachite green staining. Aiming the molecular characterization of Cryptosporidium spp., nested PCR targeting the 18S rRNA gene and gp60 gene followed by sequencing of amplified fragments were accomplished in 55 samples. Eight samples were positive for Cryptosporidium spp. by microscopy (1.56%; 8/514) and seven samples were positive by PCR (12.73%; 7/55). Molecular analysis revealed Cryptosporidium cuniculus for the 18S rRNA gene and C. cuniculus subtype VbA21 for the gp60 gene in kits and does.(AU)

A criptosporidiose é uma importante zoonose que pode ser transmitida por meio de alimentos, água de bebida e por contato com animais e pessoas infectadas. Além disso, trata-se de uma enfermidade clínica ou subclínica frequente em diversas espécies de animais, incluindo coelhos domésticos. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp., realizar sua classificação molecular e relacionar a presença do parasito às diferentes fases de criação em 21 criações comerciais de coelhos, localizadas nos estados de Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Pernambuco, Paraná, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul e São Paulo. Quinhentas e catorze amostras de fezes foram colhidas e armazenadas em solução de dicromato de potássio 5%. Os oocistos foram purificados por centrífugo-flutuação em solução de Sheather e visualizados por microscopia, utilizando-se a coloração negativa com verde malaquita. Cinquenta e cinco amostras foram submetidas à reação em cadeia pela polimerase (nested PCR) e ao sequenciamento de fragmentos amplificados, referentes aos genes da subunidade 18S do rRNA e da glicloproteína GP60, visando à caracterização molecular de Cryptosporidium spp. Oito amostras foram positivas para Cryptosporidium spp. pela microscopia (1,56%; 8/514) e sete foram positivas pela nested PCR (12,73%; 7/55). Pela análise molecular, foi possível identificar Cryptosporidium cuniculus (18S rRNA) e C. cuniculus subtipo VbA21 (gp60) em coelhos jovens e em matrizes.(AU)

Isolation and molecular characterization of Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo strain Hardjobovis in the urine of naturally infected cattle in Brazil.

Most epidemiologic studies on bovine leptospirosis are based on serological tests that use antibodies against several serotypes, including the serovar Hardjo, which is widespread and considered to be the most adapted to bovine hosts. However, using only serological studies is not sufficient to identify and distinguish species of leptospires. The aim of this study was report the first isolation in Brazil of two strains serovar Hardjo obtained in urine samples from naturally infected cows in a small Brazilian dairy herd and find the genetic species and consequently the type strain Hardjobovis by molecular characterization. Fifteen dairy cows with a history of reproductive failure, such as abortion and infertility, were selected. Urine samples obtained from each animal were immediately seeded in tubes containing Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris culture medium. The identification of the isolates was performed by Multilocus variable-number tandem-repeat analysis (MLVA) technique and phylogenetic analysis of partial sequence of gene sec Y. From the 15 urine samples evaluated, two Leptospira were found and identified as the Londrina 49 and Londrina 54 strains. The MLVA profiles and sequencing of gene sec Y characterized the isolates as L. borgpetersenii serovar Hardjo strain Hadjobovis because it has different genetic pattern of Leptospira interrogans serovar Hardjo strain Hardjoprajitno. Therefore, more studies are needed including isolation and molecular characterization from regional strains to obtain a better knowledge about epidemiology of serovar Hardjo in bovine which may assist in future strategies of prevention and control of bovine leptospirosis.

Ocorrência de cryptosporidium spp. em animais exóticos de companhia no Brasil / Occurrence of cryptosporidium spp. in exotic animals raised as pets in Brazil

