RESUMO
Using STD NMR experiments, we have studied the binding epitopes of p-nitrophenyl glycosides of sialic acid and analogs thereof when bound to Trypanosoma cruzi trans-sialidase (TSia). Time-dependent NMR spectra yielded data on the rate of substrate hydrolysis in comparison to sialic acid transfer. Our experiments clearly demonstrate that shortening of the glycerol side chain significantly favors the transfer reaction over hydrolysis. Our results extend the basis on which specific trans-sialidase inhibitors may be designed.
Assuntos
Glicoproteínas/metabolismo , Neuraminidase/metabolismo , Tripanossomicidas/farmacologia , Trypanosoma cruzi/enzimologia , Animais , Desenho de Fármacos , Inibidores Enzimáticos/síntese química , Inibidores Enzimáticos/farmacologia , Glicoproteínas/antagonistas & inibidores , Glicoproteínas/química , Hidrólise , Cinética , Ligantes , Espectroscopia de Ressonância Magnética/métodos , Neuraminidase/antagonistas & inibidores , Neuraminidase/química , Proteínas de Protozoários/efeitos dos fármacos , Proteínas de Protozoários/metabolismo , Ácidos Siálicos/química , Ácidos Siálicos/metabolismo , Especificidade por SubstratoAssuntos
Glicoproteína Associada a Mielina/química , Ácido N-Acetilneuramínico/síntese química , Oligossacarídeos/síntese química , Configuração de Carboidratos , Sequência de Carboidratos , Glicosilação , Ligantes , Dados de Sequência Molecular , Glicoproteína Associada a Mielina/metabolismo , Ácido N-Acetilneuramínico/química , Ácido N-Acetilneuramínico/metabolismo , Oligossacarídeos/química , Ligação ProteicaRESUMO
Terminally sialylated oligosaccharides were synthesised employing recombinant trans-sialidase from Trypanosoma cruzi. Regio- and stereoselectively Sia-alpha(2-3)-Gal-betaR derivatives could be obtained in respectable yields, using combined chemical and enzymatic methodologies. An array of different disaccharide precursors such as Gal-beta(1-3)-GalNAc-alphaSer/Thr, lactosides and lactosamide derivatives were sialylated and successfully purified by facile isolation procedures. Depending on the acceptor structure isolated, yields for trans-sialylation products were between 20 and 60%.
