Evaluation of corpus luteum vascularization in recipient mares by using color Doppler ultrasound

Background: Embryo transfer is one of the most commonly used reproductive biotechnique. The success of embryotransfer is also affected by the synchrony of estrus and ovulation between donor and recipient animals. In horse reproduction, ultrasonography has been used, among other purposes, to diagnose early pregnancy. However, only the color Dopplerimaging mode makes it possible to evaluate the vascular architecture and the hemodynamic aspects of the vessels in severalorgans, especially the corpus luteum. The objective of this study was to evaluate, based on the color Doppler ultrasound,the corpus luteum vascularization and function from recipient mares at embryo transfer timing.Materials, Methods & Results: Mangalarga Machador mares from 5 to 10-year-old and a range of live weights of between350 to 450 kg were used for this experiment, kept in pasture-based on mombaça grass (Panicum maximum) and were givenad libitum access to water and mineral supplementation. The animals (n = 15) were gynecologically examined and uterineconsistency was evaluated by rectal palpation the same operator using an ultrasound system (SonoScape®) with a lineartransducer, and operating frequency ranging from 5 to 10 Mhz. The uterine tone was classified between grades 1 and 4 andsubjected to ovulation induction. The objective and subjective vascular perfusion of the corpus luteum was evaluated bycolor Doppler ultrasound on the day of embryo transfer and endometrium. The determination progesterone concentrationon the day of the embryo transfer was performed by direct chemiluminescence assay. The arcsine (√P/100) transformation was applied to the percentage data, and the results were expressed as mean (.) ± standard error of the mean (SEM).Further, the assumptions of normality and homoscedasticity were verified, respectively, based on the Shapiro-Wilk and...(AU)

Evaluation of corpus luteum vascularization in recipient mares by using color Doppler ultrasound

Background: Embryo transfer is one of the most commonly used reproductive biotechnique. The success of embryotransfer is also affected by the synchrony of estrus and ovulation between donor and recipient animals. In horse reproduction, ultrasonography has been used, among other purposes, to diagnose early pregnancy. However, only the color Dopplerimaging mode makes it possible to evaluate the vascular architecture and the hemodynamic aspects of the vessels in severalorgans, especially the corpus luteum. The objective of this study was to evaluate, based on the color Doppler ultrasound,the corpus luteum vascularization and function from recipient mares at embryo transfer timing.Materials, Methods & Results: Mangalarga Machador mares from 5 to 10-year-old and a range of live weights of between350 to 450 kg were used for this experiment, kept in pasture-based on mombaça grass (Panicum maximum) and were givenad libitum access to water and mineral supplementation. The animals (n = 15) were gynecologically examined and uterineconsistency was evaluated by rectal palpation the same operator using an ultrasound system (SonoScape®) with a lineartransducer, and operating frequency ranging from 5 to 10 Mhz. The uterine tone was classified between grades 1 and 4 andsubjected to ovulation induction. The objective and subjective vascular perfusion of the corpus luteum was evaluated bycolor Doppler ultrasound on the day of embryo transfer and endometrium. The determination progesterone concentrationon the day of the embryo transfer was performed by direct chemiluminescence assay. The arcsine (√P/100) transformation was applied to the percentage data, and the results were expressed as mean (.) ± standard error of the mean (SEM).Further, the assumptions of normality and homoscedasticity were verified, respectively, based on the Shapiro-Wilk and...

Influence of male-to-female ratio and climatic conditions on the reproductive performance of Anglo Nubian goats / Influência da proporção macho/fêmea e condições climáticas sobre a performance reprodutiva de caprinos Anglo-Nubianos

The objective of this study was to test the “male effect” on the reproductive performance of Anglo Nubian does (n = 180), aged between 24 and 60 months, under different male-to-female ratios (1:20 T20, 1:30 T30, and 1:40 T40) and climatic conditions (dry season DS, and rainy season RS). Does were randomly distributed into three groups (T20, T30, and T40) and were isolated from bucks at a distance of 300 m for 60 days before the start of the experiments. The first manifestation of estrous during the DS occurred 6.83 ± 4.54 (T20), 6.72 ± 4.56 (T30) and 7.05 ± 5.23 (T40) days following the onset of the breeding season (P>0.05). In the RS, onset of estrous was observed 6.60 ± 4.74 (T20), 6.70 ± 4.43 (T30) and 7.46 ± 4.54 (T40) days after the beginning of the breeding season (P>0.05). Estrous induction in females during the DS occurred in 95% (T20), 80% (T30), and 75.5% (T40) of all females. During the RS, estrous detection reached 100% (T20), 100% (T30), and 97.5% (T40) of all females, with no difference between all RS and DS groups. Estrous synchronization during the DS occurred in 35.00% (T20), 36.66% (T30), and 32.50% (T40) of all females, for an average occurrence of 34.72%. During the RS, synchronization occurred in 65% (T20), 70% (T30) and 62.25% (T40) of all females, for an average occurrence of 65.75%; no difference was detected between the RS and the DS. Pregnancy rates in the DS groups were 65.0% (T20), 70.0% (T30), and 62.5% (T40), while pregnancy rates in the RS were 90.0% (T20), 86.6% (T30), and 95.0% (T40). No difference was observed for conception rates between any of the RS and DS groups. Prolificacy during the DS was 1.30 (T20), 1.30 (T30) and 1.35 (T40), while in the RS prolificacy was 1.29 (T20), 1.25 (T30) and 1.30 (T40). Thus, the male effect can be used effectively for goats under 1:20–1:40 male-to-female ratios in a 45-day mating season under varying climatic conditions.(AU)