A infecção por algumas espécies ou genótipos de Cryptosporidium representa um risco em potencial para a saúde pública, principalmente por causa de morbidade e mortalidade em crianças de zero a cinco anos de idade e em pacientes imunodeprimidos. Embora existam alguns relatos de infecção por Cryptosporidium em animais de companhia, sua participação na epidemiologia da criptosporidiose humana é incerta, e a literatura sobre esse tema ainda é bastante escassa. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e realizar a classificação molecular de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de animais exóticos criados como animais de estimação no Brasil. Um total de 386 amostras de seis espécies de animais foi colhido e armazenado em solução de dicromato de potássio 5% a 4°C. Os oocistos foram purificados por centrífugo-sedimentação em água/éter, seguindo-se a extração de DNA genômico e a realização da nestedPCR para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 18S do rRNA. Positividade para Cryptosporidium spp. foi observada em 11,40% (44/386) das amostras. O sequenciamento de fragmentos amplificados permitiu a identificação de Cryptosporidium tyzzeri em camundongos,Cryptosporidium murisem camundongos, hamster e chinchila, Cryptosporidium parvumem chinchila, Cryptosporidiumgenótipo hamsterem hamstere Cryptosporidium sp. em porquinho-da-índia. Os resultados deste estudo mostram que há uma variedade de espécies de Cryptosporidium presentes em animais exóticos de companhia no Brasil. Os dados sugerem que esses animais podem participar da epidemiologia da criptosporidiose humana, particularmente por seu estreito convívio.

Infection by some species or genotypes of Cryptosporidium represents a potential risk to public health, mainly because of the morbidity and mortality in children from zero to five years of age and in immunocompromised patients. Although there are some reports of Cryptosporidium infection in animals raised as pets, their participation in the epidemiology of human cryptosporidiosis is uncertain and studies on this topic are still scarce. The aim of this study was to determine the occurrence, as well as to perform the molecular classification of Cryptosporidium spp. in faecal samples of exotic animals raised as pets in Brazil. A total of 386 faecal samples from six species of animals was collected and stored in a solution 5% potassium dichromate at 4°C. The oocysts were purified by centrifugal sedimentation in water-ether, followed by genomic DNA extraction and the performance of the nested-PCR to amplify a partial fragment of 18S rRNA gene. Positivity for Cryptosporidium spp. was obtained in 11.40% (44/386) of samples. The sequencing of the amplified fragments allowed the identification of Cryptosporidium tyzzeri in mice, Cryptosporidium muris in mice, hamster and chinchilla, Cryptosporidium parvum in chinchilla, Cryptosporidium hamster genotype in hamster and Cryptosporidium sp. in guinea pig. The results of this study show that there is a variety of species of Cryptosporidium present in exotic animals raised as pets in Brazil. The data suggest that these animals may have zoonotic potential and participate in the epidemiology of human cryptosporidiosis.

Eficácia do dipropionato de imidocarb, da enrofloxacina e do cloridrato de oxitetraciclina no tratamento de bovinos naturalmente infectados por Anaplasma marginale / Efficacy of imidocarb dipropionate, enrofloxacin and oxytetracycline chlorydrate on the treatment of cattle naturally infected by Anaplasma marginale

O agente de maior importância, em relação à anaplasmose bovina, é o Anaplasma marginale. Os principais sinais clínicos dessa enfermidade são anemia hemolítica, icterícia, dispneia, taquicardia, febre, fadiga, lacrimejamento, sialorreia, micção frequente, anorexia, perda de peso, aborto e morte. A terapia antimicrobiana é o principal protocolo terapêutico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a eficácia do dipropionato de imidocarb, da enrofloxacina e do cloridrato de oxitetraciclina no tratamento de bovinos leiteiros naturalmente infectados por Anaplasma marginale. Para isso, foram avaliados 48 zebuínos mestiços que apresentavam os sinais clínicos sugestivos da doença. Os animais foram submetidos à coleta de sangue para a realização de hemograma e à extração de DNA para a confirmação da presença de A. marginale, por meio da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os animais foram divididos em três grupos experimentais, para realização dos protocolos terapêuticos, utilizando-se dipropionato de imidocarb, oxitetraciclina e enrofloxacina. Trinta e seis animais (75%) apresentaram reação positiva ao PCR. Os animais positivos não apresentaram diferenças significativas quanto ao hemograma e ao leucograma quando comparados com os negativos, no entanto os níveis de proteínas séricas foram inferiores nos animais positivos (P<0,05). Os três protocolos terapêuticos foram capazes de reduzir a infecção ao longo do tratamento (P<0,01), porém, após cinco dias de tratamento, a enrofloxacina apresentou maior efetividade em relação aos demais (P<0,01). Após o final do tratamento, nenhum protocolo foi capaz de eliminar totalmente a infecção pelo A. marginale em bovinos naturalmente infectados e manejados a campo.

