Molecular detection of Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV) in uterine biopsies of dairy cows with or without reproductive problems / Detecção molecular do Vírus da Língua Azul (BTV) e do Vírus da Leucemia bovina (BLV) em amostras de biópsia uterina de vacas leiteiras com e sem problemas reprodutivos

Reproductive performance of dairy cows has a direct impact on herd productivity. Infectious agents, such as Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV), are associated with reproductive failure. However, it remains unknown if these viruses are present in the uterus and cause gestational loss. This study used molecular methods to assess if BTV and BLV can be detected in the uterus of serologically positive dairy cows with a record of abortions, stillbirths and repeat breeding (n=23) and without a record of reproductive problems (n =23). The cows came from three dairy herds of the state of Minas Gerais, Brazil. BTV was not detected in any of the uterine biopsies. Proviral DNA of BLV was detected in 54.5 % of the seropositive cows, but positivity for BLV in the uterus was not associated with the existence of reproductive problems. In conclusion, this study shows that BLV, but not BTV, is present in the uterus of seropositive cows, regardless of reproductive performance.

O desempenho reprodutivo das vacas leiteiras tem impacto direto na produtividade dos rebanhos. Agentes infecciosos como o Vírus da Língua Azul (BTV) e o Vírus da Leucemia Bovina (BLV) estãoassociados à ocorrência de falhas reprodutivas. Entretanto, não se sabe se estes vírus poderiam estar presentes no útero resultando nas perdas gestacionais. Este estudo utilizou métodos moleculares para investigar se os vírus BTV e BLV estão presentes no úterio de vacas leiteiras sorologicamente positivas com histórico de abortos, natimortos e repetição de cio (n=23) e em vacas sem histórico de problema reprodutivos (n =23) provenientes de três rebanhos leiteiros localizados no estado de Minas Gerais, Brasil. Não foi detectado BTV em nenhuma amostra de biópsia uterina. Por outro lado, o DNA proviral de BLV foi detectado no útero de 54.5 % das vacas soropositivas, independentemente da ocorrência de problemas reprodutivos. Conclui-se que o vírus BLV, ao contrário do BTV está presente no útero de vacas soropositivas, entretanto, sem associação com o desempenho reprodutivo.

Molecular detection of Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV) in uterine biopsies of dairy cows with or without reproductive problems / Detecção molecular do Vírus da Língua Azul (BTV) e do Vírus da Leucemia bovina (BLV) em amostras de biópsia uterina de vacas leiteiras com e sem problemas reprodutivos

Reproductive performance of dairy cows has a direct impact on herd productivity. Infectious agents, such as Bluetongue Virus (BTV) and Bovine Leukemia Virus (BLV), are associated with reproductive failure. However, it remains unknown if these viruses are present in the uterus and cause gestational loss. This study used molecular methods to assess if BTV and BLV can be detected in the uterus of serologically positive dairy cows with a record of abortions, stillbirths and repeat breeding (n=23) and without a record of reproductive problems (n =23). The cows came from three dairy herds of the state of Minas Gerais, Brazil. BTV was not detected in any of the uterine biopsies. Proviral DNA of BLV was detected in 54.5 % of the seropositive cows, but positivity for BLV in the uterus was not associated with the existence of reproductive problems. In conclusion, this study shows that BLV, but not BTV, is present in the uterus of seropositive cows, regardless of reproductive performance.(AU)

O desempenho reprodutivo das vacas leiteiras tem impacto direto na produtividade dos rebanhos. Agentes infecciosos como o Vírus da Língua Azul (BTV) e o Vírus da Leucemia Bovina (BLV) estãoassociados à ocorrência de falhas reprodutivas. Entretanto, não se sabe se estes vírus poderiam estar presentes no útero resultando nas perdas gestacionais. Este estudo utilizou métodos moleculares para investigar se os vírus BTV e BLV estão presentes no úterio de vacas leiteiras sorologicamente positivas com histórico de abortos, natimortos e repetição de cio (n=23) e em vacas sem histórico de problema reprodutivos (n =23) provenientes de três rebanhos leiteiros localizados no estado de Minas Gerais, Brasil. Não foi detectado BTV em nenhuma amostra de biópsia uterina. Por outro lado, o DNA proviral de BLV foi detectado no útero de 54.5 % das vacas soropositivas, independentemente da ocorrência de problemas reprodutivos. Conclui-se que o vírus BLV, ao contrário do BTV está presente no útero de vacas soropositivas, entretanto, sem associação com o desempenho reprodutivo.(AU)