O objetivo do presente trabalho foi testar o “efeito macho” sobre o desempenho reprodutivo de cabras Anglo Nubianas (n = 180), com idade entre 24 e 60 meses, sob diferentes proporções macho:fêmea (1:20 - T20, 1:30 - T30, e 01:40 - T40) e condições climáticas (estação seca - ES, e estação chuvosa - EC). As fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos (T20, T30 e T40), e foram mantidas separadas dos machos a distância de 300 m por 60 dias antes do início do experimento. A primeira manifestação de estro na ES ocorreu 6,83 ± 4,54 (T20), 6,72 ± 4,56 (T30) e em 7,05 ± 5,23 (T40) dias após o início da época de reprodução (P>0,05). Na EC, o início do estro foi observado 6,60 ± 4,74 (T20), 6,70 ± 4,43 (T30) e 7,46 ± 4,54 (T40) dias após o início da época de reprodução (P>0,05). A indução de estro na ES chegou em 95% (T20), 80% (T30), e 75,5% (T40) das fêmeas. Na EC, a detecção do estro atingiu 100% (T20), 100% (T30), e 97,5% (T40), sem diferença entre as épocas do ano. Sincronização de estro durante ES ocorreu em 34,72%, 35,00% (T20), 36,66% (T30), e 32,5 % (T40) das fêmeas. Na EC, a sincronização ocorreu em 65,75% das fêmeas, 65% (T20), 70% (T30) e 62,25% (T40), sem apresentar diferença estatística (P>0,05) entre EC e ES. A taxa de gestação nos grupos ES foi de 65,0% (T20), 70,0% (T30), e 62,5% (T40), enquanto que em EC foi de 90,0% (T20), 86,6% (T30), e de 95,0% (T40), sem diferença estatística (P>0,05) entre EC e ES. A prolificidade durante ES foi 1,30 (T20), 1,30 (T30) e 1,35 (T40) e na EC foi 1,29 (T20), 1,25 (T30) e 1,30 (T40). Em conclusão, o efeito macho pode ser utilizado com as proporções 1:20-1:40 macho:fêmea, em estação de monta de 45 dias de duração sob condições climáticas diferentes.(AU)

Influence of male-to-female ratio and climatic conditions on the reproductive performance of Anglo Nubian goats / Influência da proporção macho/fêmea e condições climáticas sobre a performance reprodutiva de caprinos Anglo-Nubianos

The objective of this study was to test the “male effect” on the reproductive performance of Anglo Nubian does (n = 180), aged between 24 and 60 months, under different male-to-female ratios (1:20 – T20, 1:30 – T30, and 1:40 – T40) and climatic conditions (dry season – DS, and rainy season – RS). Does were randomly distributed into three groups (T20, T30, and T40) and were isolated from bucks at a distance of 300 m for 60 days before the start of the experiments. The first manifestation of estrous during the DS occurred 6.83 ± 4.54 (T20), 6.72 ± 4.56 (T30) and 7.05 ± 5.23 (T40) days following the onset of the breeding season (P>0.05). In the RS, onset of estrous was observed 6.60 ± 4.74 (T20), 6.70 ± 4.43 (T30) and 7.46 ± 4.54 (T40) days after the beginning of the breeding season (P>0.05). Estrous induction in females during the DS occurred in 95% (T20), 80% (T30), and 75.5% (T40) of all females. During the RS, estrous detection reached 100% (T20), 100% (T30), and 97.5% (T40) of all females, with no difference between all RS and DS groups. Estrous synchronization during the DS occurred in 35.00% (T20), 36.66% (T30), and 32.50% (T40) of all females, for an average occurrence of 34.72%. During the RS, synchronization occurred in 65% (T20), 70% (T30) and 62.25% (T40) of all females, for an average occurrence of 65.75%; no difference was detected between the RS and the DS. Pregnancy rates in the DS groups were 65.0% (T20), 70.0% (T30), and 62.5% (T40), while pregnancy rates in the RS were 90.0% (T20), 86.6% (T30), and 95.0% (T40). No difference was observed for conception rates between any of the RS and DS groups. Prolificacy during the DS was 1.30 (T20), 1.30 (T30) and 1.35 (T40), while in the RS prolificacy was 1.29 (T20), 1.25 (T30) and 1.30 (T40). Thus, the male effect can be used effectively for goats under 1:20–1:40 male-to-female ratios in a 45-day mating season under varying climatic conditions.