Anaplasma marginale is the most important agent regarding cattle anaplasmosis. The main clinical signs of this disease are hemolitic anemia, jaundice, dyspnea, tachycardia, fever, fatigue, lacrimation, salivation, frequent urination, anorexia, weight loss, abortion and death. Antimicrobial therapy is the main therapeutic protocol. The aim of this paper was to assess the efficacy of this therapy frequently used in field conditions. In order to do so, 48 crossbred zebu cattle presenting suggestive clinical signs of the disease were assessed. The animals were submitted to blood sample collection to perform a CBC and DNA extraction to confirm the presence of A. marginale by the polymerase chain reaction (PCR) test. The animals were divided into three experimental groups to perform the therapeutic protocols, using imidocarb dipropionate, enrofloxacin and oxytetracycline. Thirty-six animals (75%) presented positive reaction to PCR. The positive animals do not present significant differences in the CBC and WBC when compared to the negative ones. However, the serum protein levels were lower in positive animals (P<0.05). All the treatments were able to reduce the infection throughout the treatment (P<0.01). However, in time 1, enrofloxacin presented greater effectiveness in relation to the other ones (P<0.01). After the end of the treatment no protocol was able to totally eliminate the infection by A. marginale in cattle naturaly infected and handled on the field.

Eficácia do dipropionato de imidocarb, da enrofloxacina e do cloridrato de oxitetraciclina no tratamento de bovinos naturalmente infectados por Anaplasma marginale / Efficacy of imidocarb dipropionate, enrofloxacin and oxytetracycline chlorydrate on the treatment of cattle naturally infected by Anaplasma marginale

O agente de maior importância, em relação à anaplasmose bovina, é o Anaplasma marginale. Os principais sinais clínicos dessa enfermidade são anemia hemolítica, icterícia, dispneia, taquicardia, febre, fadiga, lacrimejamento, sialorreia, micção frequente, anorexia, perda de peso, aborto e morte. A terapia antimicrobiana é o principal protocolo terapêutico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a eficácia do dipropionato de imidocarb, da enrofloxacina e do cloridrato de oxitetraciclina no tratamento de bovinos leiteiros naturalmente infectados por Anaplasma marginale. Para isso, foram avaliados 48 zebuínos mestiços que apresentavam os sinais clínicos sugestivos da doença. Os animais foram submetidos à coleta de sangue para a realização de hemograma e à extração de DNA para a confirmação da presença de A. marginale, por meio da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os animais foram divididos em três grupos experimentais, para realização dos protocolos terapêuticos, utilizando-se dipropionato de imidocarb, oxitetraciclina e enrofloxacina. Trinta e seis animais (75%) apresentaram reação positiva ao PCR. Os animais positivos não apresentaram diferenças significativas quanto ao hemograma e ao leucograma quando comparados com os negativos, no entanto os níveis de proteínas séricas foram inferiores nos animais positivos (P<0,05). Os três protocolos terapêuticos foram capazes de reduzir a infecção ao longo do tratamento (P<0,01), porém, após cinco dias de tratamento, a enrofloxacina apresentou maior efetividade em relação aos demais (P<0,01). Após o final do tratamento, nenhum protocolo foi capaz de eliminar totalmente a infecção pelo A. marginale em bovinos naturalmente infectados e manejados a campo.(AU)

Anaplasma marginale is the most important agent regarding cattle anaplasmosis. The main clinical signs of this disease are hemolitic anemia, jaundice, dyspnea, tachycardia, fever, fatigue, lacrimation, salivation, frequent urination, anorexia, weight loss, abortion and death. Antimicrobial therapy is the main therapeutic protocol. The aim of this paper was to assess the efficacy of this therapy frequently used in field conditions. In order to do so, 48 crossbred zebu cattle presenting suggestive clinical signs of the disease were assessed. The animals were submitted to blood sample collection to perform a CBC and DNA extraction to confirm the presence of A. marginale by the polymerase chain reaction (PCR) test. The animals were divided into three experimental groups to perform the therapeutic protocols, using imidocarb dipropionate, enrofloxacin and oxytetracycline. Thirty-six animals (75%) presented positive reaction to PCR. The positive animals do not present significant differences in the CBC and WBC when compared to the negative ones. However, the serum protein levels were lower in positive animals (P<0.05). All the treatments were able to reduce the infection throughout the treatment (P<0.01). However, in time 1, enrofloxacin presented greater effectiveness in relation to the other ones (P<0.01). After the end of the treatment no protocol was able to totally eliminate the infection by A. marginale in cattle naturaly infected and handled on the field.(AU)

Origin of the subepidermal tissue in Piper L. leaves.

