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Cell Rep ; 36(11): 109705, 2021 09 14.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-34525377

RESUMO

Mouse embryonic stem cells (mESCs) can be maintained in vitro in defined N2B27 medium supplemented with two chemical inhibitors for GSK3 and MEK (2i) and the cytokine leukemia inhibitory factor (LIF), which act synergistically to promote self-renewal and pluripotency. Here, we find that genetic deletion of the four genes encoding the TCF/LEF transcription factors confers mESCs with the ability to self-renew in N2B27 medium alone. TCF/LEF quadruple knockout (qKO) mESCs display dysregulation of several genes, including Aire, Dnmt3l, and IcosL, located adjacent to each other within a topologically associated domain (TAD). Aire, Dnmt3l, and IcosL appear to be regulated by TCF/LEF in a ß-catenin independent manner. Moreover, downregulation of Aire and Dnmt3l in wild-type mESCs mimics the loss of TCF/LEF and increases mESC survival in the absence of 2iL. Hence, this study identifies TCF/LEF effectors that mediate exit from the pluripotent state.


Assuntos
Autorrenovação Celular , Fator 1-alfa Nuclear de Hepatócito/genética , Fator 1 de Ligação ao Facilitador Linfoide/genética , Proteína 1 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/genética , Proteína 2 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/genética , Animais , Benzamidas/farmacologia , Autorrenovação Celular/efeitos dos fármacos , Meios de Cultura/química , Meios de Cultura/farmacologia , DNA (Citosina-5-)-Metiltransferases/antagonistas & inibidores , DNA (Citosina-5-)-Metiltransferases/genética , DNA (Citosina-5-)-Metiltransferases/metabolismo , Difenilamina/análogos & derivados , Difenilamina/farmacologia , Regulação para Baixo/efeitos dos fármacos , Edição de Genes , Fator 1-alfa Nuclear de Hepatócito/deficiência , Fator 1-alfa Nuclear de Hepatócito/metabolismo , Ligante Coestimulador de Linfócitos T Induzíveis/antagonistas & inibidores , Ligante Coestimulador de Linfócitos T Induzíveis/genética , Ligante Coestimulador de Linfócitos T Induzíveis/metabolismo , Fator 1 de Ligação ao Facilitador Linfoide/deficiência , Fator 1 de Ligação ao Facilitador Linfoide/metabolismo , Camundongos , Células-Tronco Embrionárias Murinas/citologia , Células-Tronco Embrionárias Murinas/metabolismo , Fator 3 de Transcrição de Octâmero/genética , Fator 3 de Transcrição de Octâmero/metabolismo , Piridinas/farmacologia , Pirimidinas/farmacologia , Interferência de RNA , RNA Interferente Pequeno/metabolismo , Proteína 1 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/deficiência , Proteína 1 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/metabolismo , Proteína 2 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/deficiência , Proteína 2 Semelhante ao Fator 7 de Transcrição/metabolismo , Fatores de Transcrição/antagonistas & inibidores , Fatores de Transcrição/genética , Fatores de Transcrição/metabolismo , beta Catenina/deficiência , beta Catenina/genética , Proteína AIRE
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