O objetivo do presente trabalho foi testar o “efeito macho” sobre o desempenho reprodutivo de cabras Anglo Nubianas (n = 180), com idade entre 24 e 60 meses, sob diferentes proporções macho:fêmea (1:20 - T20, 1:30 - T30, e 01:40 - T40) e condições climáticas (estação seca - ES, e estação chuvosa - EC). As fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos (T20, T30 e T40), e foram mantidas separadas dos machos a distância de 300 m por 60 dias antes do início do experimento. A primeira manifestação de estro na ES ocorreu 6,83 ± 4,54 (T20), 6,72 ± 4,56 (T30) e em 7,05 ± 5,23 (T40) dias após o início da época de reprodução (P>0,05). Na EC, o início do estro foi observado 6,60 ± 4,74 (T20), 6,70 ± 4,43 (T30) e 7,46 ± 4,54 (T40) dias após o início da época de reprodução (P>0,05). A indução de estro na ES chegou em 95% (T20), 80% (T30), e 75,5% (T40) das fêmeas. Na EC, a detecção do estro atingiu 100% (T20), 100% (T30), e 97,5% (T40), sem diferença entre as épocas do ano. Sincronização de estro durante ES ocorreu em 34,72%, 35,00% (T20), 36,66% (T30), e 32,5 % (T40) das fêmeas. Na EC, a sincronização ocorreu em 65,75% das fêmeas, 65% (T20), 70% (T30) e 62,25% (T40), sem apresentar diferença estatística (P>0,05) entre EC e ES. A taxa de gestação nos grupos ES foi de 65,0% (T20), 70,0% (T30), e 62,5% (T40), enquanto que em EC foi de 90,0% (T20), 86,6% (T30), e de 95,0% (T40), sem diferença estatística (P>0,05) entre EC e ES. A prolificidade durante ES foi 1,30 (T20), 1,30 (T30) e 1,35 (T40) e na EC foi 1,29 (T20), 1,25 (T30) e 1,30 (T40). Em conclusão, o efeito macho pode ser utilizado com as proporções 1:20-1:40 macho:fêmea, em estação de monta de 45 dias de duração sob condições climáticas diferentes.

Avaliação de embriões ovinos provenientes de oócitos submetidos a estresse calórico durante a maturação in vitro / Evaluation of sheep oocytes submitted to heat stress induced during in vitro maturation

Neste trabalho foi avaliado o efeito do estresse calórico durante a maturação de oócitos sobre a produção in vitro de embriões ovinos. Os ovários foram obtidos em abatedouro e os oócitos colhidos de folículos de 2 a 6 mm de diâmetro. Após seleção, os oócitos, em 10 replicações, foram colocados para maturação in vitro (MIV) durante 24 horas. Os oócitos submetidos ao estresse térmico de 41º C durante 3, 6, 12, 18 e 24 horas foram posteriormente transferidos para completar a MIV a 39 ºC, mesma temperatura utilizada para maturação dos oócitos do grupo controle. O desenvolvimento dos embriões foi determinado nos dias 3, 4, 5 e 8 pós-fecundação. A avaliação da qualidade dos embriões foi efetuada através da contagem total de células coradas pelo DAPI e da determinação do número de blastômeros positivos para apoptose através do teste de TUNEL. Observou-se que o estresse térmico diminuiu (P < 0,05) a capacidade de maturação dos oócitos de acordo com o tempo de exposição à temperatura de 41º C. No grupo de oócitos incubados a 39 C, 70,70% maturou, enquanto que nos grupos expostos ao estresse térmico, apenas 45,28%, 35,17%, 12,30%, 9,74% e 4,60% maturaram, respectivamente, após 3, 6, 12, 18 e 24 horas de incubação. A duração de exposição dos oócitos ao estresse calórico é inversamente proporcional (P < 0,05) à capacidade de desenvolvimento embrionário e diretamente proporcional (P < 0,05) ao número de blastocistos positivos para apoptose. Todavia, o efeito deletério do estresse térmico sobre a clivagem e os embriões nos estádios de 8 a 16 células e de mórula foi crescente (P > 0,05) somente até 18 horas de incubação. Os resultados permitem concluir que o estresse calórico durante a maturação in vitro de oócitos reduz a quantidade e a qualidade dos embriões ovinos produzidos in vitro determinadas pela alta incidência de apoptose.(AU)

The aim of this work was evaluate the effect of heat stress during oocyte maturation on ovine in vitro embryo production. Ovaries were collected at abattoirs and oocytes retrieved from follicles ranging from 2 and 6 mm in diameter. After selection, all oocytes, in 10 replicates, were placed in in vitro maturation (IVM) during 24 hours. The oocytes were submitted to heat stress of 41º C during 3, 6, 12, 18 and 24 hours and were further transferred to 39º C in order to complete IVM, which was the temperature of maturation of control oocytes. Embryonic development was determined on days 3, 4, 5, and 8 post-fertilization. Embryo evaluation was performed as total cell count by DAPI staining and determination of positive blastomere for apoptosis by the TUNEL assay. We observed that heat stress diminishes (P < 0.05) oocyte maturation capacity in accordance with exposure time of 41º C. In the group of oocytes incubated at 39 ºC, 70.70% matured, while in the groups exposed to heat stress of 41º C, only 45.28%, 35.17%, 12.30%, 9.74% and 4.60% matured, respectively, after 3, 6, 12, 18 and 24 hours of incubation. The duration of exposure to heat stress is inversely proportional (P < 0.05) to embryonic developmental capacity directly proportional (P < 0.05) to the number of blastocysts positive to apoptosis. However, the cleavage rate and embryonic development from 8 to 16 cells and morulae stages were affected by heat stress (P > 0.05) only up to 18 hours of incubation. The results allow the conclusion that heat stress during oocyte in vitro maturation reduces the quantity and quality of ovine embryos produced in vitro determined by the high incidence of apoptosis.(AU)