Studies on the anatomy of Piper leaves demonstrate the presence of a subepidermal tissue distinct from the adjacent epidermis, which cells show thin walls and hyaline contents. Some authors consider such cells a hypodermal tissue, while others refer to them as components of a multiple epidermis. In this study, the nature of this subepidermal tissue was investigated through the analysis of leaf ontogeny in three Piper species. The analysis showed that the referred tissue originates from the ground meristem and, thus, should be considered a hypodermis. The studied species suggests that the role of the hypodermis would be to protect the photosynthetic apparatus from excess light, regulating the intensity of light reaching the chlorophyll parenchyma.

Origin of the subepidermal tissue in Piper L. leaves / Origem do tecido subepidérmico em folhas de Piper L.

Studies on the anatomy of Piper leaves demonstrate the presence of a subepidermal tissue distinct from the adjacent epidermis, which cells show thin walls and hyaline contents. Some authors consider such cells a hypodermal tissue, while others refer to them as components of a multiple epidermis. In this study, the nature of this subepidermal tissue was investigated through the analysis of leaf ontogeny in three Piper species. The analysis showed that the referred tissue originates from the ground meristem and, thus, should be considered a hypodermis. The studied species suggests that the role of the hypodermis would be to protect the photosynthetic apparatus from excess light, regulating the intensity of light reaching the chlorophyll parenchyma.(AU)

Os estudos de anatomia foliar de espécies de Piper revelam a presença de um tecido subepidérmico distinto da epiderme e cujas células apresentam paredes finas e conteúdo hialino. Estas células são referenciadas por alguns autores como um tecido hipodérmico e por outros, como sendo constituintes de uma epiderme múltipla. Nesse estudo verificou-se a natureza deste tecido subepidérmico a partir da análise da ontogênese foliar de três espécies de Piper. A análise revelou que o referido tecido tem origem do meristema fundamental e, portanto, deve ser denominado de hipoderme. Para as espécies avaliadas, sugere-se que a hipoderme teria função de, proteger o aparato fotossintético do excesso de luminosidade, regulando a intensidade luminosa que atinge o parênquima clorofiliano.(AU)

OCORRÊNCIA DE CRYPTOSPORIDIUM SPP. EM PSITACÍDEOS MANTIDOS EM CATIVEIRO NAS REGIÕES SUL E SUDESTE DO BRASIL

A criptosporidiose já foi descrita em várias espécies animais, incluindo 152 espécies de mamíferos e mais de 30 espécies de aves. A infecção em seres humanos tem sido relatada em mais de 90 países localizados em seis continentes. Apesar de não haver consenso para classificação definitiva das espécies de Cryptosporidium, alguns autores sugerem a existência de, pelo menos, 27 espécies. O presente trabalho tem como objetivo determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em psitacídeos mantidos em cativeiro nas regiões sul e sudeste do Brasil. Coletaram-se 159 amostras de fezes de nove gêneros de aves da ordem psitaciformes, provenientes de nove cidades e quatro estados, presentes no Campeonato de Ornitologia 2015 da Federação Ornitológica do Brasil (FOB), realizado em Itatiba/SP. As amostras foram colhidas no momento da recepção das aves, do fundo da gaiola, antes que houvesse contato direto ou indireto entre as aves e de forma a evitar contaminação cruzada entre amostras. A purificação e concentração dos oocistos foram realizadas por meio da técnica de centrífugo-flutuação em solução de Sheather e, para análise microscópica, utilizou-se a técnica de coloração negativa com verde malaquita. Forpus spp. foi o gênero de aves com maior número de amostras analisadas (50,31%; 80/159) e de amostras positivas para Cryptosporidium spp. (70%; 7/10). Santa Catarina e São Paulo foram os únic

ANÁLISE MICROSCÓPICA DE OOCISTOS DE Criptosporidium spp. EM CALOPSITAS (Nymphicus hollandicus)