Validation of the multiplex PCR for identification of Brucella spp / Validação da técnica de PCR multiplex para identificação de Brucella spp

A multiplex PCR technique for detection of Brucella spp. in samples of bacterial suspension was validated as a complementary tool in the diagnosis of the disease. This technique allows the characterization of the agent without performing biochemical tests, which greatly reduces the time for a final diagnosis, and provides more security for the analyst by reducing the time of exposure to microorganisms. The validation was performed in accordance with the Manual of Diagnostic Tests from OIE (2008) and following the requirements present in the ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. The mPCR validated in this study identified the different species of Brucella ( Brucella abortus , B. suis , B. ovis e B. melitensis ) of bacterial suspension obtained from the slaughterhouse samples, as well as distinguished the biovars (1, 2 e 4; 3b, 5, 6 e 9) of B. abortus in grouped form and differentiated the field strains from vaccine strains, as a quick, useful and less expensive technique in diagnosis of brucellosis in Brazil.(AU)

Validou-se neste trabalho uma técnica de PCR Multiplex (mPCR) para detecção de Brucella spp. em amostras de suspensão bacteriana, como ferramenta complementar no diagnóstico da doença. Esta técnica possibilita a caracterização do agente sem que seja necessária a realização de testes bioquímicos, o que diminui consideravelmente o tempo para o diagnóstico final, além de oferecer mais segurança ao analista ao diminuir o tempo de exposição ao agente infecioso. A validação foi realizada de acordo com o Manual de Testes de Diagnósticos da OIE (2008), seguindo as exigências presentes na norma de qualidade da ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. A mPCR validada neste trabalho identificou as diferentes espécies de Brucella ( Brucella abortus , B. suis , B. ovis e B. melitensis ) em suspensão bacteriana, obtidas a partir de amostras de frigorífico. Além disso, discriminou os biovares (1, 2 e 4; 3b, 5, 6 e 9) de B. abortus , de forma agrupada, e diferenciou cepa vacinal de cepa de campo, sendo esta uma técnica rápida, útil e de menor custo para o auxílio no diagnóstico de brucelose no Brasil.(AU)

Validation of the multiplex PCR for identification of Brucella spp. / Validação da técnica de PCR multiplex para identificação de Brucella spp.

ABSTRACT: A multiplex PCR technique for detection of Brucella spp. in samples of bacterial suspension was validated as a complementary tool in the diagnosis of the disease. This technique allows the characterization of the agent without performing biochemical tests, which greatly reduces the time for a final diagnosis, and provides more security for the analyst by reducing the time of exposure to microorganisms. The validation was performed in accordance with the Manual of Diagnostic Tests from OIE (2008) and following the requirements present in the ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. The mPCR validated in this study identified the different species of Brucella (Brucella abortus, B. suis, B. ovis e B. melitensis) of bacterial suspension obtained from the slaughterhouse samples, as well as distinguished the biovars (1, 2 e 4; 3b, 5, 6 e 9) of B. abortus in grouped form and differentiated the field strains from vaccine strains, as a quick, useful and less expensive technique in diagnosis of brucellosis in Brazil.

RESUMO: Validou-se neste trabalho uma técnica de PCR Multiplex (mPCR) para detecção de Brucella spp. em amostras de suspensão bacteriana, como ferramenta complementar no diagnóstico da doença. Esta técnica possibilita a caracterização do agente sem que seja necessária a realização de testes bioquímicos, o que diminui consideravelmente o tempo para o diagnóstico final, além de oferecer mais segurança ao analista ao diminuir o tempo de exposição ao agente infecioso. A validação foi realizada de acordo com o Manual de Testes de Diagnósticos da OIE (2008), seguindo as exigências presentes na norma de qualidade da ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. A mPCR validada neste trabalho identificou as diferentes espécies de Brucella (Brucella abortus, B. suis, B. ovis e B. melitensis) em suspensão bacteriana, obtidas a partir de amostras de frigorífico. Além disso, discriminou os biovares (1, 2 e 4; 3b, 5, 6 e 9) de B. abortus, de forma agrupada, e diferenciou cepa vacinal de cepa de campo, sendo esta uma técnica rápida, útil e de menor custo para o auxílio no diagnóstico de brucelose no Brasil.