Avaliação de embriões ovinos provenientes de oócitos submetidos a estresse calórico durante a maturação in vitro / Evaluation of sheep oocytes submitted to heat stress induced during in vitro maturation

Neste trabalho foi avaliado o efeito do estresse calórico durante a maturação de oócitos sobre a produção in vitro de embriões ovinos. Os ovários foram obtidos em abatedouro e os oócitos colhidos de folículos de 2 a 6 mm de diâmetro. Após seleção, os oócitos, em 10 replicações, foram colocados para maturação in vitro (MIV) durante 24 horas. Os oócitos submetidos ao estresse térmico de 41º C durante 3, 6, 12, 18 e 24 horas foram posteriormente transferidos para completar a MIV a 39 ºC, mesma temperatura utilizada para maturação dos oócitos do grupo controle. O desenvolvimento dos embriões foi determinado nos dias 3, 4, 5 e 8 pós-fecundação. A avaliação da qualidade dos embriões foi efetuada através da contagem total de células coradas pelo DAPI e da determinação do número de blastômeros positivos para apoptose através do teste de TUNEL. Observou-se que o estresse térmico diminuiu (P 0,05) somente até 18 horas de incubação. Os resultados permitem concluir que o estresse calórico durante a maturação in vitro de oócitos reduz a quantidade e a qualidade dos embriões ovinos produzidos in vitro determinadas pela alta incidência de apoptose.

The aim of this work was evaluate the effect of heat stress during oocyte maturation on ovine in vitro embryo production. Ovaries were collected at abattoirs and oocytes retrieved from follicles ranging from 2 and 6 mm in diameter. After selection, all oocytes, in 10 replicates, were placed in in vitro maturation (IVM) during 24 hours. The oocytes were submitted to heat stress of 41º C during 3, 6, 12, 18 and 24 hours and were further transferred to 39º C in order to complete IVM, which was the temperature of maturation of control oocytes. Embryonic development was determined on days 3, 4, 5, and 8 post-fertilization. Embryo evaluation was performed as total cell count by DAPI staining and determination of positive blastomere for apoptosis by the TUNEL assay. We observed that heat stress diminishes (P 0.05) only up to 18 hours of incubation. The results allow the conclusion that heat stress during oocyte in vitro maturation reduces the quantity and quality of ovine embryos produced in vitro determined by the high incidence of apoptosis.

Influência das estações seca e chuvosa na capacidade de desenvolvimento de oócitos e produção in vitro de embriões da espécie caprina / Influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro embryo production in goats

Objetivou-se com este estudo determinar a influência das estações seca e chuvosa na maturação de oócitos e produção in vitro (PIV) de embriões na espécie caprina. Os ovários das cabras nas estações seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de "slicing" dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na classificação morfológica. Foram realizadas 12 repetições, nas quais os CCOs foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro dos embriões. A média e desvio padrão da taxa de clivagem foi determinada no dia 3 (D-3) e dos embriões que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células, mórula e blastocisto foi determinada nos dias 4 (D-4), 5 (D-5) e 8 (D-8) após a fecundação, respectivamente. A quantidade de blastômeros foi determinada com o corante DAPI e os blastômeros positivos para apoptose por meio do teste de TUNEL. A produção de embriões no D-3 e mórulas foram inferiores ao obtido no período chuvoso (P < 0,05). Não apresentaram diferenças (P > 0,05) quanto às fases de maturação, fertilização, cultivo no D-4 e blastocisto. Os embriões produzidos na estação seca apresentaram maior incidência de apoptose (P < 0,05). Nas condições descritas neste estudo, os resultados permitem concluir que as fases iniciais do desenvolvimento embrionário sofrem maior impacto negativo durante a estação seca em protocolos de PIV na espécie caprina.(AU)

This study aimed to determine the influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro production (IVP) of embryos in goats. The ovaries of does in dry (October to March) and rainy season (April-September) were collected at a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing of the follicles from 2 to 6 mm in diameter, and selected based on morphologic classification. We used 12 replicates, in which the COCs were submitted to maturation, fertilization and in vitro culture. The cleavage rate was determined on day 3 (D-3) and embryos that developed to 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) stages after fertilization. The number of blastomeres was assessed with DAPI staining, and the determination of apoptotic blastomeres was performed by TUNEL assay. In the dry season, D-3 embryos and morulae development was lower than that obtained in the rainy season (P<0.05). However, no differences (P>0.05) were observed on oocyte maturation, fertilization, D-4 embryo yield and blastocyst development. Embryos produced during the dry season had a higher incidence of apoptosis on D- 3 and at the morulae stage (P<0.05). Under the conditions described in this study, the results suggest that the early stages of embryonic development suffer greater negative impact during the dry season in IVP protocols in goats.(AU)