Cryptosporidium spp. são coccídios intracelulares obrigatórios que se desenvolvem nas microvilosidades das células do epitélio gastrintestinal de hospedeiros vertebrados causando doença com manifestações clínicas ou de caráter assintomático. Em aves, causa infecções de curso agudo envolvendo os tratos respiratórios e digestivos de várias espécies de Psitaciformes. O objetivo do estudo foi pesquisar oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de calopsitas (Nymphicus hollandicus). Um total de 50 calopsitas domésticas, do Município de Araçatuba, São Paulo, foram examinadas. Destas, 22 fêmeas e 20 machos e oito sem identificação do sexo. Em relação a faixa etária sete eram jovens, 26 adultos, 2 idosos e 15 sem idade identificada. Considerando a procedência dessas aves, 26 eram de criatório, 15 de pet shops e nove de outra origem (doação e encontrada nas ruas). A purificação e concentração dos oocistos foi realizada por meio da Técnica de Centrífugo-Flutuação em solução de Sheather, seguida de análise microscópica por meio da Técnica de coloração negativa com Verde Malaquita. Um questionário foi aplicado aos proprietários abordando principalmente informações sobre o sexo, faixa etária, procedência, episódios de diarreia e vermifugação. A análise dos dados constituiu de estatística descritiva e teste exato de Fisher para verificar associações entre as variáveis. Episódios di

Ocorrência de cryptosporidium spp. em psitacídeos mantidos em cativeiro nas regiões sul e sudeste do brasil

A criptosporidiose já foi descrita em várias espécies animais, incluindo 152 espécies de mamíferos e mais de 30 espécies de aves. A infecção em seres humanos tem sido relatada em mais de 90 países localizados em seis continentes. Apesar de não haver consenso para classificação definitiva das espécies de Cryptosporidium, alguns autores sugerem a existência de, pelo menos, 27 espécies. O presente trabalho tem como objetivo determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em psitacídeos mantidos em cativeiro nas regiões sul e sudeste do Brasil. Coletaram-se 159 amostras de fezes de nove gêneros de aves da ordem psitaciformes, provenientes de nove cidades e quatro estados, presentes no Campeonato de Ornitologia 2015 da Federação Ornitológica do Brasil (FOB), realizado em Itatiba/SP. As amostras foram colhidas no momento da recepção das aves, do fundo da gaiola, antes que houvesse contato direto ou indireto entre as aves e de forma a evitar contaminação cruzada entre amostras. A purificação e concentração dos oocistos foram realizadas por meio da técnica de centrífugo-flutuação em solução de Sheather e, para análise microscópica, utilizou-se a técnica de coloração negativa com verde malaquita. Forpus spp. foi o gênero de aves com maior número de amostras analisadas (50,31%; 80/159) e de amostras positivas para Cryptosporidium spp. (70%; 7/10). Santa Catarina e São Paulo foram os únic

OCORRÊNCIA DE CRYPTOSPORIDIUM SPP. EM PSITACÍDEOS MANTIDOS EM CATIVEIRO NAS REGIÕES SUL E SUDESTE DO BRASIL

A criptosporidiose já foi descrita em várias espécies animais, incluindo 152 espécies de mamíferos e mais de 30 espécies de aves. A infecção em seres humanos tem sido relatada em mais de 90 países localizados em seis continentes. Apesar de não haver consenso para classificação definitiva das espécies de Cryptosporidium, alguns autores sugerem a existência de, pelo menos, 27 espécies. O presente trabalho tem como objetivo determinar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em psitacídeos mantidos em cativeiro nas regiões sul e sudeste do Brasil. Coletaram-se 159 amostras de fezes de nove gêneros de aves da ordem psitaciformes, provenientes de nove cidades e quatro estados, presentes no Campeonato de Ornitologia 2015 da Federação Ornitológica do Brasil (FOB), realizado em Itatiba/SP. As amostras foram colhidas no momento da recepção das aves, do fundo da gaiola, antes que houvesse contato direto ou indireto entre as aves e de forma a evitar contaminação cruzada entre amostras. A purificação e concentração dos oocistos foram realizadas por meio da técnica de centrífugo-flutuação em solução de Sheather e, para análise microscópica, utilizou-se a técnica de coloração negativa com verde malaquita. Forpus spp. foi o gênero de aves com maior número de amostras analisadas (50,31%; 80/159) e de amostras positivas para Cryptosporidium spp. (70%; 7/10). Santa Catarina e São Paulo foram os únic

