Application of PCR-SSP method for HLA-B*27 identification as an auxiliary tool for diagnosis of ankylosing spondylitis / Aplicação da metodologia de PCR-SSP na identificação de HLA-B*27 como auxílio ao diagnóstico de espondilite anquilosante

ABSTRACT INTRODUCTION: Human leukocyte antigens (HLA) are molecules that present antigen to the immune system; their presence or absence have been described as an influential factor in some diseases. HLA-B*27 is an HLA polymorphism that has been associated with increased susceptibility to ankylosing spondylitis (AS) and other spondyloarthropaty. The detection of HLA-B*27 has been used as diagnostic and prognostic tool in these cases, as well as in the differential diagnosis of other diseases. OBJECTIVE: Standardize the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) methodology for use in the Immunogenetics Laboratory of the Universidade Estadual de Maringá (UEM), considering its specificity and cost-effectiveness. MATERIAL AND METHODS: A total of 30 individuals without AS positive for HLA-B*27 allele and 10 AS negative individuals, were previously tested by PCR-sequence specific oligonucleotide (PCR-SSO) and, in this study, by PCR-SSP. RESULTS: One hundred percent of the patients tested confirmed their results, even with different subtypes. CONCLUSION: Considering the high reproducibility and the broad spectrum of subtypes covering, it was concluded that the PCR-SSP identifying method for HLA-B*27 can be used as a routine diagnostic tool for spondyloarthropathies.

RESUMO INTRODUÇÃO: Os antígenos leucocitários humanos (HLA) são moléculas que apresentam antígenos ao sistema imune; a presença ou a ausência deles é descrita como fator influente em algumas doenças. O HLA-B*27 é um polimorfismo do HLA que tem sido associado à maior predisposição à espondilite anquilosante (EA) e a outras espondiloartropatias. A detecção do HLA-B*27 é utilizada como ferramenta diagnóstica e prognóstica nesses casos, assim como no diagnóstico diferencial de outras doenças. OBJETIVO: Padronizar a metodologia de reação em cadeia da polimerase-iniciador específico (PCR-SSP) para utilização no Laboratório de Imunogenética da Universidade Estadual de Maringá (UEM), considerando sua especificidade e seu custo-benefício. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizados 30 indivíduos comprovadamente sem EA positivos para o alelo HLA-B*27 e 10 indivíduos negativos, testados previamente por PCR-oligonucleotídeo específico (PCR-SSO) e, neste estudo, por PCR-SSP. RESULTADOS: Cem por cento dos pacientes testados tiveram seus resultados confirmados, mesmo com diferentes subtipos. CONCLUSÃO: Tendo em vista a alta reprodutibilidade e o amplo espectro de subtipos que abrange, concluiu-se que a técnica de identificação de PCR-SSP para o HLA-B*27 pode ser utilizada como auxílio diagnóstico de rotina para espondiloartropatias.

Digestibility and bioavailability of phosphorus from spray-dried yeasts in the diet of starting pigs (15-30 kg) / Digestibilidade e biodisponibilidade do fósforo da levedura em dieta de suínos na fase inicial (15-30 kg)

Two experiments were carried out to determine the bioavailability of phosphorus in two spray-dried yeasts sugarcane yeast (SCY), and sugarcane yeast + brewers yeast (SCBY) in starting pigs, by comparing different methods (Apparent Digestibility Coefficient of Phosphorus ADCP; True Digestibility Coefficient of Phosphorus TDCP; slope ratio; and standard curve). In experiment I, a digestibility assay were carried out using 30 cross breed pig with initial weigh of 22.69 4.24kg, allotted in a completely randomized design. The mean ADCP and TDCP values were 62.68 and 64.15% for SCY and 77.01 and 79.33% for SCBY. ADCP and TDCP for SCBY were higher (P<0.05) than the values for SCY. In Experiment II, a growth test was conducted, 56 crossbred piglets, were utilized, with initial live weight of 15.11 ± 3.43kg, allotted in a completely randomized design, with seven treatments, four replications, and two pigs per experimental unit. The treatments consisted of a basal diet without supplementation with P and the same diet including supplementation with two levels of P (0.053% and 0.105%) from dicalcium phosphate, SCY and SCBY. The relative bioavailability mean value of 57.23% for SCY and 91.96% for SCBY, corresponding to 0.30% and 0.40% of available phosphorus, respectively.