Influência das estações seca e chuvosa na capacidade de desenvolvimento de oócitos e produção in vitro de embriões da espécie caprina / Influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro embryo production in goats

Objetivou-se com este estudo determinar a influência das estações seca e chuvosa na maturação de oócitos e produção in vitro (PIV) de embriões na espécie caprina. Os ovários das cabras nas estações seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de "slicing" dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na classificação morfológica. Foram realizadas 12 repetições, nas quais os CCOs foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro dos embriões. A média e desvio padrão da taxa de clivagem foi determinada no dia 3 (D-3) e dos embriões que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células, mórula e blastocisto foi determinada nos dias 4 (D-4), 5 (D-5) e 8 (D-8) após a fecundação, respectivamente. A quantidade de blastômeros foi determinada com o corante DAPI e os blastômeros positivos para apoptose por meio do teste de TUNEL. A produção de embriões no D-3 e mórulas foram inferiores ao obtido no período chuvoso (P 0,05) quanto às fases de maturação, fertilização, cultivo no D-4 e blastocisto. Os embriões produzidos na estação seca apresentaram maior incidência de apoptose (P < 0,05). Nas condições descritas neste estudo, os resultados permitem concluir que as fases iniciais do desenvolvimento embrionário sofrem maior impacto negativo durante a estação seca em protocolos de PIV na espécie caprina.

This study aimed to determine the influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro production (IVP) of embryos in goats. The ovaries of does in dry (October to March) and rainy season (April-September) were collected at a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing of the follicles from 2 to 6 mm in diameter, and selected based on morphologic classification. We used 12 replicates, in which the COCs were submitted to maturation, fertilization and in vitro culture. The cleavage rate was determined on day 3 (D-3) and embryos that developed to 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) stages after fertilization. The number of blastomeres was assessed with DAPI staining, and the determination of apoptotic blastomeres was performed by TUNEL assay. In the dry season, D-3 embryos and morulae development was lower than that obtained in the rainy season (P0.05) were observed on oocyte maturation, fertilization, D-4 embryo yield and blastocyst development. Embryos produced during the dry season had a higher incidence of apoptosis on D- 3 and at the morulae stage (P<0.05). Under the conditions described in this study, the results suggest that the early stages of embryonic development suffer greater negative impact during the dry season in IVP protocols in goats.

Avaliação de oócitos caprinos submetidos à estresse calórico induzido durante a maturação in vitro / Evaluation of Goat Oocytes Subjected to Heat Stress Induced During Maturation In Vitro

Background: The low productivity of Northeast goat herds has been circumvented by the importation of exotic species; however, caution is needed due to the susceptibility of these breeds to the high temperatures found in this region. It is now known that the oocyte and the embryo are the primary targets of the deleterious effects induced by heat stress, causing cellular damage that triggers the cascade of apoptosis. Therefore, the purpose of this study was to evaluate the effect of thermal heat stress during in vitro maturation of oocytes and its effects on embryo production in goats. Materials, Methods & Results: The ovaries were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing the follicles from 2 to 6 mm in diameter, selected based on morphology and placed in a basic medium for maturation. In 10 replications, the COCs were submitted to the thermal heat stress at 41°C for 0 (thermoneutrality at 39°C), 3, 6, 12, 18, and 24 h of maturation in vitro. The data was evaluated in maturation, fertilization, cleavage (D-3), stage of 8-16 cells (D4), morula (D-5), and blastocyst (D-8) after fertilization and blastocysts positive for apoptosis through the TUNEL test. For statistics, the results were expressed as mean and standard deviation. Also considering the measurements addressed in percentages, a comparison of variances was carried out, F-test for variances to the level of signifi cance 5% (P < 0.05). Then, a t-test to compare averages was conducted, to the significance level of 5%, for equivalent variances or distinct variances, according to what was observed in the F-test for variances. A signifi cant difference (P < 0.05) was observed during all time periods studied for heat stress on maturation, fertilization, D-3, D-4, and D-5. On D-8 no significant difference (P > 0.05) was observed between the periods of 3 vs 6 and 18 vs 24 h, and in the blastocysts positive by the TUNEL test for the periods of 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18, and 18 vs 24 h of heat stress. Discussion: When applying a thermal shock that produces damage to the oocyte maturation in vitro, the characteristic membrane, chromatin configuration, and meiotic spindles are changed, and thus, the developmental potential of oocytes after fertilization is compromised. It was observed in this study that there was a gradual reduction in the number of oocytes as the time of exposure to heat shock increased, reflecting directly on each stage of IVP embryos. These stages are most vulnerable during maturation in vivo (ovulation), fertilization, within two days after fertilization, and in the first division of cleavage, as evidenced in this study in vitro after heat stress, reducing the number of blastocysts. This suggests that apoptosis can be induced in pre-implantation of embryos exposed to maternal hyperthermia. Moreover, the degree of apoptosis experienced by IVP embryos generally reflects the severity of thermal shock. In this study, the percentage of cells that were TUNEL positive increased with the prolongation of thermal shock. Induction of apoptosis was time dependent and the number of apoptotic cells increased proportionally after 6, 12, 18, and 24 h of exposure. Under the conditions observed in this study, the results indicate that the time in which the oocyte is exposed to heat stress during maturation in vitro is of great importance for embryonic development and their level of apoptotic cells.