ANÁLISE MICROSCÓPICA DE OOCISTOS DE Criptosporidium spp. EM CALOPSITAS (Nymphicus hollandicus)

Cryptosporidium spp. são coccídios intracelulares obrigatórios que se desenvolvem nas microvilosidades das células do epitélio gastrintestinal de hospedeiros vertebrados causando doença com manifestações clínicas ou de caráter assintomático. Em aves, causa infecções de curso agudo envolvendo os tratos respiratórios e digestivos de várias espécies de Psitaciformes. O objetivo do estudo foi pesquisar oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de calopsitas (Nymphicus hollandicus). Um total de 50 calopsitas domésticas, do Município de Araçatuba, São Paulo, foram examinadas. Destas, 22 fêmeas e 20 machos e oito sem identificação do sexo. Em relação a faixa etária sete eram jovens, 26 adultos, 2 idosos e 15 sem idade identificada. Considerando a procedência dessas aves, 26 eram de criatório, 15 de pet shops e nove de outra origem (doação e encontrada nas ruas). A purificação e concentração dos oocistos foi realizada por meio da Técnica de Centrífugo-Flutuação em solução de Sheather, seguida de análise microscópica por meio da Técnica de coloração negativa com Verde Malaquita. Um questionário foi aplicado aos proprietários abordando principalmente informações sobre o sexo, faixa etária, procedência, episódios de diarreia e vermifugação. A análise dos dados constituiu de estatística descritiva e teste exato de Fisher para verificar associações entre as variáveis. Episódios di

Ocorrência de Cryptosporidium spp. em animais exóticos de companhia no Brasil / Occurrence of Cryptosporidium spp. in exotic animals raised as pets in Brazil

A infecção por algumas espécies ou genótipos de Cryptosporidiumrepresenta um risco em potencial para a saúde pública, principalmente por causa de morbidade e mortalidade em crianças de zero a cinco anos de idade e em pacientes imunodeprimidos. Embora existam alguns relatos de infecção por Cryptosporidiumem animais de companhia, sua participação na epidemiologia da criptosporidiose humana é incerta, e a literatura sobre esse tema ainda é bastante escassa. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e realizar a classificação molecular deCryptosporidiumspp. em amostras fecais de animais exóticos criados como animais de estimação no Brasil. Um total de 386 amostras de seis espécies de animais foi colhido e armazenado em solução de dicromato de potássio 5% a 4°C. Os oocistos foram purificados por centrífugo-sedimentação em água/éter, seguindo-se a extração de DNA genômico e a realização da nestedPCR para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 18S do rRNA. Positividade para Cryptosporidiumspp. foi observada em 11,40% (44/386) das amostras. O sequenciamento de fragmentos amplificados permitiu a identificação de Cryptosporidium tyzzeri em camundongos,Cryptosporidium murisem camundongos, hamster e chinchila, Cryptosporidium parvumem chinchila, Cryptosporidiumgenótipo hamsterem hamstere Cryptosporidiumsp. em porquinho-da-índia. Os resultados deste estudo mostram que há uma variedade de espécies de Cryptosporidiumpresentes em animais exóticos de companhia no Brasil. Os dados sugerem que esses animais podem participar da epidemiologia da criptosporidiose humana, particularmente por seu estreito convívio.(AU)

Infection by some species or genotypes of Cryptosporidium represents a potential risk to public health, mainly because of the morbidity and mortality in children from zero to five years of age and in immunocompromised patients. Although there are some reports of Cryptosporidium infection in animals raised as pets, their participation in the epidemiology of human cryptosporidiosis is uncertain and studies on this topic are still scarce. The aim of this study was to determine the occurrence, as well as to perform the molecular classification of Cryptosporidium spp. in faecal samples of exotic animals raised as pets in Brazil. A total of 386 faecal samples from six species of animals was collected and stored in a solution 5% potassium dichromate at 4°C. The oocysts were purified by centrifugal sedimentation in water-ether, followed by genomic DNA extraction and the performance of the nested-PCR to amplify a partial fragment of 18S rRNA gene. Positivity for Cryptosporidium spp. was obtained in 11.40% (44/386) of samples. The sequencing of the amplified fragments allowed the identification of Cryptosporidium tyzzeri in mice, Cryptosporidium muris in mice, hamster and chinchilla, Cryptosporidium parvum in chinchilla, Cryptosporidium hamster genotype in hamster and Cryptosporidium sp. in guinea pig. The results of this study show that there is a variety of species of Cryptosporidium present in exotic animals raised as pets in Brazil. The data suggest that these animals may have zoonotic potential and participate in the epidemiology of human cryptosporidiosis.(AU)