Foram conduzidos dois experimentos para determinar a biodisponibilidade do fósforo de duas leveduras secas por spray-dry, LEV35 = Cana-de-açúcar e LEV40 = Cana-de-açúcar+cervejaria para suínos na fase inicial, comparando diferentes metodologias (Coeficiente de Digestibilidade Aparente-CDAP e Verdadeira-CDVP do fósforo, Método da Relação dos Coeficientes de Regressão ou Slope Ratio e o Método da Curva Padrão). No Experimento I foi conduzido um ensaio de digestibilidade utilizando 30 leitões mestiços, com 22,69 4,24kg de peso vivo, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado. Os valores médios de CDAP e CDVP foram 62,68 e 64,15% para a LVE35 e 77,01 e 79,33% para a LEV40. Os CDAP e CDVP para a LEV40 foram maiores (P<0,05) que os valores da LEV35. No Experimento II foi conduzido um ensaio de crescimento, utilizando 56 leitões mestiços, com peso inicial de 15,11 ± 3,43kg, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado com sete tratamentos, quatro repetições e dois animais por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta basal sem suplementação de P e a mesma com suplementação de dois níveis de fósforo (0,053 e 0,105) provenientes do fosfato bicálcico, LEV35 e LEV40. A biodisponibilidade relativa do fósforo foi diferente (P<0,05) para as duas leveduras, sendo o valor médio de 57,23% para a LEV35 e 91,96% para a LEV40, o que corresponde a 0,30% e 0,40% de fósforo disponível, respectivamente.

Digestibility and bioavailability of phosphorus from spray-dried yeasts in the diet of starting pigs (15-30 kg) / Digestibilidade e biodisponibilidade do fósforo da levedura em dieta de suínos na fase inicial (15-30 kg)

Two experiments were carried out to determine the bioavailability of phosphorus in two spray-dried yeasts sugarcane yeast (SCY), and sugarcane yeast + brewers yeast (SCBY) in starting pigs, by comparing different methods (Apparent Digestibility Coefficient of Phosphorus ADCP; True Digestibility Coefficient of Phosphorus TDCP; slope ratio; and standard curve). In experiment I, a digestibility assay were carried out using 30 cross breed pig with initial weigh of 22.69 4.24kg, allotted in a completely randomized design. The mean ADCP and TDCP values were 62.68 and 64.15% for SCY and 77.01 and 79.33% for SCBY. ADCP and TDCP for SCBY were higher (P<0.05) than the values for SCY. In Experiment II, a growth test was conducted, 56 crossbred piglets, were utilized, with initial live weight of 15.11 ± 3.43kg, allotted in a completely randomized design, with seven treatments, four replications, and two pigs per experimental unit. The treatments consisted of a basal diet without supplementation with P and the same diet including supplementation with two levels of P (0.053% and 0.105%) from dicalcium phosphate, SCY and SCBY. The relative bioavailability mean value of 57.23% for SCY and 91.96% for SCBY, corresponding to 0.30% and 0.40% of available phosphorus, respectively.(AU)