Sincronização de estro com prostaglandina F2 alfa versus progestágeno associado à gonadotrofina coriônica equina (ecg) em ovelhas santa inês no Distrito Federal, Brasil / Estrus synchronization with prostaglandin F2 alfa compared to progestogen treatment associated with equine chorionic gonadotropin (ecg) in santa inês breed ewes reared in Federal District, Brazil

Este estudo teve por objetivo comparar o uso de um análogo da PGF2alfa à associação de progestágeno (MAP) com gonadotrofina coriônica equina (eCG) na sincronização do estro em ovelhas da raça Santa Inês. Foram utilizadas 38 fêmeas ovinas submetidas a dois protocolos de sincronização de estro, com os seguintes protocolos: PGF2alfa (duas doses de 0,53 mg de D-cloprostenol com nove dias de intervalo) e protocolo MAP+eCG (pessário intravaginal com 50 mg de acetato de medroxiprogesterona por doze dias e no momento da remoção do dispositivo aplicação de 250 UI de eCG, IM). Submeteram-se as ovelhas aos diferentes protocolos, com intervalo de dois ciclos estrais. Procedeu-se a uma ultrassonografia transretal no último dia do protocolo, para avaliação do diâmetro do maior e do segundo maior folículo, e à coleta de sangue no dia sete do ciclo estral, para avaliação da concentração sérica de P4. Exame laparoscópico foi realizado no dia 11, após o fim dos protocolos, para contagem de corpos lúteos. Para os parâmetros taxa de sincronização, diâmetro do maior e do segundo maior folículo, período do final do protocolo ao estro e taxa de ovulação, não se observaram diferenças entre os mesmos. Foi observado que o protocolo MAP+eCG produziu concentrações séricas de P4 maiores do que o protocolo PGF2alfa (3,9 e 2,8 ng/ mL, respectivamente, P<0,05). Nas condições do presente estudo, embora o protocolo MAP+eCG tenha apresentado superioridade em relação à concentração sérica de P4, o protocolo PGF2alfa foi tão eficiente quanto aquele em sincronizar o estro.(AU)

The aim of this study was to compare two protocols of estrus synchronization in Santa Inês ewes. Thirty-eight ewes were randomly divided into two groups of estrus synchronization: protocol PGF2alpha (two doses of 0.530 mg of PGF2alpha, nine days apart) and protocol MAP+eCG (intravaginal sponge impregnated with medroxyprogesterone acetate, for 12 days, and then an injection of 250 IU of eCG). The experiment was in a cross-over design, two estrous cycles apart. On the final day of protocol, a transrectal ultrasound examination was carried out to measure the size of the largest and second largest ovarian follicles and on day 7 of estrous cycle blood was collected to measure serum P4 concentration. Laparoscopy was carried out on day 11 after the end of protocols to count corpora lutea. Synchronization rate, size of largest and second largest ovarian follicles, interval between the end of the protocol to estrus and ovulation rate did not differ between protocols. Ewes synchronized with MAP+eCG had greater serum P4 concentrations than ewes synchronized with PGF2alpha (3.9 and 2.8 ng/mL, respectively, P<0.05). Based on the results, it may be concluded that, although the protocol MAP+eCG was superior in inducing higher serum concentration of P4, the protocol PGF2alpha was equivalent regarding estrus synchronization.(AU)

Sincronização de estro com prostaglandina F2 alfa versus progestágeno associado à gonadotrofina coriônica equina (ecg) em ovelhas santa inês no Distrito Federal, Brasil / Estrus synchronization with prostaglandin F2 alfa compared to progestogen treatment associated with equine chorionic gonadotropin (ecg) in santa inês breed ewes reared in Federal District, Brazil

