RESUMO
Suspicion of Brazilian spotted fever (BSF) should occur in endemic regions upon surveillance of the acute febrile icteric hemorrhagic syndrome (AFIHS). However, limitations associated with currently available laboratory tests pose a challenge to early diagnosis, especially in fatal cases. Two real-time PCR (qPCR) protocols were evaluated to diagnose BSF in 110 fatal AFIHS cases, collected in BSF-endemic regions in 2009-2010. Of these, 24 were positive and 86 negative by indirect immunofluorescence (IFA) assay (cut-off IgG and/or IgM ≥ 128). DNA from these samples was used in the qPCR protocols: one to detect Rickettsia spp. (citrate synthase gene) and another to determine spotted fever group (SFG) Rickettsia species (OmpA gene). Of the 24 IFA-positive samples, 5 (21%) were positive for OmpA and 9 (38%) for citrate synthase. In the IFA-negative group (n=86), OmpA and citrate synthase were positive in 23 (27%) and 27 (31%), respectively. These results showed that the 2 qPCR protocols were about twice as sensitive as the IFA test alone (93% concordance). In conclusion, qPCR is a sensitive method for the diagnosis of fatal BSF cases and should be considered for routine surveillance of AFIHS in places like Brazil, where spotted fever-related lethality is high and other endemic diseases like dengue and leptospirosis can mislead diagnosis.
Assuntos
Técnicas de Diagnóstico Molecular/métodos , Patologia Molecular/métodos , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodos , Rickettsia/isolamento & purificação , Febre Maculosa das Montanhas Rochosas/diagnóstico , Anticorpos Antibacterianos/sangue , Proteínas da Membrana Bacteriana Externa/genética , Brasil , Citrato (si)-Sintase/genética , DNA Bacteriano/genética , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Humanos , Rickettsia/genética , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos iniciadores derivados de uma região gênica conservada que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da Imunofluorescência Indireta (IFI) para pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR após extração do DNA com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para o exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22%(11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com Grupo da Febre Maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento.
Assuntos
Masculino , Feminino , Humanos , Febre Maculosa das Montanhas Rochosas/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase , Rickettsia rickettsii , Técnica Indireta de Fluorescência para AnticorpoRESUMO
As aplicações da reação em cadeia pela polimerase (Nested PCR) foram avaliadas em comparação com a pesquisa de anticorpos e isolamento bacteriano, para o diagnóstico de casos fatais com suspeita de riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em amostras de soro. A PCR foi baseada na especificidade dos iniciadores derivados de uma região gênica conservada que codifica um antígeno de 17-kDa (htrA). Amostras de soro de 50 casos fatais suspeitos de riquetsioses do GFM foram testadas através da Imunofluorescência Indireta (IFI) para pesquisa de IgG e IgM e Nested PCR após extração do DNA com kit específico para extração de soro. O isolamento bacteriano foi realizado quando foram encaminhadas amostras adequadas para o exame. O fragmento específico de riquétsias GFM foi detectado em 40% (20/50) dos soros testados em comparação com 22% (11/50) detectados pelos métodos sorologia e isolamento bacteriano. Os produtos amplificados foram confirmados pela análise do sequenciamento de fragmentos de DNA apresentando 100% de identidade com R. rickettsii e com Grupo da Febre Maculosa. Os resultados obtidos indicam que a utilização da Nested PCR em amostras de soro aumenta a sensibilidade para o diagnóstico da FM em casos fatais com suspeita clínica da doença, sendo indicada sua aplicação em complemento à sorologia e ao isolamento.
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Humanos , Masculino , Feminino , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Febre Maculosa das Montanhas Rochosas/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase , Rickettsia rickettsiiRESUMO
A febre maculosa brasileira foi reconhecida no Estado de São Paulo, pela primeira vez, em 1929. Após um período de silêncio, constatou-se sua reemergência com a confirmação laboratorial dos primeiros casos em Pedreira, em 1987, seguindo-se registros em Campinas e São João da Boa Vista, Piracicaba, Salto, Mogi das Cruzes, Santo André, São Bernardo, Diadema, Ribeirão Pires, Mauá e a Capital. A doença passou a ser de notificação compulsória no Estado de São Paulo a partir de 2002, porém o sistema de informação só foi implantado em 2007. De 2003 a 2008 foram confirmados 240 casos de FMB em território paulista, com 71 óbitos e letalidade que variou de 21,9% a 40,0%. Foram analisadas as fichas de investigação epidemiológica dos casos confirmados de acordo com Norma Técnica CVE (2002), segundo atributos: sexo, idade, local de infecção, quadro clínico, atividade relacionada à infecção. A FMB ocorreu em 61 municípios paulistas, 23 dos quais localizados na região de Campinas. A doença foi mais frequente no sexo masculino, na faixa etária acima de 10 anos de idade. O critério de confirmação foi sorológico em 69% dos casos. Não foi possível determinar a situação de risco em 17,5% dos casos (percentual mais elevado nos pacientes que evoluíram para o óbito). Observa-se que o percentual de exantema foi maior naqueles que se curaram (43,5%). Houve aumento do número de municípios com transmissão da doença. É preciso confirmar se está ocorrendo uma expansão das áreas de transmissão ou apenas uma melhor detecção de casos onde a doença era desconhecida.