Detecção e classificação molecular de Chlamydophila psittaci em amostras fecais de aves assintomáticas / Detection and molecular characterization of Chlamydophila psittaci in asymptomatic birds

Chlamydophila psittaci é uma bactéria que causa doença respiratória ou sistêmica em aves e em seres humanos. Em vista do risco de transmissão para humanos, o objetivo deste estudo foi detectar a presença de Chlamydophila spp. em amostras de fezes ou suabes cloacais de aves assintomáticas. Foram colhidas 403 amostras fecais ou suabes cloacais, provenientes de aves domésticas, selvagens ou exóticas. As amostras foram submetidas à PCR em tempo real para C. psittaci, para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 16S do rRNA, utilizando o SsoFastTM EvaGreen® Supermix (Bio-Rad) e análise da curva de dissociação. Para determinação do genótipo de C. psittaci, foi usada a hemi-nested PCR visando à amplificação de fragmento parcial do gene OMP-A, realizada nas amostras positivas pela PCR em tempo real, seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. A PCR em tempo real revelou positividade em 17 (4,21%) amostras. A hemi-nested foi positiva em 2 amostras positivas pela PCR em tempo real. O genótipo A de C. psittaci foi identificado pelo sequenciamento de uma amostra amplificada pela hemi-nested PCR. Os resultados deste experimento demonstram que a PCR em tempo real, visando à amplificação de fragmento parcial da subunidade 16S do rRNA, seguida da análise da curva de dissociação, pode ser utilizada para detecção de DNA de Chlamydophila sp. em amostras fecais de aves assintomáticas. A classificação da espécie de Chlamydophila e do genótipo de C. psittaci deve ser realizada por meio de PCR tendo como alvo o gene ompA e sequenciamento dos fragmentos amplificados.

Chlamydophila psittaci is a bacterium that causes respiratory or systemic disease in birds and humans. Owing to the risk of transmission from asymptomatic birds to humans, the objective of this study was to detect the presence of Chlamydophila spp. in asymptomatic birds. Four hundred and three fecal samples or cloacal swabs were collected from domestic, wild or exotic birds. The 403 samples were examined by real time PCR specific for the 16S subunit of rRNA gene using SsoFastEvaGreen®SupermixTM (Bio-Rad) and melting curve analysis. Hemi-nested PCR specific for the OMP-A gene, accomplished in real-time PCR positive samples, was followed by sequencing of the amplified fragments to determine the genotype of C. psittaci. Real-time PCR was positive in 17 (4.21%) samples. Hemi-nested PCR revealed positivity in two samples previously positive by real-time PCR. Sequencing of the fragment amplified by hemi-nested PCR allowed for the identification of genotype A of C. psittaci in one sample. The results of this experiment show that the real-time PCR targeting the 16S rRNA gene followed by melting curve analysis can be used for diagnosis of Chlamydophila sp. in fecal samples of asymptomatic birds. The classification of the Chlamydophila species and the genotype of C. psittaci must be accomplished by PCR targeting the ompA gene and sequencing of the amplified fragments.

Detecção e classificação molecular de Chlamydophila psittaci em amostras fecais de aves assintomáticas / Detection and molecular characterization of Chlamydophila psittaci in asymptomatic birds