Este estudo teve por objetivo comparar o uso de um análogo da PGF2alfa à associação de progestágeno (MAP) com gonadotrofina coriônica equina (eCG) na sincronização do estro em ovelhas da raça Santa Inês. Foram utilizadas 38 fêmeas ovinas submetidas a dois protocolos de sincronização de estro, com os seguintes protocolos: PGF2alfa (duas doses de 0,53 mg de D-cloprostenol com nove dias de intervalo) e protocolo MAP+eCG (pessário intravaginal com 50 mg de acetato de medroxiprogesterona por doze dias e no momento da remoção do dispositivo aplicação de 250 UI de eCG, IM). Submeteram-se as ovelhas aos diferentes protocolos, com intervalo de dois ciclos estrais. Procedeu-se a uma ultrassonografia transretal no último dia do protocolo, para avaliação do diâmetro do maior e do segundo maior folículo, e à coleta de sangue no dia sete do ciclo estral, para avaliação da concentração sérica de P4. Exame laparoscópico foi realizado no dia 11, após o fim dos protocolos, para contagem de corpos lúteos. Para os parâmetros taxa de sincronização, diâmetro do maior e do segundo maior folículo, período do final do protocolo ao estro e taxa de ovulação, não se observaram diferenças entre os mesmos. Foi observado que o protocolo MAP+eCG produziu concentrações séricas de P4 maiores do que o protocolo PGF2alfa (3,9 e 2,8 ng/ mL, respectivamente, P<0,05). Nas condições do presente estudo, embora o protocolo MAP+eCG tenha apresentado superioridade em relação à concentração sérica de P4, o protocolo PGF2alfa foi tão eficiente quanto aquele em sincronizar o estro.

The aim of this study was to compare two protocols of estrus synchronization in Santa Inês ewes. Thirty-eight ewes were randomly divided into two groups of estrus synchronization: protocol PGF2alpha (two doses of 0.530 mg of PGF2alpha, nine days apart) and protocol MAP+eCG (intravaginal sponge impregnated with medroxyprogesterone acetate, for 12 days, and then an injection of 250 IU of eCG). The experiment was in a cross-over design, two estrous cycles apart. On the final day of protocol, a transrectal ultrasound examination was carried out to measure the size of the largest and second largest ovarian follicles and on day 7 of estrous cycle blood was collected to measure serum P4 concentration. Laparoscopy was carried out on day 11 after the end of protocols to count corpora lutea. Synchronization rate, size of largest and second largest ovarian follicles, interval between the end of the protocol to estrus and ovulation rate did not differ between protocols. Ewes synchronized with MAP+eCG had greater serum P4 concentrations than ewes synchronized with PGF2alpha (3.9 and 2.8 ng/mL, respectively, P<0.05). Based on the results, it may be concluded that, although the protocol MAP+eCG was superior in inducing higher serum concentration of P4, the protocol PGF2alpha was equivalent regarding estrus synchronization.

Efeito do diâmetro folicular sobre a qualidade dos oócitos obtidos de ovários de ovelhas (Ovis aries) e cabras (Capra hircus) / Effect of follicular diameter on the quality of oocyte obtained from ovaries of sheeps (Ovis aries) and goats (capra hircus)

O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência do diâmetro folicular sobre a qualidade dos oócitos obtidos de ovários de fêmeas ovinas e caprinas. Utilizaram-se 156 ovários de ovelhas e 105 de cabras, provenientes de abatedouro. Os folículos foram mensurados, aspirados e divididos em três classes de diâmetro folicular: classe 1 (CI) 2 a 3 mm, classe 2 (CII) 4 a 5 mm e classe 3 (CIII) 6 mm. Os oócitos recuperados foram avaliados e classificados quanto ao aspecto morfológico em cinco grupos de qualidade: grau 1 (GI), grau 2 (GII), grau 3 (GIII), desnudo (D) e atrésicos (A). Dos 468 folículos aspirados de ovinos, foram encontrados 327 CI, 84 CII, 57 CIII e 83 GI, 78 GII, 95 GIII, 119 D, 93 A. E dos 422 folículos aspirados de caprinos, foram encontrados 197 CI, 132 CII, 92 CIII e 64 GI, 70 GII, 91 GIII, 123 D, 74 A. Os dados obtidos demonstram não haver correlações significativas entre qualidade dos oócitos e diâmetro dos folículos (P > 0,05). Nas condições em que se desenvolveu este estudo, os resultados permitem concluir que o diâmetro folicular não exerce influência sobre a qualidade do complexo cumulus-oócito (COC) recuperado de ovários de fêmeas ovinas e caprinas.(AU)

This study aimed to evaluate the influence of follicular diameter on the quality of oocytes from ovaries of female sheep and goats. The ovaries of sheep (156 units) and goats (105 units) from slaughterhouse were used. The follicles were measured, aspirated and divided into three classes of follicular diameter: class 1 (CI) 2 to 3 mm, class 2 (CII) 4 to 5 mm and class 3 (CIII) 6 mm. The recovered oocytes were evaluated and classified according to morphological aspect in 5 quality groups: grade 1 (GI), grade 2 (GII), grade 3 (GIII), naked (N) and atresia (A). Of the 468 follicles aspirated from sheep, 327 CI, 84 CII, CIII 57 and 83 GI, 78 GII, GIII 95, 119 N, 93 A were found, and from the 422 follicles aspirated from goats 197 CI, 132 CII, 92 CIII and 64 GI, 70 GII, 91 GIII, 123 N, 74 A were found. The data did not show significant correlation between quality of oocytes and diameter of follicles (P > 0.05). Under the conditions observed in this study it was concluded that the follicular diameter has no influence on the quality of cumulus-oocyte complex (COC) recovered from the ovaries of female sheep and goats.(AU)