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Febre Maculosa das Montanhas Rochosas , Febre Maculosa das Montanhas Rochosas/epidemiologiaRESUMO
The present study is an update review on the occurrence and diagnosis of rickettsial diseases in Brazil and Portugal, aiming at promoting their epidemiological surveillance in both countries. A literature review was carried out and unpublished data of laboratories and surveillance systems were presented. The results described the occurrence of rickettsial diseases and infections in Brazil and Portugal, including other new and still poorly understood rickettsial infections. Current diagnostic methods were discussed. As in many other countries, rickettsial diseases and infections seem to be an emerging public health problem. Treated as a minor problem for many decades, the interest in these infections has increased in both countries but further studies are needed to establish their role as a public health problem.
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Testes Imunológicos/métodos , Infecções por Rickettsia/epidemiologia , Animais , Vetores Artrópodes/parasitologia , Brasil/epidemiologia , Humanos , Incidência , Portugal/epidemiologia , Rickettsia/classificação , Rickettsia/imunologia , Infecções por Rickettsia/diagnóstico , Infecções por Rickettsia/transmissão , Carrapatos/parasitologiaRESUMO
O presente artigo é uma atualização sobre a ocorrência e diagnóstico das riquetsioses existentes no Brasil e Portugal, com o objetivo de incentivar e incrementar a vigilância epidemiológica dessas doenças nos dois países. Realizou-se levantamento bibliográfico e foram apresentados dados não publicados de laboratórios e serviços de epidemiologia. Os resultados descreveram a ocorrência das riquetsioses no Brasil e Portugal, inclusive aquelas recém-descritas, advindas de riquétsias de potencial patogênico ainda incerto. Os métodos diagnósticos atualmente empregados foram discutidos. Como em outros países, as riquetsioses parecem assumir crescente importância em saúde pública. Relegadas a um plano secundário por muitas décadas, o interesse por essas infecções tem aumentado nos dois países, mas ainda carece de investigação para esclarecer seu real significado em saúde pública.
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Carrapatos , Doenças Transmitidas por Carrapatos/diagnóstico , Doenças Transmitidas por Carrapatos/epidemiologia , Febre Botonosa/diagnóstico , Febre Botonosa/epidemiologia , Incidência , Infecções por Rickettsia/diagnóstico , Infecções por Rickettsia/epidemiologia , Brasil , PortugalRESUMO
Brazilian spotted fever (BSF) cases have been increasing in the state of São Paulo but no genomic information about local rickettsia isolated from humans has been well documented. We recovered spotted-fever group rickettsiae from a sample of patient blood cultured in Vero cells using the shell vial technique. Rickettsial DNA fragments (gltA, ompA, and, ompB genes) were detected, and analysis of the ompB gene base sequences showed identity with the Rickettsia rickettsii ompB sequence available in the GenBank.
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Proteínas da Membrana Bacteriana Externa/genética , DNA Bacteriano/genética , Infecções por Rickettsia/diagnóstico , Rickettsia rickettsii/genética , Animais , Sequência de Bases , Brasil , Pré-Escolar , Chlorocebus aethiops , Eletroforese em Gel de Ágar , Doenças Endêmicas , Humanos , Masculino , Reação em Cadeia da Polimerase , Infecções por Rickettsia/virologia , Carrapatos/microbiologia , Células VeroRESUMO
Brazilian spotted fever (BSF) cases have been increasing in the state of São Paulo but no genomic information about local rickettsia isolated from humans has been well documented. We recovered spotted-fever group rickettsiae from a sample of patient blood cultured in Vero cells using the shell vial technique. Rickettsial DNA fragments (gltA, ompA, and, ompB genes) were detected, and analysis of the ompB gene base sequences showed identity with the Rickettsia rickettsii ompB sequence available in the GenBank.
Assuntos
Animais , Pré-Escolar , Humanos , Masculino , Proteínas da Membrana Bacteriana Externa/genética , DNA Bacteriano/genética , Infecções por Rickettsia/diagnóstico , Rickettsia rickettsii/genética , Sequência de Bases , Brasil , Chlorocebus aethiops , Eletroforese em Gel de Ágar , Doenças Endêmicas , Reação em Cadeia da Polimerase , Infecções por Rickettsia/virologia , Carrapatos/microbiologia , Células VeroRESUMO
Febre maculosa brasileira (FMB), doença causada por riquétsias do grupo da febre maculosa (RGFM) transmitida por Amblyomma cajennense, é geralmente fatal quando não tratada precocemente. Métodos laboratoriais usuais (cultura em células Vero e RIFI) não permitem diagnósticos conclusivos da maioria dos casos verificados no Estado de São Paulo, onde o agente ainda não está devidamente caracterizado. Através da PCR e Southern blotting, foram pesquisados genes riquetsiais (gltA, ompA e ompB), em 20 amostras de coágulos sangüíneos humanos sintomáticos (São Paulo), 19 com resultados prévios negativos por métodos convencionais. Cerca de 95% dos pacientes foram positivos pela PCR. A seqüência de bases do gene ompB, a amostra 3, apresentou similaridade de 98% com Ricketsii. Dos 75 lotes de A. cajennense (n=1483), coletados na mesma região endêmica, 09 resultaram positivos em células Veroe, em 22 detectou-se o gene ompA (RGFM). Seqüenciamento e análise das amostras amplificadas poderão contribuir para o completo esclarecimento do ciclo das riquétsias na região.