Foram conduzidos dois experimentos para determinar a biodisponibilidade do fósforo de duas leveduras secas por spray-dry, LEV35 = Cana-de-açúcar e LEV40 = Cana-de-açúcar+cervejaria para suínos na fase inicial, comparando diferentes metodologias (Coeficiente de Digestibilidade Aparente-CDAP e Verdadeira-CDVP do fósforo, Método da Relação dos Coeficientes de Regressão ou Slope Ratio e o Método da Curva Padrão). No Experimento I foi conduzido um ensaio de digestibilidade utilizando 30 leitões mestiços, com 22,69 4,24kg de peso vivo, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado. Os valores médios de CDAP e CDVP foram 62,68 e 64,15% para a LVE35 e 77,01 e 79,33% para a LEV40. Os CDAP e CDVP para a LEV40 foram maiores (P<0,05) que os valores da LEV35. No Experimento II foi conduzido um ensaio de crescimento, utilizando 56 leitões mestiços, com peso inicial de 15,11 ± 3,43kg, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado com sete tratamentos, quatro repetições e dois animais por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta basal sem suplementação de P e a mesma com suplementação de dois níveis de fósforo (0,053 e 0,105) provenientes do fosfato bicálcico, LEV35 e LEV40. A biodisponibilidade relativa do fósforo foi diferente (P<0,05) para as duas leveduras, sendo o valor médio de 57,23% para a LEV35 e 91,96% para a LEV40, o que corresponde a 0,30% e 0,40% de fósforo disponível, respectivamente.(AU)

Casca de café melosa ensilada na alimentação de suínos na fase inicial / Sticky coffee hull silage on pig starter feeding

Dois experimentos foram conduzidos, objetivando determinar o valor nutricional e verificar o desempenho de leitões na fase de inicial, alimentados com rações contendo casca de café melosa ensilada (CCEn). Os alimentos estudados foram casca de café melosa (CCM) e CCEn. No Experimento I, foi conduzido um ensaio de digestibilidade utilizando 15 suínos mestiços, machos castrados, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado. A CCM foi moída em peneira de diâmetro de 4 mm e ensilada com a adição de 30 por cento de água e inoculante enzimo-bacteriano. De forma geral, o processo de ensilagem não melhorou a digestibilidade da casca de café melosa. No Experimento II, foram utilizados 60 leitões (15,52 ± 2,19 a 32,52 ± 3,51 kg), distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, com cinco tratamentos (0, 4, 8, 12 e 16 por cento de CCEn), seis repetições e dois animais por unidade experimental. Não foi verificado efeito da inclusão de CCEn sobre o consumo diário de ração, ganho diário de peso, conversão alimentar e nitrogênio da uréia plasmática. Conclui-se que a casca de café melosa ensilada apresenta bom valor nutricional e pode ser utilizada em até 16 por cento na alimentação de leitões na fase inicial (15-30 kg), sem prejuízo no desempenho, entretanto deve-se avaliar a viabilidade econômica em função da relação de preços dos ingredientes utilizados.

Two experiments were carried out aiming to determine the nutritional value and to verify performance of starting piglets, fed on sticky coffee hull silage (SCHS) diets. The evaluated feeds were sticky coffee hull (SCH) and SCHS. In the Experiment I, a digestibility trial was carried out using fifteen crossbreed barrows, allotted in a completely randomized design. The SCH was ground on a 4 mm screen-opening diameter and was ensilaged with 30 percent water and enzymatic-bacterial inoculants. In general, the process of ensilage did not improve the SCHS digestibility. In the Experiment II, 60 piglets (15.52 ± 2.19 to 32.52 ± 3.51 kg) were used, allotted in a completely randomized design with five treatments (0, 4, 8, 12, and 16 percent SCHS), six replicates and two pigs per pen (experimental unit). There were no effects of SCHS inclusion on daily feed intake, daily weight gain, feed to gain ratio and plasma urea nitrogen. It is concluded that SCHS has good nutritional value and can be included up to 16 percent in starting piglets (15-30 kg) diets without impairing performance, however the economical feasibility of using SCHS will depend on the price of the feedstuffs.