Efeito do diâmetro folicular sobre a qualidade dos oócitos obtidos de ovários de ovelhas (Ovis aries) e cabras (Capra hircus) / Effect of follicular diameter on the quality of oocyte obtained from ovaries of sheeps (Ovis aries) and goats (capra hircus)

O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência do diâmetro folicular sobre a qualidade dos oócitos obtidos de ovários de fêmeas ovinas e caprinas. Utilizaram-se 156 ovários de ovelhas e 105 de cabras, provenientes de abatedouro. Os folículos foram mensurados, aspirados e divididos em três classes de diâmetro folicular: classe 1 (CI) – 2 a 3 mm, classe 2 (CII) – 4 a 5 mm e classe 3 (CIII) – 6 mm. Os oócitos recuperados foram avaliados e classificados quanto ao aspecto morfológico em cinco grupos de qualidade: grau 1 (GI), grau 2 (GII), grau 3 (GIII), desnudo (D) e atrésicos (A). Dos 468 folículos aspirados de ovinos, foram encontrados 327 CI, 84 CII, 57 CIII e 83 GI, 78 GII, 95 GIII, 119 D, 93 A. E dos 422 folículos aspirados de caprinos, foram encontrados 197 CI, 132 CII, 92 CIII e 64 GI, 70 GII, 91 GIII, 123 D, 74 A. Os dados obtidos demonstram não haver correlações significativas entre qualidade dos oócitos e diâmetro dos folículos (P > 0,05). Nas condições em que se desenvolveu este estudo, os resultados permitem concluir que o diâmetro folicular não exerce influência sobre a qualidade do complexo cumulus-oócito (COC) recuperado de ovários de fêmeas ovinas e caprinas.

This study aimed to evaluate the influence of follicular diameter on the quality of oocytes from ovaries of female sheep and goats. The ovaries of sheep (156 units) and goats (105 units) from slaughterhouse were used. The follicles were measured, aspirated and divided into three classes of follicular diameter: class 1 (CI) – 2 to 3 mm, class 2 (CII) – 4 to 5 mm and class 3 (CIII) – 6 mm. The recovered oocytes were evaluated and classified according to morphological aspect in 5 quality groups: grade 1 (GI), grade 2 (GII), grade 3 (GIII), naked (N) and atresia (A). Of the 468 follicles aspirated from sheep, 327 CI, 84 CII, CIII 57 and 83 GI, 78 GII, GIII 95, 119 N, 93 A were found, and from the 422 follicles aspirated from goats 197 CI, 132 CII, 92 CIII and 64 GI, 70 GII, 91 GIII, 123 N, 74 A were found. The data did not show significant correlation between quality of oocytes and diameter of follicles (P > 0.05). Under the conditions observed in this study it was concluded that the follicular diameter has no influence on the quality of cumulus-oocyte complex (COC) recovered from the ovaries of female sheep and goats.

Sexagem fetal em ovelhas Santa Inês por ultra-sonografia / Fetal sexing in Santa Inês ewes by ultrasonography

O presente estudo teve a finalidade de identificar o sexo e de determinar o dia da migração do tubérculo genital (TG) de fetos ovinos através da ultra-sonografia em tempo real. O sexo foi identificado no Experimento I (EI) levando-se em consideração a localização do TG e no Experimento II (EII), a presença do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea. No EI, as fêmeas (n=17) foram monitoradas em intervalos de 12 horas, do 35o ao 46o dia de gestação, por via transretal com transdutor linear (6,0 e 8,0 MHz). No EII, as fêmeas (n=30) com gestação de 55 a 75 dias foram examinadas apenas uma vez, utilizando-se o mesmo transdutor e via de exame do EI. Das 17 fêmeas do EI, 11 (64,6 por cento) tiveram seus fetos corretamente sexados, independente da gestação ter sido simples (7/11), dupla (3/11) ou tríplice (1/11). Nas 6 (35,4 por cento) gestações restantes, 3 (17,7 por cento) foram duplas, sendo impossível sexar um feto de cada gestação. Nas outras 3 (17,7 por cento) gestações, os fetos foram corretamente sexados, apesar dos nascimentos não coincidirem com a quantificação. Num feto macho de uma gestação simples, a migração ocorreu no 37º dia e até o 46º, todos os fetos das outras gestações estavam corretamente sexados. Das 30 fêmeas do EII, 16 (53,4 por cento) apresentaram gestações simples e a acurácia da sexagem foi de 100 por cento. Nas 14 (46,6 por cento) restantes, as gestações foram duplas, sendo impossível, em quatro casos, determinar o sexo de, pelo menos, um dos gêmeos. De todos os fetos nascidos, a acurácia geral da sexagem foi de 88,0 por cento (EI) e 90,9 por cento (EII), não sendo observada diferença (P>0,05) entre ambos os experimentos. Os resultados permitem concluir que a ultra-sonografia em tempo real é um método eficiente para diagnosticar o sexo fetal pela visualização do TG, assim como pela identificação do pênis, prepúcio e bolsa escrotal no feto macho e das tetas, vulva e clitóris no feto fêmea, desde que os exames sejam realizados a partir do 50o dia de gestação.