Chlamydophila psittaci é uma bactéria que causa doença respiratória ou sistêmica em aves e em seres humanos. Em vista do risco de transmissão para humanos, o objetivo deste estudo foi detectar a presença de Chlamydophila spp. em amostras de fezes ou suabes cloacais de aves assintomáticas. Foram colhidas 403 amostras fecais ou suabes cloacais, provenientes de aves domésticas, selvagens ou exóticas. As amostras foram submetidas à PCR em tempo real para C. psittaci, para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 16S do rRNA, utilizando o SsoFastTM EvaGreen® Supermix (Bio-Rad) e análise da curva de dissociação. Para determinação do genótipo de C. psittaci, foi usada a hemi-nested PCR visando à amplificação de fragmento parcial do gene OMP-A, realizada nas amostras positivas pela PCR em tempo real, seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. A PCR em tempo real revelou positividade em 17 (4,21%) amostras. A hemi-nested foi positiva em 2 amostras positivas pela PCR em tempo real. O genótipo A de C. psittaci foi identificado pelo sequenciamento de uma amostra amplificada pela hemi-nested PCR. Os resultados deste experimento demonstram que a PCR em tempo real, visando à amplificação de fragmento parcial da subunidade 16S do rRNA, seguida da análise da curva de dissociação, pode ser utilizada para detecção de DNA de Chlamydophila sp. em amostras fecais de aves assintomáticas. A classificação da espécie de Chlamydophila e do genótipo de C. psittaci deve ser realizada por meio de PCR tendo como alvo o gene ompA e sequenciamento dos fragmentos amplificados.(AU)

Chlamydophila psittaci is a bacterium that causes respiratory or systemic disease in birds and humans. Owing to the risk of transmission from asymptomatic birds to humans, the objective of this study was to detect the presence of Chlamydophila spp. in asymptomatic birds. Four hundred and three fecal samples or cloacal swabs were collected from domestic, wild or exotic birds. The 403 samples were examined by real time PCR specific for the 16S subunit of rRNA gene using SsoFastEvaGreen®SupermixTM (Bio-Rad) and melting curve analysis. Hemi-nested PCR specific for the OMP-A gene, accomplished in real-time PCR positive samples, was followed by sequencing of the amplified fragments to determine the genotype of C. psittaci. Real-time PCR was positive in 17 (4.21%) samples. Hemi-nested PCR revealed positivity in two samples previously positive by real-time PCR. Sequencing of the fragment amplified by hemi-nested PCR allowed for the identification of genotype A of C. psittaci in one sample. The results of this experiment show that the real-time PCR targeting the 16S rRNA gene followed by melting curve analysis can be used for diagnosis of Chlamydophila sp. in fecal samples of asymptomatic birds. The classification of the Chlamydophila species and the genotype of C. psittaci must be accomplished by PCR targeting the ompA gene and sequencing of the amplified fragments.(AU)

Polymorphism in cathelicidin gene (CAMP) that alters Hypoxia-inducible factor (HIF-1α::ARNT) binding is not associated with tuberculosis.

Polymorphisms in the CAMP gene (cathelicidin) have not been tested in tuberculosis susceptibility. We tested polymorphisms rs9844812 (HIF-1α::ARNT binding site) and rs56122065 (CAMP) plus rs1800972 (DEFB1). SNP rs1800972 was associated with extrapulmonary tuberculosis (EPTB) in a codominant model (genotype CG, P = 0.037, OR 4.82; 95% CI: 0.92-47.42; statistical power, 82%), but not PTB (P = 0.101) in a Mexican population.

DETECÇÃO DE Cryptosporidium parvum EM ÉGUAS E POTROS / DETECTION OF Cryptosporidium parvum IN MARES AND FOALS

A primeira descrição de Cryptosporidium infectando equinos ocorreu em potros árabes imunocomprometidos. A ocorrência da criptosporidiose pode variar conforme a localização geográfica, clima, manejo, população e método diagnóstico utilizado. Informações a respeito da epidemiologia molecular para investigação do potencial zoonótico da infecção pelo protozoário nesses hospedeiros ainda são escassas. Com o objetivo de caracterizar molecularmente o protozoário Cryptosporidium spp em equinos, foram examinados 92 potros (56 machos e 36 fêmeas) com idade entre três a 330 dias e 24 matrizes provenientes de 11 fazendas da região Noroeste do Estado de São Paulo, Brasil. Os animais eram das raças Quarto de Milha, Mangalarga Marchador, Paint Horse, Crioula e Pampa. Amostras fecais foram colhidas diretamente da ampola retal dos animais e congeladas para a realização da nested-PCR com amplificação de fragmentos da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico. As amostras positivas foram submetidas ao sequenciamento para identificação das esp&a