Metabolizable energy requirement for starting barrow pigs (15 to 30 kg) fed on the ideal protein concept based diets

A exigência de energia metabolizável (EM) para suínos machos castrados foi determinada no presente experimento. Foram utilizados 43 suínos geneticamente melhorados, distribuídos em delineamento experimental de blocos inteiramente casualizados, com quatro tratamentos, cinco blocos e dois animais por unidade experimental. Tratamento 1 constituiu-se de uma dieta contendo 3.264 kcal de EM/kg contendo 0,96% de lisina digestível, 0,55% de metionina + cistina digestíveis, 0,60% de treonina digestível e 0,188% de triptofano digestível, atendendo ao conceito de proteína ideal. Tratamentos 2, 3 e 4 foram semelhantes à do Tratamento 1, onde os níveis de energia foram 2, 4 e 6% maiores que o Tratamento 1. A relação lisina/EM foi mantida constante (2,82 g) em todos tratamentos. O consumo diário de ração e conversão alimentar não foram influenciados pelos níveis crescentes de EM. Ocorreu aumento linear do ganho diário de peso, consumo diário de energia, porcentagem de gordura e taxa de deposição de gordura. Houve redução linear da porcentagem de proteína na carcaça. Os resultados sugerem que, para suínos (15 - 30 kg) machos castrados, geneticamente melhorados, alimentados com dietas de 0,96% de lisina, formuladas de acordo com o conceito de proteína ideal, a exigência de energia metabolizável é de 3.264 kcal/kg ou menos.

Utilização do milheto (Pennisetum glaucum (L. ) R. Brown) grão na alimentação de suínos na fase inicial (15-30kg de peso vivo) / Utilization of pearl millet (Pennisetum glaucum (L. ) R. Brown) grain on feeding of starting pigs

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização do milheto (Pennisetum glaucum, (L.) R. Brown) na alimentação de suínos na fase inicial (15 aos 30kg de peso vivo). Foi conduzido um experimento de desempenho, utilizando-se 48 leitões híbridos comerciais, sendo metade machos e metade fêmeas, com peso inicial de 14,9 ± 2,01kg. Utilizou-se a variedade IAPAR-IA98301 de milheto (MS: 90,61 por cento; PB: 11,64 por cento; Ca: 0,05 por cento, P: 0,29 por cento e 3.181kcal ED kg-1). Foi utilizado o delineamento de blocos casualizados, com quatro tratamentos (0, 20, 40 e 60 por cento de inclusão de milheto), seis repetições e dois animais por unidade experimental. A inclusão do milheto em rações para suínos na fase inicial não influenciou o consumo diário de ração, o ganho diário de peso, a conversão alimentar e o custo em ração por quilograma de suíno produzido. Em uma relação onde o preço do milheto corresponde a 70 por cento do preço do milho, o custo em ração do quilograma de suíno produzido também não foi alterado. Os resultados sugerem que o milheto IAPAR-IA98301 pode ser incluído em rações de suínos na fase inicial até o nível de 60 por cento.

Nitrogen balance of starting barrow pigs fed on increasing lysine levels

Foi realizado um experimento para se determinar o efeito de níveis crescentes de lisina sobre o balanço de nitrogênio de suínos, alimentados com rações de baixo teor protéico. Doze suínos machos castrados em fase inicial (20,0 ± 1,8 kg) foram distribuídos em 4 tratamentos (dietas) com níveis crescentes de lisina total (08, 1,0 1,2 e 1,4%). Os níveis de metionina, treonina e triptofano foram mantidos constantes em relação à lisina. Foram coletadas fezes e urina durante o período de cinco dias. Foram determinados os nitrogênios excretados na urina (NEU), total excretado (NTE), retido (NR), a utilização líquida da proteína (ULP), o valor biológico da proteína dietética (VBPD), o nitrogênio da uréia plasmática (NUP) e urinária (NUU). O NUP foi altamente correlacionado com o VBPD (-0,84), ULP (-0,76), NEU (0,79) e NR (-0,78). O melhor aproveitamento da proteína dietética e a menor excreção de nitrogênio foram obtidos com 1,1% de lisina total. O NUP é eficiente para indicar a utilização de aminoácidos pelos suínos.